發(fā)布時間：2016-11-25 19:16

  本文關(guān)鍵詞：XPD基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《大連醫(yī)科大學(xué)》 2012年

XPD基因的克隆及其在惡性黑素瘤細(xì)胞中的表達(dá)

王月  

【摘要】：背景： XPD是核酸切除修復(fù)過程的主要蛋白，因此XPD與腫瘤的關(guān)系越來越受到研究者的重視。因此XPD與腫瘤的關(guān)系越來越受到研究者的重視。對皮膚惡性黑素瘤基因易感性分子機(jī)制的研究表明XPD是皮膚惡性黑素瘤易感的生物標(biāo)志。DNA修復(fù)酶的調(diào)控，是預(yù)防腫瘤和治療的關(guān)鍵，HIF-1在參與調(diào)控XPD修復(fù)中起著重要作用，增加了HIF1和sp1他們重疊的結(jié)合位點(diǎn)之間的競爭，紫外線誘導(dǎo)的磷酸化增強(qiáng)了HIF-1蛋白直接結(jié)果，而XPD基因啟動子取悅的HRE，在編碼DNA修復(fù)蛋白的基因中，是DNA修復(fù)機(jī)制的一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)機(jī)制。在XPD基因中的DNA修復(fù)因子TFIIH存在亞基突變。許多人著色性干皮病患者的致病與XPD點(diǎn)突變R683W有著某種關(guān)聯(lián)。然而，有明顯的異質(zhì)性，有研究對XPD基因中的TFIIH酶功能的突變的效果發(fā)現(xiàn)，每一個突變，表現(xiàn)出獨(dú)特的生化屬性。XPD751密碼子的Gln/Gln基因型是男性惡性黑素瘤高風(fēng)險的有意義基因標(biāo)志，Lys/Gln基因型對預(yù)測惡性黑素瘤惡化有重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中，，我們克隆了XPD，構(gòu)建了pEGFP-N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD重組表達(dá)質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染至人惡性黑素瘤細(xì)胞，觀察它們的表達(dá)情況及其在惡性黑素瘤細(xì)胞內(nèi)定位，利用MTT檢測細(xì)胞的增殖力，以討論XPD對惡性黑素瘤細(xì)胞的生物學(xué)影響及其可能的功能。 目的：克隆XPD基因并探討其在惡性黑素瘤細(xì)胞內(nèi)的定位及其功能。 方法：克隆出人全長XPD cDNA，將該基因構(gòu)建入pEGFP-N1/XPD質(zhì)粒，利用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pEGFP-N1/XPD及pcDNA3.1(+)/XPD至人惡性黑素瘤A375細(xì)胞，檢測XPD蛋白的表達(dá)，然后利用GM130和KDEL進(jìn)行染色，觀察基因XPD的細(xì)胞定位。細(xì)胞增殖力檢測使用MTT法。 結(jié)果：1.培養(yǎng)Hela細(xì)胞并進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄，PCR克隆了人全長XPD cDNA，電泳在約1234bp處見條帶。2.將XPD基因連入PEGFP載體并測序鑒定，測序結(jié)果與GenBank中人XPD進(jìn)行比對，結(jié)果一致。4. XPD在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的高表達(dá)。5. PEGFP/XPD重組質(zhì)粒定位于A375細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。6.與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)組和空白對照組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)/XPD組惡性黑素瘤A375細(xì)胞數(shù)較少，XPDA375細(xì)胞的生長被XPD基因抑制。 結(jié)論：1.從Hela細(xì)胞中成功克隆出同源盒基因XPD。2.構(gòu)建pEGFP-N1/XPD質(zhì)粒。3.用免疫熒光染色證實(shí)XPD基因定位于惡性黑素瘤A375細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。4. A375細(xì)胞的生長被XPD基因抑制。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5
【目錄】：

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