【摘要】：目的體外觀察sh RNA靶向干擾硒蛋白V(SELV)基因?qū)θ藧盒院谏亓鯝375細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法構(gòu)建以SELV為靶基因的sh RNA表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的A375細(xì)胞中,并利用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。采用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(q RT-PCR)和Western blotting法分別檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞SELV的m RNA和蛋白表達(dá)水平;采用MTT法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的增殖能力,并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞周期和早期凋亡率。采用q RT-PCR和ELISA法對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的SELV功能相關(guān)因子含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9(ASB9)和O-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(OGT)的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。結(jié)果成功構(gòu)建靶向SELV的sh RNA重組質(zhì)粒,并獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的A375細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后SELV的表達(dá)顯著降低(P0.05),細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期未發(fā)生明顯變化,但細(xì)胞早期凋亡率顯著增加(P0.05)。而轉(zhuǎn)染細(xì)胞的ASB9和OGT表達(dá)量也明顯增加(P0.05)。結(jié)論靶向SELV的sh RNA重組質(zhì)粒能夠下調(diào)SELV在A375細(xì)胞中的表達(dá),提高細(xì)胞早期凋亡率,并導(dǎo)致ASB9和OGT的表達(dá)升高。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of sh RNA targeted interference selenoprotein V (SELV) gene on the biological behavior of human malignant melanoma cell line A375. Methods the sh RNA expression vector targeting SELV gene was constructed and transfected into A375 cells in vitro. The stable transfection cell line was screened by purine mycin. The expression levels of m RNA and protein in transfected SELV cells were detected by real-time quantitative reverse transcription PCR (q RT-PCR) and Western blotting method respectively. The proliferative ability of transfected cells was detected by MTT assay, and the cell cycle and early apoptosis rate of transfected cells were detected by flow cytometry. Q RT-PCR and ELISA methods were used to detect the expression of ASB9 and Oacetylglucosaminyltransferase (OGT) (OGT) in SELV functional related factor containing anchor protein repeats (ASB9) and Oacetylglucosaminyltransferase (OGT) in transfected cells. Results the sh RNA recombinant plasmid targeting SELV was successfully constructed and stable transfected A375 cells were obtained. After transfection, the expression of SELV decreased significantly (P0.05), cell proliferation and cell cycle did not change significantly, but the rate of early apoptosis increased significantly (P0.05). The expression of ASB9 and OGT in transfected cells was also significantly increased (P0.05). Conclusion sh RNA recombinant plasmid targeting SELV can down-regulate the expression of SELV in A375 cells, increase the rate of early apoptosis and increase the expression of ASB9 and OGT.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;深圳市慢性病防治中心;
【基金】：supported financially by grants from the National Natural Science Foundation of China (No. 81172669, 81202239 and 81102123)
【分類號(hào)】：R739.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2344449