發(fā)布時(shí)間：2020-03-24 18:58

【摘要】： 目的 研究CD147siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)尋常型銀屑病患者外周血T細(xì)胞增殖、活化和細(xì)胞外基質(zhì)黏附能力的影響。旨在進(jìn)一步明確CD147分子在銀屑病發(fā)病中的作用機(jī)制,探討將CD147作為靶分子,運(yùn)用siRNA技術(shù)對(duì)銀屑病進(jìn)行基因治療的可行性。 方法 1、收集門診確診為尋常型銀屑病患者10例,抽取外周血20 mL,密度梯度離心法分離外周血單一核細(xì)胞(PBMC);通過葡萄球菌腸毒素B(SEB)和人重組白細(xì)胞介素2(rIL-2)共同培養(yǎng)5天后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞純度為(92.88±1.81)%; 2、將化學(xué)合成的CD147siRNA電轉(zhuǎn)染至T細(xì)胞中,采用半定量RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后96小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CD147 mRNA表達(dá)水平的變化; 3、采用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染CD147siRNA 24、48和72 h后T細(xì)胞增殖水平的變化; 4、運(yùn)用流式細(xì)胞儀法檢測(cè)轉(zhuǎn)染CD147siRNA 24、48和72 h后對(duì)T細(xì)胞活化標(biāo)記分子CD25表達(dá)的影響; 5、采用基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染CD147siRNA 24、48和72 h后對(duì)T細(xì)胞胞外基質(zhì)黏附能力的影響。 結(jié)果 1.轉(zhuǎn)染CD147siRNA 1 24、48和72 h后,T細(xì)胞中CD147 mRNA表達(dá)水平均降低(P均＜0.05),以轉(zhuǎn)染后48小時(shí)下降最為顯著(P＜0.001),干擾效率為(62.87±5.5)%;而轉(zhuǎn)染后96 h恢復(fù)至接近轉(zhuǎn)染前水平(P＞0.05);轉(zhuǎn)染CD147siRNA 2 48小時(shí)后,CD147mRNA表達(dá)水平降低,干擾效率為(10.2±3.1)%(P＜0.05),其余時(shí)間點(diǎn)無顯著下降(P＞0.05); 2.轉(zhuǎn)染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T細(xì)胞的增殖能力顯著降低(P均＜0.001),其抑制率分別為(44.5±3.13)%、(50.7±3.5)%、(53.98±4.15)%; 3.轉(zhuǎn)染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T細(xì)胞表面CD25分子的表達(dá)水平由(80.2±4.8)%、(81.6±3.35)%、(83.5±4.1)%下降到(47.23±3.65)%、(31.5±4.22)%、(23.05±4.15)%(P均＜0.001); 4.轉(zhuǎn)染CD147siRNA 1 24 h、48 h和72 h后,T細(xì)胞的胞外基質(zhì)黏附能力顯著降低(P值分別＜0.01、＜0.001、＜0.001),下降率分別為(29.8±4.66)%、(43.53±3.88)%、(56.5±4.13)%。 結(jié)論 1.建立了針對(duì)人外周血T細(xì)胞進(jìn)行siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)方法; 2.CD147分子與銀屑病患者外周血T細(xì)胞的增殖、活化和基質(zhì)黏附能力相關(guān),可能是一種新的銀屑病治療靶分子。
【圖文】：

2.1不同siRNA劑量的轉(zhuǎn)染效率分別電轉(zhuǎn)染非特異性熒光標(biāo)記siRNAO、1、2、3、4和5林L(終濃度<200nM)，，4小時(shí)后流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞中陽(yáng)性熒光細(xì)胞數(shù)目，見圖1。選取轉(zhuǎn)染效率最高時(shí)的siRNA量5林L(2林g)為實(shí)驗(yàn)最適劑量。I匹nsFL2林LnsFLS歸OUnOS掃OCnOS掃OUnO氣石護(hù)念4門lseeseseseseseseseseseses日UC甘一叫一峙月q

本文編號(hào)：2598721