【摘要】：銀屑病是一種受多種因素影響的斑塊鱗屑性慢性炎癥性皮膚,以表皮增生過度及角化不全為主要特征,癥狀的嚴(yán)重程度不等,從較小的局部斑塊至累及全身。它具有反復(fù)性,難以根治。它影響到2%-3%的總?cè)丝?是全球最為常見的自身免疫疾病之一。它影響著全世界所有地區(qū),在北美和歐洲,銀屑病是成年人中最普遍的免疫介導(dǎo)性皮膚病,影響著大約2500萬人。而在中國,銀屑病的患病率為0.123%,其中男性多于女性,北方多于南方,城市高于農(nóng)村。在非洲國家的發(fā)病率則比較低。銀屑病的發(fā)病不但存在顯著的種族差異、性別差異,在地理和季節(jié)上差異也很顯著。高寒地區(qū)的發(fā)病率明顯高于溫暖地區(qū),而冬春季病情可能加重夏季則自然減輕。 現(xiàn)代的研究認(rèn)為銀屑病是一種多基因遺傳背景下的T細(xì)胞異常的自身免疫疾病,有關(guān)角質(zhì)細(xì)胞、T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等在銀屑病中的作用以及各種細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用等方面的探索和爭論不斷的揭示著其發(fā)病機理,推動著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,同時也促進(jìn)人們尋找更有效的抗銀屑病藥物,為人類的健康發(fā)展提供支持。 銀屑病的藥物治療按嚴(yán)重程度分別選用局部用藥物、光療法、傳統(tǒng)口服藥物和新型生物制劑。若患者的銀屑病對局部用藥物和光療法治療都無適當(dāng)響應(yīng)或疾病累及皮膚已十分廣泛,則需及時改用全身用藥物。傳統(tǒng)口服用銀屑病治療藥物主要有類維生素A類物質(zhì)、甲氨蝶呤(methotrexate)、環(huán)孢素(ciclosporin)和阿西曲汀(acitretine)等,它們治療銀屑病有效并具有使用簡便和價格低廉的優(yōu)勢,但對肝、腎和骨髓的毒性較大并存在致畸性,實際應(yīng)用受到一定的限制。生物制劑與傳統(tǒng)全身用藥物相比,能夠特異性地靶向免疫系統(tǒng)因而具有更好的安全性和耐受性,所以適于用作更長期的銀屑病治療藥物。歐美至今已批準(zhǔn)了6種銀屑病治療用生物制劑。其中一類靶向與銀屑病發(fā)病機制相關(guān)的T細(xì)胞,但由于療效差,目前臨床應(yīng)用已大為減少；另一類TNF抑制劑為治療中至重度銀屑病一線藥物。生物制劑對普通患者來說,價格昂貴,安全性仍然有限。 中醫(yī)治療方法頗多,相應(yīng)地出現(xiàn)了很多的治療方藥,青黛膠囊、雷公藤片、丹參注射液、清開靈注射液等在臨床應(yīng)用中得到了大力推廣,并獲得了良好的療效；其它一些復(fù)方中藥制劑和單味中藥提取物如銀杏葉內(nèi)脂、氧化苦參堿、喜樹果涂膜劑、去氫駱駝蓬堿軟膏等治療本病亦顯示出一定的效果和發(fā)展勢頭。由于中醫(yī)藥治療銀屑病可延長復(fù)發(fā)時間,不良反應(yīng)小,療效確切,其治療上的優(yōu)勢不容忽視。 但是由于中藥復(fù)方有效成分不明確,并且目前中國藥典中藥復(fù)方質(zhì)量控制大多采用單一指標(biāo)成分定量的方法,該方法不能全面客觀的反應(yīng)中藥內(nèi)在質(zhì)量,而且不符合中藥整體性的特點,存在一定的局限性。中藥制品質(zhì)量和安全性評價方法還不夠完善,不能實現(xiàn)中藥質(zhì)量穩(wěn)定可控的要求,因此中藥復(fù)方至今未得到國際主流藥物市場的承認(rèn)。 由于銀屑病的頑固性特點及中西藥在治療上的獨特缺陷,中醫(yī)中藥治療銀屑病具有廣闊的研究空間。在基礎(chǔ)研究方面,應(yīng)進(jìn)一步深化研究中醫(yī)藥內(nèi)外治療銀屑病的作用機理,建立中醫(yī)辨證分型的實驗動物模型,統(tǒng)一實驗分型標(biāo)準(zhǔn)和實驗室觀察指標(biāo),更深層次闡明內(nèi)外用中藥制劑的藥理學(xué)作用機制。由此,通過完善而系統(tǒng)的實驗研究,以中醫(yī)辨證分型論治為基礎(chǔ),以實驗室指標(biāo)為依據(jù),開發(fā)出療效確切的中藥單體或復(fù)方,探索有效的作用靶點,進(jìn)而闡明其作用機制,是今后中醫(yī)藥治療銀屑病實驗研究的主要方向。 鑒于銀屑病的特征及其治療藥物的研究現(xiàn)狀,更多地開發(fā)治療銀屑病的相關(guān)中藥制劑,在完善中藥研究資料、充分發(fā)揮中藥毒副作用小的優(yōu)勢的同時,盡可能提高其質(zhì)控水平、避免中藥的質(zhì)量評價與其作用整體性相違背的劣勢,對銀屑病治療藥物發(fā)展具有重要意義。 經(jīng)對銀屑病的特征、發(fā)病機制及銀屑病藥物治療現(xiàn)狀的認(rèn)識,通過對《中藥大辭典》相關(guān)組方的特性進(jìn)行研究,綜合國內(nèi)同類制劑的療效考察,我們進(jìn)行了銀屑病治療藥物的研究。 本論文通過研究銀屑病治療藥物YXD09的組方,質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),生產(chǎn)工藝優(yōu)化,運用小鼠陰道上皮細(xì)胞模型、尾部皮膚鱗片模型和離體透皮試驗,豐富本藥物的藥效學(xué)和藥代動力學(xué),完善其非臨床研究內(nèi)容,為銀屑病的治療提供實驗依據(jù)。 (1)銀屑病治療藥物YXD09的組方研究 通過對銀屑病治療狀況的認(rèn)識,針對銀屑病的特征及發(fā)病機制,又根據(jù)《中藥大辭典》中各藥味的功能特性及應(yīng)用情況,建立銀屑病治療藥物YXD09的組方。 (2)制備工藝優(yōu)化研究 本試驗選擇回流時間(A)、回流次數(shù)(B)、乙醇濃度(C)、乙醇用量(D)為考察因素,以大黃素含量為評價指標(biāo),用L9(34)正交試驗設(shè)計進(jìn)行試驗。按十分之一處方量秤取藥材,共9份,按正交試驗方案進(jìn)行提取并濃縮至總體積的50%得YXD09,將濃縮液濾過,精密吸取濾過液20mL,以HPLC法測定YXD09中大黃素的含量。 結(jié)果表明,影響最佳工藝的因素順序為：乙醇濃度回流時間回流次數(shù)乙醇用量,且最佳工藝參數(shù)為：C3A2B2D2。方差分析表明,4種工藝因素對大黃素的含量均沒有顯著差異(P0.05)。因而在實際生產(chǎn)中,為了降低生產(chǎn)成本,縮短生產(chǎn)周期,將回流時間定為2小時,而不用4小時。因此,最后選擇的YXD09醇提優(yōu)化條件為A1B2C3D2,即回流2小時,回流2次,乙醇濃度為80%,乙醇用量為8倍。 選用大黃、羊蹄和虎杖3味中藥材及其余藥味考察合并醇提與分開醇提對大黃素含量的影響。結(jié)果顯示,合并醇提液和分開醇提液中的大黃素含量分別為162.78ug/ml和161.22ug/ml.采用EXCEL軟件對其結(jié)果進(jìn)行方差分析,發(fā)現(xiàn)P0.05,說明兩種醇提液中大黃素的含量沒有顯著差異。 (3)質(zhì)量控制研究 采用薄層色譜法對YXD09中大黃素和當(dāng)歸進(jìn)行了定性分析。依照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗,分別吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液3種溶液各10μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30℃-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)為展開劑,展開,取出,晾干,將硅膠G薄層板置于365nm紫外光燈下檢視,對大黃和當(dāng)歸進(jìn)行薄層色譜鑒別。結(jié)果顯示,使用薄層色譜法鑒別YXD09中的大黃和當(dāng)歸,操作簡單,重現(xiàn)性好,效果明顯,可以做為YXD09的薄層鑒別標(biāo)準(zhǔn)。 通過高效液相色譜法測定了YXD09中大黃素的含量。色譜條件是色譜柱：ZORBAX Extend-C18(4.6mm×150mm,5μm)色譜柱；流動相：0-6min時,甲醇：水(40：60)；6-20min時,甲醇：水：0.1%磷酸(75：10：15),梯度洗脫；流速：1.0ml/min;檢測波長：254nm；柱溫：35℃。高效液相色譜法測定三個批次的YXD09中大黃素含量分別為166.83、172.52、160.43μg/ml,RSD值分別為1.7%、1.3%、1.1%。 首次采用了薄層色譜法,對YXD09中大黃和當(dāng)歸進(jìn)行了定性分析,通過方法學(xué)考察了高效液相色譜法可以簡便有效地測定YXD09中所含大黃素的總量,定性與定量相輔相成,檢驗方法既全面可靠又具有一定的專屬性,為YXD09的質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供了基礎(chǔ),尤其是對大黃素的檢測及含量測定,可以作為YXD09的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 同時又對大黃素及蛇床子素的同時定量方法進(jìn)行了研究。 (4)藥效學(xué)研究 利用小鼠陰道上皮細(xì)胞模型探討YXD09對雌激素周期小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響。選取造模成功的健康昆明種雌性小鼠30只,隨機分為3組,每組10只小鼠,分別為： YXD09組,陽性對照組,模型組；另隨機取沒有造模的健康昆明種小鼠10只,作為空白試驗組。正式試驗期為7d。第7d開始給藥：YXD09組采用自制陰道灌流器,每次灌注5分鐘；空白組、模型組采用同樣方法灌流生理鹽水10mL/kg;陽性對照組于小鼠陰道壁均勻涂抹一層0.02%的丙酸氯倍他索軟膏。最后一次給藥1h后,各組小鼠于腹腔注射秋水仙堿15mg/kg,使有絲分裂終止在細(xì)胞分裂中期,取陰道標(biāo)本,置于10%的福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,HE染色,于普通光學(xué)顯微鏡下計數(shù)。結(jié)果表明,YXD09可抑制雌激素周期小鼠陰道上皮細(xì)胞的有絲分裂,效果與丙酸氯倍他索軟膏相似(P0.05)。 利用鼠尾鱗片表皮模型探討銀屑凈對小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響。選取體重相近、健康昆明種小鼠30只,隨機分為3組,分別為：YXD09組,陽性對照組,空白組,每組10只小鼠,公母各半。正式試驗期為7d。分別在YXD09組小鼠尾部均勻涂抹一層相應(yīng)的藥物,陽性對照組小鼠尾部涂抹丙酸氯倍他索軟膏,空白組小鼠尾部則涂抹生理鹽水。在第7天處死小鼠,取小鼠尾部距離尾根約2cm處背面皮膚一長條,置于10%的福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,HE染色,于普通光學(xué)顯微鏡下對每個標(biāo)本逐個觀察鱗片,看鱗片表皮是否有顆粒層形成。結(jié)果表明,陽性對照組和YXD09組小鼠尾部含顆粒層鱗片所占比例均極顯著提高(P0.01),分別提高70.1%、116.1%。YXD09的效果明顯優(yōu)于丙酸氯倍他索軟膏(P0.05)。 這些結(jié)果提示,YXD09可能通過抑制表皮細(xì)胞的過度增殖和促進(jìn)表皮細(xì)胞角質(zhì)化來達(dá)到抗銀屑病的目的,并在抗銀屑病的臨床應(yīng)用具有廣闊的前景。 (5)藥代動力學(xué)研究 運用SD大鼠腹部皮膚作為皮膚模型,采用高效液相色譜法測定了YXD09中大黃素的單位面積累積透過量和皮膚滯留量,探討了YXD09的體外藥代動力學(xué)。采用水平式Franz擴(kuò)散池,擴(kuò)散池體積為3.5ml,有效擴(kuò)散面積為1.13cm2,恒溫水浴加熱,溫度控制在32℃左右,轉(zhuǎn)速為250rpm,接受介質(zhì)為30%PEG-生理鹽水,排除接受池中的氣泡,向擴(kuò)散池中加入3.5ml的YXD09藥液。分別于1,2,4,6,8,10,12,24h時取樣1ml,經(jīng)0.22gm濾膜過濾,取續(xù)濾液,測定大黃素的單位面積累積透過量和皮膚滯留量。結(jié)果顯示,YXD09中大黃素的體外透皮釋放方程為Q=0.338t-1.411(R=0.9972),24h的累積滲透量為6.76μg/cm2,皮膚滯留量為19.10gg/cm2。表明YXD09中大黃素以零級動力學(xué)經(jīng)皮膚滲透。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡雙豐!315040;HPLC法測定中成藥膠囊劑中大黃素含量[J];寧波醫(yī)學(xué);2000年02期

2 楊曉云!青島266071,吳愛英!青島266071,荊海燕!青島266071;高效液相法測定排毒養(yǎng)顏膠囊中大黃素的含量[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2001年01期

3 馮艷,張亮,吳峰,張正行;高效液相色譜法測定心腦治舒平中大黃素和大黃酚的含量[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2001年01期

4 趙翠云 ,劉善新 ,賈元印;抗癌靈膠囊中大黃素的含量測定[J];山東醫(yī)藥工業(yè);2001年01期

5 夏育民,徐世正,熊臘元,黎娟;大黃素對BXSB狼瘡樣小鼠腎臟病變的影響及其機制[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2003年01期

6 楊士喜,張德珂,趙新芝;薄層掃描測定金虎保肝顆粒中大黃素的含量[J];中國藥師;2005年02期

7 李乃明;丁宙;羅惠珍;陳惠長;陳寶輝;饒海濤;;翼核果化學(xué)成份的研究 Ⅰ、大黃素的分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J];廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1985年03期

8 靳珠華，馬德錄，林秀珍，李錫銘;大黃素對豚鼠離體腸管作用的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;1994年07期

9 代龍，，邵海偉，邱明豐，邵幼梅;抗乙肝沖劑的工藝研究[J];中成藥;1995年12期

10 黎磊石;中國的終末期腎病[J];腎臟病與透析腎移植雜志;1995年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 丁日高;王青秀;吳純啟;廖明陽;;大黃素誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡的機制探討[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

2 王彩花;謝傳高;葉斌;蔡建庭;杜勤;;大黃素對大鼠慢性胰腺炎的治療作用[A];2005年全國慢性胰腺炎學(xué)術(shù)大會專集[C];2005年

3 丁艷;黃志華;;大黃素藥理作用研究進(jìn)展[A];第十屆全國中藥藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

4 陳英玉;鄭合勇;胡建達(dá);鄭志宏;鄭靜;連曉嵐;呂聯(lián)煌;;大黃素抑制HL-60/ADR耐藥細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

5 江海燕;朱華;黃慧學(xué);蔣利林;;虎杖不同炮制品中大黃素含量測定[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會學(xué)術(shù)年會——創(chuàng)新優(yōu)秀論文集[C];2002年

6 欒洋;李妍;戚新明;李明;任進(jìn);;大黃素誘導(dǎo)DNA雙鏈斷裂及其機制研究[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會第14屆學(xué)術(shù)交流會議論文集[C];2009年

7 馬濤;齊清會;簡序;楊文修;;大黃素收縮大鼠結(jié)腸環(huán)行平滑肌細(xì)胞的機制研究[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床與基礎(chǔ)學(xué)術(shù)會議暨全國中西醫(yī)結(jié)合外科危重病學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2003年

8 李妍;欒洋;任進(jìn);;大黃素通過抑制ATP與拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的結(jié)合導(dǎo)致DNA產(chǎn)生雙鏈斷裂[A];2010年中國藥學(xué)大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

9 劉麗軍;鄒潔;李臣宇;李新;胡芬;李俊英;;大黃素對P2X7受體介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞死亡的抑制作用[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點研討會論文摘要集[C];2008年

10 陳英玉;鄭合勇;胡建達(dá);鄭志宏;鄭靜;連曉嵐;呂聯(lián)煌;;帶黃素抑制HL-60/ADR耐藥細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 ;采幾根頭發(fā)當(dāng)“種”,科學(xué)家培育出“皮膚”[N];新華每日電訊;2008年

2 怡勇;大黃素可望用于心血管疾病的防治[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2004年

3 劉橋斌;甘油和潤膚露搭著用[N];健康時報;2007年

4 劉國信;皮膚灼傷急救法[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

5 劉國信;皮膚灼傷的急救法[N];中國醫(yī)藥報;2007年

6 健康時報記者　 熊江雪;治嵌甲癥無需拔趾甲[N];健康時報;2006年

7 ;1.3CM×0.7CM的破案密碼[N];成都日報;2008年

8 王敬霞;冬季讓肌膚“喝飽”水[N];保健時報;2005年

9 王小龍;可直接用于創(chuàng)面的皮膚“打印機”問世[N];科技日報;2010年

10 怡勇;大黃素可望用于治療介入后再狹窄[N];中國醫(yī)藥報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張浚;銀屑病治療藥物YXD09的非臨床實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 呂平;赭曲霉發(fā)酵產(chǎn)大黃素及其生物合成途徑和誘發(fā)機制的研究[D];天津大學(xué);2009年

3 劉薇;大黃素肝腸代謝特征及性別差異研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

4 朱小康;大黃素衍生物的合成與生物活性研究[D];西南大學(xué);2011年

5 張征波;大黃素對非酒精性脂肪肝單純肝脂肪變性改善作用及機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

6 林勝璋;大黃素抗胰腺癌作用及機制研究[D];浙江大學(xué);2011年

7 周伏喜;大黃素對非酒精性脂肪肝大鼠的干預(yù)作用及可能機制研究[D];中南大學(xué);2011年

8 阮志燕;大黃素通過影響Tregs遷徙抑制小鼠結(jié)腸癌發(fā)展的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 彭圓;增液承氣湯對津虧便秘衰老模型小鼠皮膚影響的實驗研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 劉麗芳;礬冰納米乳制劑研究及其安全性和藥效學(xué)評價[D];中南大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 吳華慧;何首烏抗腫瘤化合物及衍生物抑制卵巢細(xì)胞SKOV3侵襲轉(zhuǎn)移實驗研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 吳斌;大黃素影響大鼠胃平滑肌細(xì)胞鈣敏感性調(diào)節(jié)機制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2005年

3 秦春明;大黃素衍生物合成及經(jīng)線粒體介導(dǎo)的鼻咽癌放射增敏作用研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 范仁根;大黃素（Emodin）誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞smmc-7721凋亡及其分子機制的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2005年

5 代智;順鉑細(xì)胞毒性及大黃素預(yù)防作用分子機制[D];大連醫(yī)科大學(xué);2003年

6 邊秀娟;電子自旋共振法測定何首烏中大黃素、二苯乙烯苷清除超氧陰離子自由基的實驗研究[D];福建中醫(yī)學(xué)院;2002年

7 察雪湘;大黃素對大鼠重癥急性胰腺炎全身炎癥反應(yīng)肺損傷的作用研究[D];四川大學(xué);2005年

8 車清明;金絲桃素的化學(xué)合成[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 張洪英;金絲桃素的合成研究[D];南京理工大學(xué);2008年

10 許麗梅;大黃素純化及其用于金絲桃素合成的研究[D];西安理工大學(xué);2008年

本文編號：2437934