【摘要】：皮膚黑素瘤(malignant melanoma)起源于皮膚黑素細(xì)胞,惡性程度極很高,發(fā)生發(fā)展過程中涉及大量基因異常表達(dá),具體機(jī)制尚不清楚。SATB1是一種核基質(zhì)附著區(qū)結(jié)合蛋白,近來發(fā)現(xiàn)在乳腺癌等多種惡性腫瘤表達(dá)水平顯著升高,可能對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用,而在黑素瘤的表達(dá)和作用尚未見報道。本研究通過檢測SATB1在黑素瘤的表達(dá)狀況及其表達(dá)水平,探討對黑素瘤生長和轉(zhuǎn)移能力的影響,初步揭示SATB1與皮膚黑素瘤的相關(guān)性。 第一部分：SATB1在黑素瘤細(xì)胞系及組織的表達(dá) 采用半定量RT-PCR法,以2例正常黑素細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231為對照,比較SATB1 mRNA在人黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375、M14和MV3的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,與MDA-MB-231細(xì)胞相似,A375和MV3細(xì)胞高水平表達(dá)SATB1 mRNA, A375細(xì)胞表達(dá)水平最高,M14細(xì)胞表達(dá)水平稍低,而2例正常黑素細(xì)胞均不表達(dá)。 采用蛋白印跡法,以正常黑素細(xì)胞為對照,比較SATB1在上述黑素瘤細(xì)胞系的表達(dá)水平；以6例色素痣為對照,比較SATB1在8例黑素瘤組織標(biāo)本的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,正常黑素細(xì)胞不表達(dá)SATB1,而黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375、M14和MV3均高水平表達(dá)SATB1;色素痣和黑素瘤組織均表達(dá)SATB1,但黑素瘤(1.10±0.32)的表達(dá)水平顯著高于色素痣(0.53±0.28)(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 SATB1的mRNA和蛋白質(zhì)在黑素瘤表達(dá)水平均異常升高,提示其可能對黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展起促進(jìn)作用。 第二部分：抑制SATB1表達(dá)對A375細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的影響 構(gòu)建SATB1的RNAi十?dāng)_質(zhì)粒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染高水平表達(dá)SATB1的黑素瘤A375細(xì)胞系并篩選穩(wěn)定表達(dá)克隆,在mRNA和蛋白質(zhì)水,平均顯示SATB1的表達(dá)水平明顯下降(分別為未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的23.21%和34.57%),即對干擾前后不同SATB1表達(dá)水平A375細(xì)胞的增殖能力和侵襲轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行了比較性研究。 在增殖能力方面,首先在體外細(xì)胞計數(shù)并繪制增殖曲線、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期,然后在動物體內(nèi)建立皮下移植瘤模型,比較成瘤潛伏期、腫瘤生長速度和移植瘤質(zhì)量。結(jié)果顯示,低水平表達(dá)SATB1的A375細(xì)胞在24 h、48 h和72 h的細(xì)胞數(shù)明顯少于高水平表達(dá)SATB1者,且隨著時間的推移差距逐漸增大,增殖曲線較為平坦；在動物體內(nèi)形成移植瘤的成瘤潛伏期(8.17±2.86天),較高水平表達(dá)SATB1的A375細(xì)胞的成瘤潛伏期(4.83±1.17天；5.33±0.82天)明顯延長(P0.05),生長曲線較為平坦,且形成的移植瘤質(zhì)量(0.65±0.36 g)顯著低于高水平表達(dá)SATB1的A375細(xì)胞(1.44±0.75 g；1.52±0.74 g)(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。無論在體外還是動物體內(nèi),抑制高水平表達(dá)的SATB1均可導(dǎo)致A375細(xì)胞的增殖能力明顯下降,提示SATB1的表達(dá)可能對黑素瘤的增殖能力具有促進(jìn)作用,抑制其表達(dá)可能對黑素瘤的增殖能力具有減弱作用。細(xì)胞周期分析顯示雖G1期和凋亡細(xì)胞比例增高而G2和S期細(xì)胞比例稍低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義,其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。 在侵襲轉(zhuǎn)移能力方面,首先在體外比較不同SATB1表達(dá)水平的A375細(xì)胞穿過重建基底膜的能力,然后建立裸鼠黑素瘤肺轉(zhuǎn)移模型,比較不同SATB1表達(dá)水平的A375細(xì)胞在體內(nèi)形成肺轉(zhuǎn)移灶的能力。結(jié)果顯示,低水平表達(dá)SATB1的A375細(xì)胞穿過重建基底膜的細(xì)胞數(shù)(3.92±2.71)明顯少于高表達(dá)的(31.92±6.93；35.83±7.46)；SATB1表達(dá)受到抑制的A375細(xì)胞在裸鼠肺部形成的轉(zhuǎn)移灶面積比(0.08±0.05)較未轉(zhuǎn)染組(0.37±0.22)和空白組(0.40±0.12)明顯減小(P0.05),轉(zhuǎn)移灶明顯縮小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。體外和動物體內(nèi)實驗結(jié)果提示,SATB1的表達(dá)可能對黑素瘤的侵襲轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用,抑制其表達(dá)可能對黑素瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力具有減弱作用。 結(jié)論 SATB1在黑素瘤細(xì)胞系和組織標(biāo)本的表達(dá)水平異常升高,抑制SATB1的表達(dá),可以明顯降低黑素瘤細(xì)胞的增殖能力、侵襲轉(zhuǎn)移能力,提示SATB1可能對黑素瘤的生長和侵襲轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用；抑制SATB1的表達(dá)能部分逆轉(zhuǎn)黑素瘤的惡性生物學(xué)行為,表明SATB1可能是一個具有良好應(yīng)用前景的黑素瘤治療靶點。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R739.5

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本文編號：2537110