本文關(guān)鍵詞：腹側(cè)黃斑純合子小鼠的培育、表型分析及其突變基因的鑒定過(guò)程，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腹側(cè)黃斑小鼠(VYslac)為中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心工作人員在C57BL/6J(B6)小鼠正常生產(chǎn)繁殖過(guò)程中發(fā)現(xiàn)并分離的突變系小鼠,呈單基因顯性遺傳,表現(xiàn)為頭頸軀干的腹側(cè)面為黃色,其他部分被毛與背景品系一致為黑色。前期工作已經(jīng)將突變基因定位于第2號(hào)染色體上距著絲粒149804749bp與155060764bp間約5256015bp的范圍內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)在前期工作的基礎(chǔ)上培育了突變基因純合子小鼠、初步比較了表型差異,同時(shí)擴(kuò)大定位用樣本量,篩選更高密度的分子標(biāo)記將突變基因定位范圍縮小至523731bp,并對(duì)部分候選基因進(jìn)行測(cè)序鑒定,為建立相應(yīng)的人類疾病模型及基因功能研究打下良好的基礎(chǔ)。研究?jī)?nèi)容分為以下兩部分： 1腹側(cè)黃斑小鼠純合子(VYslac-m/m)的培育及表型分析 將雜合子黃斑小鼠(VYslac-m/-)GO互交2對(duì),在后代G1小鼠中,隨機(jī)選擇具有黃斑表型者(可能為突變基因雜合子或純合子)20只分別與背景品系B6小鼠交配,若G2小鼠出現(xiàn)正常表型,表明其G1親代為雜合子；若后代(大于20只)全部為具有黃斑的突變小鼠,則說(shuō)明其親代(G1)為突變基因純合子小鼠。一共篩選出純合子G1雄鼠2只,純合子G1雌鼠3只。將突變基因純合子G1小鼠雌雄交配且后代連續(xù)采用同窩交配的形式,已培育出VYslac-m/m小鼠至第7代。在此基礎(chǔ)上,我們將VYslac-m/m、VYslac-m/-及背景品系B6的部分表型特征進(jìn)行了比較。VYslac-m/m背部毛發(fā)的顏色及結(jié)構(gòu)與B6無(wú)明顯差異,腹部毛發(fā)顏色較B6淺淡,但結(jié)構(gòu)正常。VYslac-m/m背部皮膚的黑色素細(xì)胞數(shù)量及毛囊內(nèi)黑色素含量與B6小鼠無(wú)明顯差異,腹部皮膚組織內(nèi)的黑色素細(xì)胞數(shù)量及毛囊內(nèi)黑色素較B6小鼠含量少,分布稀疏。VYslac-m/m主要臟器的位置、形態(tài)結(jié)構(gòu)及組織病理等與B6小鼠比較均未發(fā)現(xiàn)明顯異常。VYslac-m/m與VYslac-m/-的表型比較中未發(fā)現(xiàn)明顯的差異,說(shuō)明了該突變的遺傳模式為完全顯性遺傳。 2腹側(cè)黃斑小鼠(VYslac)突變基因的精細(xì)定位及初步鑒定 在前期已經(jīng)將黃斑突變基因定位于第2號(hào)染色體上距著絲粒149804749bp到155060764bp之間約5256015bp的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)將VYslac與DBA/2交配得到Fl代,再將F1小鼠回交DBA/2J得到F2代,擴(kuò)大繁殖定位用的F2代小鼠總計(jì)526只；同時(shí)在前記及SNP標(biāo)記：D2mit285、D2mit495、D2mit411、rs27310903。利用這些標(biāo)記對(duì)526只F2代小鼠進(jìn)行連鎖分析,把突變基因定位在D2mit495及rs27310903(即距著絲粒154711297bp-155235028bp)之間,這一范圍約523731bp是前期結(jié)果的十分之一。通過(guò)對(duì)小鼠基因組數(shù)據(jù)庫(kù)查詢發(fā)現(xiàn)：該區(qū)域內(nèi)只有9個(gè)基因,分別為Gm14217、Gm14214、Raly、 Eif2s2、Agouti、Ahcy、Rik、Itch、Gm14227,其中Agouti基因顯性突變小鼠由于Agouti信號(hào)蛋白ASP的過(guò)度表達(dá)而伴有不同程度的黃色被毛,此外Raly和Eif2s2這兩個(gè)基因也可以通過(guò)影響Agouti基因的表達(dá)產(chǎn)生黃斑表型,而其他6個(gè)基因未查詢到與黃斑或色素表型的形成有關(guān),故我們將Agouti、Raly和Eif2s2定為黃斑候選基因,分別設(shè)計(jì)引物,從mRNA及基因組DNA水平對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序鑒定,但未發(fā)現(xiàn)Agouti、Raly和Eif2s2基因的編碼區(qū)存在堿基突變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,在基因組局部距著絲粒154711297bp至155235028bp之間523731bp范圍內(nèi)還存在著另外一個(gè)α基因的擬等位基因,或者在這一范圍的非編碼序列上存在重要的調(diào)控序列,相關(guān)工作有待進(jìn)一步開(kāi)展。
【關(guān)鍵詞】：腹側(cè)黃斑小鼠 表型分析 基因定位 基因鑒定
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R758.43;Q78
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 符號(hào)說(shuō)明8-9
• 文獻(xiàn)綜述：Agouti基因及其擬等位基因Raly、Eif2s2的結(jié)構(gòu)與功能9-23
• 參考文獻(xiàn)19-23
• 第一部分 腹側(cè)黃斑小鼠純合子(VY~(slac-m/m))的培育及表型分析23-32
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 第二部分 腹側(cè)黃斑小鼠(VY~(slac))突變基因的精細(xì)定位及初步鑒定32-58
• 1 材料與方法32-39
• 2 結(jié)果39-53
• 3 討論53-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 結(jié)論58-59
• 致謝59-60
• 攻讀學(xué)位期間完成的學(xué)術(shù)論文目錄60-61

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：腹側(cè)黃斑純合子小鼠的培育、表型分析及其突變基因的鑒定過(guò)程，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：264962