本文關鍵詞：IP-10及納米脂質體槲皮素對人角質形成細胞的效應，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學》 2013年

IP-10及納米脂質體槲皮素對人角質形成細胞的效應

余斌  

【摘要】：銀屑病是一種病因復雜的慢性炎癥性、自身免疫性疾病。人群患病率約為2-3%。銀屑病的組織病理結果顯示為角質形成細胞的過度增殖,淋巴細胞、中性粒細胞等炎癥細胞以及大量炎癥因子、趨化因子如IFN-γ、IL-1、CXCL12、CCL19等的浸潤。這些細胞和相關細胞因子及趨化因子共同參與銀屑病的發(fā)病,對銀屑病局部皮損的形成,以及全身癥狀的產(chǎn)生都發(fā)揮了重要的作用。IFN-γ是關鍵的細胞因子之一。T細胞產(chǎn)生IFN-γ,刺激角質形成細胞產(chǎn)生IL-8、CCL20、CXCL9,尤其是CXCL10,這些細胞因子可以活化更多T細胞,引起炎癥反應的放大。同時,IFN-γ還可誘導THO向TH1轉化。IP-10是由IFN-γ誘導產(chǎn)生的分子量約為10kDa的蛋白質。IP-10也參與了銀屑病的病理生理過程,其可以趨化多種炎癥細胞,如T淋巴細胞、單核細胞和自然殺傷細胞等,促進細胞因子釋放；同時還可促進角質形成細胞的增殖。本研究通過對比IFN-γ和1P-10對人角質形成細胞的效應,進一步探討其在銀屑病發(fā)病中的作用,為銀屑病的病因研究提供實驗依據(jù)。 銀屑病病程較長,是一種反復發(fā)作的疾病�；颊哂盟帟r間長,且隨著發(fā)病次數(shù)的不斷增加,對藥物的反應也會隨之降低。目前糖皮質激素在銀屑病的治療中應用較為廣泛,雖然療效尚可,但長期應用,副作用明顯。可引起皮膚萎縮、毛細血管擴張、毛囊炎、色素沉著或減退等。大面積長期應用強效糖皮質激素制劑可引起全身反應,停藥后甚至誘發(fā)膿皰型或紅皮病型銀屑病。隨著人們生活水平的提高,對生活質量的要求增高,安全性更高、療效性更好的藥物有待研發(fā)。槲皮素及其衍生物是一種黃酮類化合物,廣泛存在于植物界,如山楂、茄子、洋蔥等。其生物活性多樣,包括抗炎、抗腫瘤、抗氧化等,目前抗腫瘤是研究的熱點,而其對銀屑病增殖的角質形成細胞效應的研究較少。本研究通過對比納米脂質體槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)對增生的角質形成細胞的效應,為銀屑病的治療的研究提供一個新的依據(jù)。 目的： 探討IP-10及干擾素-γ(IFN-γ)對人角質形成細胞的作用及其在銀屑病發(fā)病中的機制；并對比納米脂質體槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)對增生的人角質形成細胞的效應。 方法 1.MTT方法檢測細胞生長率及生長抑制率 根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細胞分為nQ組(40μmol/L50/μmol/L、60μmol/L)、Dex組(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)、IFN-γ組(50u/mL、100u/mL、150u/mL)、IP-10組(20ng/μl、30ng/μl、40ng/μl)以及不加藥的對照組(C)。培養(yǎng)48h后,MTT實驗方法檢測細胞生長率及生長抑制率。 2.斑點原位雜交 2.1IP-10及c-myc探針的制備 應用隨機引物法,制備生物素標記IP-10和c-myc探針,應用mRNA斑點原位雜交檢測探針靈敏度。2.2mRNA斑點原位雜交 根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細胞分為nQ組(50μmol/L)、Dex組(10-6mol/L)、IFN-γ組(100u/mL)、IP-10組(30ng/μl)以及不加藥的對照組(C)。48h后,提取各組細胞的總RNA。應用IP-10和c-myc探針的mRNA斑點原位雜交技術對比檢測各組]mRNA的雜交信號。 2.3cDNA斑點原位雜交 (1)根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細胞分為nQ組(50μmol/L)、Dex組(10-6mol/L)、IFN-γ組(100u/mL)、IP-10組(30ng/μl)以及不加藥的對照組(C)。48h后,提取各組細胞的總DNA。 (2)提取正常男性包皮組織及尋常型銀屑病患者病變組織的總DNA。 (3)應用IP-10和c-myc探針的DNA斑點原位雜交技術對比檢測各組細胞及組織的cDNA的雜交信號。 3.統(tǒng)計學分析 應用SPSS16.0軟件進行分析,實驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差(x±s)表示。采用t檢驗比較兩組間總體均值,用LSD-t檢驗進行多個樣本的兩兩比較,檢驗標準為α=0.05,當p0.05時差異有統(tǒng)計學意義。 結果 1.MTT結果顯示：IFN-γ及IP-10的GR和nQ及Dex的GSR均呈劑量依賴性,P0.05。 2.斑點原位雜交 2.1IP-10和c-myc探針結果顯示：兩組探針靈敏度均達0.1pg/μl。 2.2mRNA原位雜交結果顯示：IFN-γ及IP-10的信號高于C組,P0.05； 2.3nQ及Dex的信號低于C組,P0.05。cDNA原位雜交結果顯示：IFN-γ及IP-10的信號高于C組及正常組織,P0.05,IFN-γ及IP-10的信號與病變組織差異無統(tǒng)計學意義,P0.05；聯(lián)合用藥組的信號與正常對照組及正常組織的差異無統(tǒng)計學意義,P0.05。 結論 1.干擾素-γ及IP-10促進人角質形成細胞的生長,其作用為劑量依賴性。 2.槲皮素及地塞米松抑制增殖狀態(tài)的人角質形成細胞的生長,其作用為劑量依賴性。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

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