本文關(guān)鍵詞：脂肪來源干細胞對光老化成纖維細胞的治療作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《復旦大學》 2014年

脂肪來源干細胞對光老化成纖維細胞的治療作用

曾繼平  

【摘要】：皮膚的老化分為兩種,即內(nèi)源性和外源性老化。內(nèi)源性老化是指隨年齡增大,由基因控制的衰老過程；外源性老化主要由紫外線引起,可顯著加速皮膚衰老,表現(xiàn)為粗大皺紋、異常色素沉著、細胞外基質(zhì)降解沉積等。近年來的治療主要集中于逆轉(zhuǎn)真皮層成纖維細胞的改變,使其重新分泌細胞外基質(zhì),促進皮膚新生。本研究通過體外構(gòu)建光老化模型,并采用脂肪來源干細胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)分泌的生長因子進行治療,明確脂肪來源干細胞對光老化FB的作用及其機制。目的：利用亞細胞毒劑量中波紫外線(Ultraviolet B,UVB)反復照射小鼠皮膚成纖維細胞(Murine dermal fibroblasts, MDFs)構(gòu)建體外光老化模型。方法：體外培養(yǎng)原代MDFs至第2代,采用UVB反復照射,劑量選用60、120、180、240mJ/cm2,間隔時間為12小時,共照射4次；每次照射完畢均更換為含1%血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),檢測caspase-3表達和細胞增殖曲線判斷最佳照射劑量；采用最佳劑量進行后續(xù)實驗,在單次照射后立即檢測活性氧的生成,在4次照射后12、24、48小時分別檢測線粒體膜電位、細胞周期、細胞外基質(zhì)分泌功能等。結(jié)果：120 mJ/cm2為最佳劑量；反復UVB可導致細胞出現(xiàn)一系列衰老表型,經(jīng)檢測符合光老化特征改變,并且可避免單次照射劑量過大引起的細胞死亡,或劑量過小引起的細胞修復。結(jié)論：亞細胞毒劑量UVB反復照射可成功建立體外光老化模型,為下一步測試光老化治療藥物或其他手段奠定基礎(chǔ),也可進一步深入研究以闡明光老化機制。目的：探討富含生長因子的ADSCs裂解液(ADSCs-E)皂否治療成纖維細胞的一系列衰老表型。方法：體外培養(yǎng)小鼠ADSCs至P2代,將其消化離心后加入適量裂解液,1ml針頭反復吹打,與培養(yǎng)液(DMEM+1%FBS)混合制成治療液,以鼠成纖維細胞裂解液作為對照。預處理成纖維細胞12h后,采用UVB照射4次,繼續(xù)培養(yǎng)48小時或72小時,觀察細胞形態(tài)、衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色、細胞周期、細胞外基質(zhì)分泌和降解功能的變化；檢測ROS生成和p53等探討有關(guān)機制。結(jié)果：DSCs-E可減少UVB引起的細胞肥大和衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色,還可促進成纖維細胞分泌細胞基質(zhì),減少基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌；ADSCs-E對細胞周期有部分逆轉(zhuǎn)作用,可能是通過減少p53的乙酰化,從而減少細胞周期阻滯。結(jié)論：ADSCs分泌的細胞因子可用于治療光老化成纖維細胞的一系列早衰表型,并具有一定的抗氧化作用。具體發(fā)揮作用的細胞因子是下一步研究的重點。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R758.1
【目錄】：

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