發(fā)布時間：2020-03-21 17:15

【摘要】：隨著社會的發(fā)展,人們越來越追求自身的健康和完美,擁有黑亮的頭發(fā)是許多人所渴望的,而白發(fā)脫發(fā)作為影響外表的最常見的原因之一,往往給患者帶來精神上的很大煩惱。據文獻記載,傳統(tǒng)中藥何首烏具有烏須發(fā)、延年益壽的功效。黑色素產生于皮膚的黑色素細胞,其生物合成過程需多種酶介導,酪氨酸酶是其中重要的酶,它能夠將酪氨酸氧化為多巴(DoPA),進一步氧化成多巴醌(DoPA quinone),在別的酶的催化下氧化聚合成黑色素。 本文以小鼠B16F1黑素瘤細胞為材料,以不同終濃度的何首烏水提取液處理細胞,分別為0mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml。采用MTT法、體外氧化L-多巴反應法、NaOH法分別檢測其對細胞增殖、細胞中酪氨酸酶活性、細胞中黑素生成量的影響;采用半定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)的方法檢測其對細胞中酪氨酸酶基因、酪氨酸酶相關蛋白-1(TRP-l)基因、酪氨酸酶相關蛋白-2(TRP-2)基因及MITF基因mRNA表達的影響;采用Western blot免疫印跡法檢測其對上述四種基因的蛋白質表達的影響。研究發(fā)現(xiàn),何首烏水提取物能夠激活B16F1黑素瘤細胞中酪氨酸酶的活性,并增加黑色素的合成量,同時還具有促進黑素細胞增殖的作用。何首烏水提取物可以提高上述黑色素合成相關的四種基因及其蛋白質的表達量。而且,從結果可以看出,在0—1mg/ml的濃度范圍內,隨著何首烏水提取物濃度增大,細胞增殖、酪氨酸酶的活性和基因表達、蛋白質表達也會隨之上調。通過實驗我們發(fā)現(xiàn):何首烏水提液促進黑素瘤細胞生成黑素作用的可能機制之一是它能夠在基因轉錄和翻譯水平促進黑素合成相關基因mRNA的表達。 本文運用水提法提取何首烏中烏發(fā)有效成分,從細胞和分子水平驗證何首烏烏發(fā)的作用機理。為深入探討何首烏的促黑素生成功能及更詳細的機理、進一步研究何首烏的藥理提供了理論基礎。為傳統(tǒng)中藥的現(xiàn)代化功效評價提供了有力的參考證據。
【圖文】：

圖 1.1 二苯乙烯苷結構式Fig.1.1 Structure of stilbene glycoside根據以往的參考文獻得知，二苯乙烯苷具有多種生理活性，，作為抗衰老的非常有研究的價值。日本的 Hata[ 10 ]在 1975 年第一次從何首烏中分離測定出二苯乙烯苷組分。 80 年代開始，國內中醫(yī)界逐漸對何首烏中這一水溶性組分表示關注。到目二苯乙烯苷主要還是采用萃取、柱層析這樣的手段來分離。邊秀娟[ 11 ]對 Ha

圖 1.2 黑色素的合成機制Fig.1.2 The mechanism of melanin biosynthesis in the melanocyte.1.4.2 黑素生成的調節(jié)的相關細胞因子和信號途徑在黑素生成過程中，調節(jié)黑素合成的速度和黑素種類的因素有很多：體內的多種激素、細胞因子、無機離子及黑素細胞周圍環(huán)境的物理化學性質改變，它們是共同發(fā)揮作用的。而酪氨酸酶則是其中最重要的決定黑色素合成的因素。酪氨酸酶是一種氧化還原酶，它結構復雜且含有銅離子，具多個亞基。TYE 首先催化 L-酪氨酸羥基化生成 L-多巴，然后使 L-多巴氧化生成多巴醌，因此是一種具雙重催化作用的酶。多巴醌經一系列反應后，生成由 5,6-二羥吲哚和 5,6-二羥吲哚-羧酸單元一起構成的異聚體-黑色素。酪氨酸酶是黑色素生成的主要限速酶，它的表達和活性對黑素生成的速度和產量有決定作用[ 27,28 ]。新合成的酪氨酸酶是沒有催化活性的，它結合上一個-30kD 的蛋白質之后，就變成了一個異源二聚體復合物，加入
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R285.5;R739.5

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本文編號：2593663