【摘要】： 背景 白癜風是一種常見的色素障礙性皮膚病，近些年發(fā)病率有明顯增加的趨勢，其病因及發(fā)病機理至今尚不明確。表皮黑素細胞主要被累及，毛囊內的黑素細胞也可有一定程度的受累，迄今黑素細胞破壞的機制尚未完全闡明，目前有自身免疫學說、遺傳學說、神經學說、黑素細胞學說和角質形成細胞功能異常學說，但單一學說難以全面解釋清楚，目前認為本病是一種多因素綜合作用導致的疾病。大多數(shù)的研究傾向于自身免疫學說，近些年組織病理研究顯示：白斑處表皮黑素細胞消失，活動性白斑邊緣的真皮內有淋巴細胞浸潤，另外許多學者用不同的方法證實白癜風患者血清中含有抗黑素細胞的自身抗體，，且抗體滴度與病情活動性密切相關。本課題組曾用免疫組化和丫啶橙/溴化乙錠染色法驗證了白癜風血清中存在抗黑素細胞IgM、I8G抗體及血清IgG介導的補體反應對正常黑素細胞具有毒性作用。目前僅明確了其中幾種與白癜風相關的黑素細胞胞漿抗原，如酪氨酸酶、酪氨酸酶相關蛋白1(TRP1)及酪氨酸酶相關蛋白2(TRP2)，胞膜抗原則一直未被明確。盡管自身免疫性疾病的病因目前仍無法闡明，根據(jù)免疫學有關理論，機體對自身成份失去免疫耐受性是一個重要的環(huán)節(jié)，而這種自身抗原一般為機體的正常成份，疾病的發(fā)生可能系淋巴細胞的“禁忌株”失禁忌，從而導致異常自身免疫效應的B和/或T淋巴細胞克隆的出現(xiàn)。因此設法清 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 除識別相關抗原的B和／或T淋巴細胞克隆，有可能達到治療相關自身免 疫性疾病的目標。 本課題組目前正在進行白斑風相關抗體識別人源性黑素細胞抗原的 。DNA克隆及表位確定等方面的研究，擬將克隆純化的表位肽段做成親合 層析柱吸附患者體內的相關自身抗體，再將偶聯(lián)毒素的表位肽段注入體內 清除識別該抗原的淋巴細胞克隆，從理論上可清除失禁忌的病理性淋巴細 胞株，從而達到治療白匣風。 目的 檢測和分析白痰風相關的黑素細胞膜抗原，初步純化目的抗 原，作抗原的活性測定，為篩選、克隆黑素細胞膜抗原及膜抗原蛋白質測 序打下基礎。 方法 培養(yǎng)大量健康人黑素細胞（MC），裂解第六代黑素細胞，得到 可溶性黑素細胞抗原。同時活細胞ELISA法篩選高滴度白掇風患者IgG 血清。而后用黑素細胞抗原和高滴度 IgG血清作蛋白印跡（Western Blot＊ 檢測與白掇風自身抗體相結合的自身抗原是否存在，并分析其分子量及篩 選相對應的IgG血清，為進一步抗原的純化奠定基礎。biotinj利Hs生物 素標記黑素細胞裂解產物，50mMNH4CI終止反應，Protein A－Sepharose 預清除標記的黑素細胞抗原，加入篩選血清與 Protein A七epharose進行 免疫共沉淀，沉淀后的抗原抗體復合物煮沸后行SDS－PAGE電泳，免疫沉 淀復合物電印跡，在 NC膜上加 20mu加l的堿性磷酸酶標記的親合素，最 后用化學發(fā)光法檢測及鑒定。 結果238份白瘦風血清中，共獲1：200的高滴度陽性血清98例， 選取用于本研究的30份血清中，尋常型白瘦風27例，其中活動期26例、 穩(wěn)定期二例。節(jié)段型白癲風3例，均處于活動期。用高滴度抗正常人黑素 細胞膜抗原的白披風血清做免疫印跡檢測分析，30例患者均有數(shù)個陽性 條帶，正常人血清對照組僅 1例（10％）出現(xiàn)陽性條帶，白瘦風患者明顯 －3· 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 高于對照組什習1．00，AO．of人 白癬風血清中抗正常人黑素細胞抗體 主要針對的抗原分子量為 150KD、90 I｛D、75 KI）、50 KI）、40個5 I（l，其 中陽性率最高的抗原分子量為 75 p搶3們，其次為 150KDO0們、90 I｛D u 人 40葉5 KDQ3肋、50 KD門 人另外結果分析發(fā)現(xiàn)陽性條帶的 分子量大小及單個條帶出現(xiàn)頻率與白癲風分型、活動性及皮損面積無相關 性。 以 oestern Blot檢測結果中篩選 10例高滴度血清。均為尋常型、活 動期的白瘦風患者，選取的血清在免疫印跡檢測中90KD和75KD的抗原條 帶都為陽性，正常人對照血清4份。免疫沉淀、免疫印跡、化學發(fā)光法檢 測后發(fā)現(xiàn)10例患者均有陽性條帶。血清抗體主要針對的抗原分子量為 150KD、90 I｛D、75 KD、60 KD，陽性條帶最多的抗原分子量為 90 KD（6 例）和 75KD（6例），其次為 150 KD（4例）、60KD（4例）和 200KD（2 例）。 結論 白掇風患者血清中存在抗黑素細胞抗體，進一步支持了自身 免疫學說�？乖姆肿恿考s為150KD、90 KD、75 KD、50 KD、40－45 n。 而膜抗原分子量主要為 150KD、90 KD、75 KD，以往發(fā)現(xiàn)的一些小分子抗 原可能為大分子抗原的降解產物，通過免疫共沉淀初步純化了150KD、90 KD和75KD的抗原。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R758.41

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

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3 李志強,劉榮卿,高天文,趙小東,陳金穆;白癜風患者血清中抗黑素細胞膜表面抗原自身抗體的檢測[J];中華皮膚科雜志;2001年04期

本文編號：2653992