發(fā)布時(shí)間：2017-03-22 01:40

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)皮膚惡性黑素瘤生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的 皮膚惡性黑素瘤（cutaneous malignant melanoma，CMM）是一類(lèi)惡性程度極高的皮膚腫瘤，其發(fā)病率和死亡率有逐漸上升趨勢(shì)。近3年經(jīng)我院確診的黑素瘤相關(guān)病例也明顯增多，，隨訪發(fā)現(xiàn)患者不僅預(yù)后差，生存期也較其他皮膚腫瘤明顯縮短，嚴(yán)重危害人類(lèi)生命。皮膚惡性黑素瘤細(xì)胞極具早期侵襲和轉(zhuǎn)移特性，且與腫瘤轉(zhuǎn)歸差密切相關(guān)。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中有諸多因素和環(huán)節(jié)參與，如：機(jī)體免疫細(xì)胞、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、腫瘤微環(huán)境中各種細(xì)胞因子等。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是指浸潤(rùn)于腫瘤間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，是多數(shù)實(shí)體腫瘤組織中數(shù)量最多的炎癥細(xì)胞群。然而，TAMs在腫瘤侵襲進(jìn)展中的作用及機(jī)制目前尚存爭(zhēng)議。不同研究提示，TAMs可能兼有促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的雙重作用。TAMs在腫瘤中進(jìn)展中的作用可能受其分布、數(shù)量和表型三方面的影響，其中表型差異可能是影響腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。研究者根據(jù)巨噬細(xì)胞激活途徑及激活后作用的不同將其分為兩類(lèi)：經(jīng)干擾素-γ（Interferon-γ，INF-γ）及細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）等激活的巨噬細(xì)胞稱為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞（classical activated macrophage， caMφ或M1)，為一類(lèi)“抑癌細(xì)胞”；經(jīng)白介素-4（interleukin-4，IL-4)，白介素-13（interleukin-13，IL-13)等激活的巨噬細(xì)胞稱為替代激活的巨噬細(xì)胞(alternative activated macrophage，aaMφ或M2)，為一類(lèi)“促癌細(xì)胞”。TAMs在黑素瘤細(xì)胞侵襲進(jìn)展中的作用和影響機(jī)制目前尚不明確，值得進(jìn)一步研究。近年來(lái)隨著對(duì)腫瘤細(xì)胞間信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的影響有了更多了解，人們發(fā)現(xiàn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（Signaltransducer and activator of transcription，STAT3）是STATs家族的重要成員，是多種致癌途徑的焦點(diǎn)，參與調(diào)控相關(guān)靶基因的表達(dá)，其中就包括了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）。有研究表明VEGF是最重要的血管生成因子,可直接由STAT3信號(hào)通路調(diào)控，促進(jìn)腫瘤新生血管的生成，是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處侵襲轉(zhuǎn)移的重要因素之一。TAMs對(duì)惡性黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要作用，TAMs是否通過(guò)調(diào)節(jié)惡性黑素瘤中蛋白如STAT3、VEGF的表達(dá)，對(duì)惡性黑素瘤細(xì)胞的各種生物學(xué)行為造成影響，值得我們進(jìn)一步探究。 在本實(shí)驗(yàn)中，我們主要采用佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA)在體外成功誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD68的表達(dá)；隨后分別用LPS、IL-4刺激成M1型和M2型巨噬細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)IL-12p70和IL-10表達(dá)水平；建立巨噬細(xì)胞與惡性黑素瘤A375細(xì)胞體外共培養(yǎng)體系，分別運(yùn)用MTT法、Transwell小室法觀察不同激活途徑的巨噬細(xì)胞對(duì)A375細(xì)胞增殖、侵襲、遷移等生物學(xué)行為的影響；采用免疫組化法檢測(cè)CMM組織中CD68（標(biāo)記TAMs）及VEGF、STAT3蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，進(jìn)一步明確TAMs在CMM侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，探討其可能的作用機(jī)制。 方法 1巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)及表型鑒定 采用PMA將人單核細(xì)胞株U937誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞CD68的表達(dá)情況；分別采用細(xì)胞因子LPS和IL-4誘導(dǎo)為M1和M2型巨噬細(xì)胞，ELISA法檢測(cè)M1和M2型巨噬細(xì)胞IL-12p70和IL-10表達(dá)水平。 2TAMs對(duì)人惡性黑素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A375細(xì)胞接種于Transwell培養(yǎng)板（濾膜孔徑0.4μm）下層小室中孵育24h；將不同激活途徑的巨噬細(xì)胞與接種于Transwell小室（濾膜孔徑0.4μm）上層小室，建立體外共培養(yǎng)體系，每24小時(shí)采用MTT法檢測(cè)A375細(xì)胞增殖情況，共3天；將與不同激活途徑的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后的A375細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸，接種于Transwell小室（濾膜孔徑8μm）的上室面培養(yǎng)24小時(shí)，觀察濾膜下表面藍(lán)紫色胞漿的細(xì)胞，檢測(cè)不同激活途徑的巨噬細(xì)胞對(duì)A375細(xì)胞侵襲力和遷移力的影響。 3TAMs在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤(rùn)及與STAT3、VEGF蛋白表達(dá)間的關(guān)系 采用免疫組化法分別檢測(cè)CMM組織和色素痣組織中CD68（標(biāo)記TAMs）及VEGF、STAT3蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系。 結(jié)果 1巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)及表型鑒定 1) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞經(jīng)流式檢測(cè)表達(dá)巨噬細(xì)胞抗原CD68。 2) LPS及IL-4激活后的巨噬細(xì)胞分別表現(xiàn)為IL-12p70~(high)IL-10~(low)和IL-12p70~(low)IL-10~(high)，表明M1型和M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)成功。 3) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（Mφ）IL-12p70、IL-10的分泌水平與M2型巨噬細(xì)胞更為接近。 2TAMs對(duì)人惡性黑素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響 1) IL-4激活的M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移；LPS激活的M1型巨噬細(xì)胞抑制A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。 2) PMA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞（Mφ）更傾向于M2細(xì)胞的表型，對(duì)A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移起促進(jìn)作用。 3TAMs在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤(rùn)及與STAT3、VEGF蛋白表達(dá)間的關(guān)系 1) CMM組織中TAMs浸潤(rùn)與STAT3、VEGF蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，且三者均與Clark分級(jí)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。 2) TAMs可能通過(guò)調(diào)節(jié)STAT3、VEGF蛋白的表達(dá)，對(duì)CMM的發(fā)生和發(fā)展起促進(jìn)作用，有望為CMM的靶向性治療提供新思路。 結(jié)論 巨噬細(xì)胞可以在體外被成功誘導(dǎo)激活成不同表型，為巨噬細(xì)胞體外相關(guān)性研究帶來(lái)了可能。M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)A375細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，起“促癌”作用，而M1型巨噬細(xì)胞則起相反作用。CMM組織中TAMs浸潤(rùn)與STAT3、VEGF蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，且三者均與Clark分級(jí)和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。TAMs可能通過(guò)調(diào)節(jié)STAT3、VEGF蛋白的表達(dá)，對(duì)CMM的發(fā)生和發(fā)展起促進(jìn)作用，有望成為CMM的靶向性治療提供新思路。我們推測(cè)：在惡性黑素瘤組織中TAMs可能主要是以替代激活的M2型巨噬細(xì)胞表型存在，起“促癌”作用；TAMs可能通過(guò)上調(diào)STAT3、VEGF蛋白的表達(dá)，促進(jìn)CMM的侵襲和轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：皮膚惡性黑素瘤 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 STAT3 VEGF 侵襲
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略語(yǔ)注釋7-8
• 摘要8-12
• Abstract12-17
• 前言17-21
• 第一部分 巨噬細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及表型鑒定21-32
• 引言21
• 材料與方法21-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-31
• 第一部分小結(jié)31-32
• 第二部分 TAMs 對(duì)人惡性黑素瘤細(xì)胞 A375 生物學(xué)行為的影響32-44
• 引言32
• 材料與方法32-37
• 結(jié)果37-40
• 討論40-43
• 第二部分小結(jié)43-44
• 第三部分 TAMs 在皮膚惡性黑素瘤中的浸潤(rùn)及與 STAT3、VEGF 蛋白表達(dá)間的關(guān)系44-55
• 引言44
• 材料與方法44-48
• 結(jié)果48-51
• 討論51-54
• 第三部分小結(jié)54-55
• 全文小結(jié)55-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 綜述65-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 附錄74-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)皮膚惡性黑素瘤生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260632