本文選題：褐藻多糖硫酸酯 + 黑色素瘤��； 參考：《西南醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：背景:黑色素瘤(melanoma)是常見的皮膚惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在皮膚惡性腫瘤中為第三,死亡率為第一。針對黑色素瘤的治療方法較多,包括手術(shù)、放化療、免疫治療、個(gè)性化生物治療、個(gè)體靶向治療等。但這些治療方法仍存療效不高、副作用較大等問題。因此,研究新的有效的預(yù)防和治療黑色素瘤的藥物顯得十分的重要。褐藻多糖硫酸酯(fucoidan)是從褐藻或無脊椎動(dòng)物中提取的,具有多種生物學(xué)活性,大量研究發(fā)現(xiàn)褐藻多糖硫酸酯對肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤均有一定抗腫瘤治療作用。褐藻多糖硫酸酯不僅可以通過多種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,還與某些藥物具有協(xié)同作用,能增加機(jī)體對化療藥物的敏感性及療效并減少其毒性。國外有學(xué)者在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)褐藻多糖硫酸酯對黑色素瘤(B16)細(xì)胞有抑制增殖和促進(jìn)凋亡的作用,目前國內(nèi)尚無褐藻多糖硫酸酯對黑色素瘤細(xì)胞作用的研究。目的:通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究褐藻多糖硫酸酯對人惡性黑色素瘤A375系細(xì)胞增殖和凋亡的影響,以及凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的表達(dá)情況。為其應(yīng)用于黑色素瘤的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)人黑色素瘤A375系細(xì)胞,用不同濃度褐藻多糖硫酸酯預(yù)處理細(xì)胞24h后,通過CCK8檢測細(xì)胞增殖并計(jì)算出細(xì)胞增殖抑制率,繪制量效曲線,得出其半數(shù)增殖抑制濃度(IC50)。通過Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)法流式細(xì)胞儀觀察其對細(xì)胞凋亡的影響;以蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)水平的變化,初步探討褐藻多糖硫酸酯對人黑色素瘤細(xì)胞增殖和凋亡功能的影響。結(jié)果:與空白對照組相比,CCK8檢測結(jié)果顯示褐藻多糖硫酸酯作用24h后,A375細(xì)胞的增殖抑制率隨藥物濃度的增加而增高,計(jì)算出其半數(shù)增殖抑制濃度為(IC50)0.51mg/ml;流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果表明褐藻多糖硫酸酯作用后細(xì)胞的凋亡率明顯增高;Western blot的結(jié)果表明:隨著褐藻多糖硫酸酯濃度的增加,Caspase-3的表達(dá)水平增高。結(jié)論:褐藻多糖硫酸酯可以抑制人黑色素瘤A375系細(xì)胞的增殖并促進(jìn)該細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:Background: melanoma is one of the most common malignant skin tumors. Its morbidity is the third and mortality is the first among the malignant skin tumors. There are many methods for the treatment of melanoma, including surgery, radiotherapy and chemotherapy, immunotherapy, individualized biotherapy, individual targeted therapy and so on. However, these treatments are still not high efficacy, side effects and other problems. Therefore, it is very important to study new effective drugs for the prevention and treatment of melanoma. Fucoidan is derived from brown algae or invertebrates, and has many biological activities. A large number of studies have found that fucoidan sulfates from brown algae are effective against lung, colon, breast and stomach cancer. Many kinds of tumor, such as liver cancer, have certain anti-tumor effect. Fucoidan sulfate can not only promote apoptosis of tumor cells through various mechanisms, but also have synergistic effect with some drugs. It can increase the sensitivity and efficacy of the body to chemotherapy drugs and reduce its toxicity. Some foreign scholars have found that fucoidan sulfate can inhibit proliferation and promote apoptosis of melanoma B16 cells in vitro. There is no study on the effect of fucoidan sulfate on melanoma cells. Aim: to study the effect of polysaccharide sulfate of brown algae on proliferation and apoptosis of human malignant melanoma cell line A375 in vitro and the expression of apoptosis-related protein (Caspase-3). To provide experimental and theoretical basis for the clinical treatment of melanoma. Methods: human melanoma A375 cells were cultured in vitro. After 24 h pretreatment with different concentrations of brown algae polysaccharide sulfate, the proliferation of A375 cells was measured by CCK8, the inhibition rate of cell proliferation was calculated, the dose-response curve was drawn, and the IC50 ~ (50) inhibition concentration was obtained. The effect of Annexin V-FITC/PI on apoptosis was observed by flow cytometry, and the expression of apoptotic protein Caspase-3 was detected by Western blotting. To study the effect of polysaccharide sulfate of brown algae on proliferation and apoptosis of human melanoma cells. Results: compared with the control group, the results of CCK8 detection showed that the inhibition rate of proliferation of A375 cells increased with the increase of drug concentration after 24 hours of treatment with polysaccharide sulfate of brown algae. The results of flow cytometry analysis showed that the apoptosis rate of the cells treated with polysaccharides sulfate from brown algae increased significantly. The results showed that: with the concentration of polysaccharides sulfate of brown algae, the cell apoptosis rate was increased with the concentration of fucoidan sulfate. The expression of Caspase-3 was increased. Conclusion: fucoidan sulfate can inhibit the proliferation of human melanoma cell line A375 and promote the apoptosis of A375 cell line.
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.5

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本文編號(hào)：1918423