【摘要】：目的檢測皮膚鱗癌及正常皮膚組織中抑癌基因P14ARF、E-cad啟動子區(qū)甲基化情況，并與原癌基因c-jun、c-fos甲基化情況作比較分析這些基因在腫瘤發(fā)生過程中的協(xié)同作用。 方法利用甲基化特異性PCR（MSP）檢測30例皮膚鱗癌患者P14ARF、E-cad基因啟動子區(qū)甲基化情況，并與20例正常人皮膚組織中P14ARF、E-cad基因甲基化情況作比較，分析在鱗癌患者和正常人之間P14ARF和E-cad基因的甲基化狀態(tài)的區(qū)別。 結(jié)果（1）皮膚鱗癌組織中，P14ARF和E-cad基因啟動子區(qū)甲基化發(fā)生率分別為60%和36.7%明顯高于正常組織5.0%和10%（P0.05）。（2）皮膚鱗癌組織中，c-fos和c-jun基因啟動子區(qū)的去甲基化程度分別為73.3%、83.3%顯著高于正常組織（30%）、（5%）（P0.05）。 結(jié)論皮膚鱗癌的發(fā)生可能與抑癌基因P14ARF和E-cad啟動子區(qū)高甲基化進而導(dǎo)致基因失活有密切的關(guān)系；原癌基因c-jun和c-fos啟動子區(qū)的低甲基化與鱗癌的發(fā)生也有一定的聯(lián)系。抑癌基因高甲基化與原癌基因低甲基化可能聯(lián)合起來共同導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 實驗設(shè)計思路在經(jīng)過了半個多世紀的研究后，人們認識到基因突變和表觀遺傳的因素綜合起來才能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。通過在分子水平上對腫瘤組織和對應(yīng)的正常組織相比較，可以發(fā)現(xiàn)DNA甲基化狀態(tài)的變化與其他基因的變化是普遍存在的現(xiàn)象。事實上，在幾乎所有腫瘤中都能找到相關(guān)基因的異常甲基化狀態(tài)。由此可知DNA甲基化的改變在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著非常重要的角色。 DNA甲基化（DNA methylation）是比較常見的表觀遺傳學(xué)現(xiàn)象，它是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下，將甲基直接添加到DNA分子中的堿基上。常見的DNA甲基化發(fā)生在DNA雙鏈上的胞嘧啶的第5位碳原子上，通過共價鍵結(jié)合后形成5甲基胞嘧啶（5mC）。在結(jié)構(gòu)基因的5’端存在著以成簇串聯(lián)的形式排列的CpG二聯(lián)核苷酸，甲基化經(jīng)常發(fā)生在這些CpG二聯(lián)核苷序列上。甲基化的結(jié)果導(dǎo)致基因表達的沉默。腫瘤組織中普遍存在的低甲基化和局部的高甲基化現(xiàn)象，其分子機制還不是十分清楚，但可以明確的是DNA甲基化異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著十分重要的聯(lián)系。 皮膚鱗癌是常見的皮膚腫瘤，該病的病因目前尚不完全清楚。DNA甲基化理論為鱗癌的研究帶來了更加寬廣的領(lǐng)域，及全新的視角。我們通過對相關(guān)的抑癌基因P14ARF、E-cad及原癌基因c-fos、c-jun啟動子和外顯子區(qū)的甲基化研究，發(fā)現(xiàn)抑癌基因高甲基化導(dǎo)致基因的沉默和原癌基因的低甲基化導(dǎo)致的基因活化，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著聯(lián)合作用。因此，為了明確哪些原癌及抑癌基因在鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用，以及擬建一種高效微創(chuàng)的皮膚鱗癌診斷方法，我們通過甲基化特異性PCR（MSP）對與鱗癌相關(guān)的4種基因p14ARF、E-cad、c-jun和c-fos進行了全面的甲基化狀態(tài)檢測，以便明確皮膚鱗癌p14ARF、E-cad、c-jun和c-fos基因啟動子及外顯子的甲基化是否可以成為皮膚鱗癌的特異性甲基化片段標志物，為腫瘤的早期診斷、判斷預(yù)后和治療思路提供堅實的理論基礎(chǔ)。 對來源于臨床的30例皮膚鱗癌患者的癌組織和20例正常人的皮膚組織進行了原癌基因和抑癌基因啟動子區(qū)的DNA甲基化分析。通過甲基化特異性PCR（MSP）實驗，對抑癌基因P14ARF、E-cad和原癌基因c-fos、c-jun啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)進行定性檢測。 本論文共分成三部分，第一部分是論文的第1章，設(shè)立正常對照組織與皮膚鱗癌進行比對，通過MSP檢測抑癌基因P14ARF，E-cad啟動序列高甲基化狀態(tài)，以及對皮膚鱗癌發(fā)生的影響。第二部分是論文的第2章，設(shè)立正常組織對照與皮膚鱗癌進行比較，通過MSP法檢測原癌基因c-jun和c-fos啟動子及外顯子區(qū)低甲基化與鱗癌發(fā)生的聯(lián)系。論文的第3部分是一篇綜述，即抑癌基因與原癌基因甲基化異常對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響，，及臨床應(yīng)用價值。
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【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5

【共引文獻】

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本文編號：2275286