本文選題：BRAF抑制劑 + 耐藥機(jī)制�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景黑色素瘤是來源于黑色素細(xì)胞的一類惡性腫瘤,常見于皮膚,是惡性程度最高的皮膚腫瘤。既往治療晚期黑色素瘤的藥物種類少,療效低,預(yù)后很差。近年來,免疫治療和個(gè)體化靶向治療的發(fā)展使黑色素瘤的治療取得了突破性進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn),40-60%的黑色素瘤患者存在BRAF基因突變,其中90%為BRAFV600E突變,因此,靶向BRAF的小分子抑制劑成為研究熱點(diǎn)。維羅非尼(Vemurafenib,PLX4032)是2011年批準(zhǔn)進(jìn)入臨床應(yīng)用的一種選擇性BRAF抑制劑,直接靶向抑制MAPK信號(hào)通路活性,顯著延長(zhǎng)了患者的無進(jìn)展生存期(PFS)和總生存期(OS),然而,大多數(shù)患者在治療1年內(nèi)發(fā)生耐藥,出現(xiàn)病情進(jìn)展。已報(bào)道的耐藥機(jī)制主要有NRAS和MEK1突變或EGFR、PDGFRb、FGFRs和IGF1R等酪氨酸激酶受體(RTK)的過表達(dá)引起的MAPK信號(hào)通路再活化或PI3K/AKT信號(hào)旁路的激活等。PTEN是重要的抑癌基因,30%的黑色素瘤發(fā)生PTEN突變,且常與BRAF突變同時(shí)發(fā)生。PTEN缺失可通過活化PI3K/AKT通路和抑制細(xì)胞凋亡導(dǎo)致BRAF抑制劑的原發(fā)耐藥,然而,某些PTEN突變型黑色素瘤仍然對(duì)BRAF抑制劑敏感。因此,PTEN基因狀態(tài)與BRAF抑制劑耐藥的關(guān)系目前并不完全清楚。本文重點(diǎn)研究PTEN基因狀態(tài)是否影響黑色素瘤對(duì)BRAF抑制劑的獲得性耐藥及其具體機(jī)制。內(nèi)容和方法1.以逐步增加藥物劑量法誘導(dǎo)構(gòu)建6株BRAF抑制劑耐藥人黑色素瘤細(xì)胞株(4株P(guān)TEN野生型101、103、111和A375sm,2株P(guān)TEN突變型105和M28)。2.Western Blot檢測(cè)PLX4032不同濃度或時(shí)間作用下,耐藥細(xì)胞MAPK和PI3K/AKT信號(hào)通路的活化水平。3.CCK8檢測(cè)BRAF、AKT和MEK抑制劑單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)耐藥細(xì)胞的增長(zhǎng)抑制作用;CalcuSyn2.11軟件分析藥物協(xié)同效應(yīng)。4.磷酸化RTK抗體陣列同時(shí)檢測(cè)42種受體酪氨酸激酶(RTKs)在親代細(xì)胞與耐藥細(xì)胞中的相對(duì)磷酸化水平;以AXL抑制劑R428作用耐藥細(xì)胞株,檢測(cè)耐藥細(xì)胞對(duì)BRAF抑制劑敏感性的變化。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用One-way ANOVA和Student t檢驗(yàn)方法分別進(jìn)行多組數(shù)據(jù)間和兩組數(shù)據(jù)間的比較。結(jié)果1.成功誘導(dǎo)建立6株BRAF抑制劑耐藥人黑色素瘤細(xì)胞株101R、103R、105R、111R、A375smR 和 M28R,耐藥指數(shù) RI 分別為 35.1、89.4、1.9、3.8、22.9 和 19.0。2.MAPK信號(hào)通路在PTEN突變型和野生型耐藥細(xì)胞中均活化;PI3K/AKT通路僅在PTEN野生型耐藥細(xì)胞中活化,在PTEN突變型耐藥細(xì)胞中不活化或表達(dá)下調(diào)。3.PTEN野生型耐藥細(xì)胞中,BRAF抑制劑與AKT抑制劑具有協(xié)同抑制效應(yīng),與MEK抑制劑無協(xié)同抑制效應(yīng);PTEN突變型耐藥細(xì)胞中,BRAF抑制劑與AKT抑制劑或MEK抑制劑均有協(xié)同抑制效應(yīng),其中以與MEK抑制劑的協(xié)同效應(yīng)更好;三種抑制劑聯(lián)合僅在PTEN突變型耐藥細(xì)胞中顯示出比兩藥方案更好的效果。4.受體酪氨酸激酶AXL蛋白的磷酸化水平僅在PTEN野生型耐藥細(xì)胞中明顯升高;通過抑制AXL蛋白的磷酸化水平,耐藥細(xì)胞對(duì)BRAF抑制劑的敏感性恢復(fù),p-AKT的表達(dá)水平下調(diào)。結(jié)論1.不同PTEN基因狀態(tài)的黑色素瘤對(duì)BRAF抑制劑的獲得性耐藥機(jī)制不同。2.PI3K/AKT信號(hào)通路的活化是導(dǎo)致PTEN野生型黑色素瘤對(duì)BRAF抑制劑耐藥的主要機(jī)制之一;MAPK信號(hào)通路活化在PTEN突變型黑色素瘤對(duì)BRAF抑制劑耐藥中起主導(dǎo)作用。3.受體酪氨酸激酶AXL通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路介導(dǎo)PTEN野生型黑色素瘤對(duì)BRAF抑制劑的耐藥,有可能是逆轉(zhuǎn)BRAF抑制劑耐藥的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:In recent years , the expression of PTEN is a selective BRAF inhibitor for the treatment of advanced melanoma , which is a selective BRAF inhibitor for the treatment of advanced melanoma . Conclusion 1 . Activation of the receptor tyrosine kinase AXL protein plays a dominant role in the resistance to BRAF inhibitor . Conclusion 1 . Activation of the receptor tyrosine kinase AXL protein plays a dominant role in the resistance of the BRAF inhibitor .
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.5
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本文編號(hào)：1912912