本文關鍵詞： 仙臺病毒囊膜 小鼠惡性黑色素瘤 黑色素瘤細胞 樹突狀細胞 凋亡　出處：《揚州大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：小鼠惡性黑色素瘤(Malignant melanoma, MM)具有惡性程度高、易轉移和易復發(fā)等特點,目前常規(guī)療法對其治療效果不是很好。研究表明,仙臺病毒囊膜(Hemagglutinating virus of Japan Envelope, HVJ-E)具備強大的抑制或消除腫瘤的功能,且在動物腫瘤模型上得到了驗證,但目前尚未有直接用HVJ-E治療小鼠黑色素瘤的研究報道。因此,我們開展用HVJ-E治療小鼠黑色素瘤的研究,旨在初步探討其抗瘤機制。 首先,通過體外實驗觀察小鼠黑色素瘤細胞(B16F10)經(jīng)HVJ-E作用后的形態(tài)學變化,MTT、流式細胞檢測、免疫組化、免疫印跡法檢測經(jīng)HVJ-E作用后的B16F10細胞的增殖活性、凋亡水平及IGF1R α、β-catenin表達情況。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)結果顯示,PBS陰性對照組細胞貼壁良好,呈梭形,生長活躍,折光性好；而HVJ-E處理組細胞皺縮,破裂,呈不規(guī)則形態(tài),有的細胞兩端出現(xiàn)細長的偽足,脫落細胞增多。MTT法檢測結果顯示,不同濃度的HVJ-E對細胞都有明顯抑制作用并呈劑量-效應關系,500MOI HVJ-E組在處理72h后與同時段對照組相比有顯著差異(p0.05)；1000MOI HVJ-E組在處理72h后與同時段對照組相比差異極顯著(p0.01)；隨著HVJ-E處理濃度的增大,B16F10細胞的凋亡率升高；HVJ-E組的IGF1Rα、β-catenin的表達明顯低于PBS對照組,且隨著HVJ-E處理濃度的增大,IGFlRα、β-catenin蛋白表達量下降。該實驗說明HVJ-E具有直接促使小鼠黑色素瘤細胞凋亡的作用。 其次,通過體外分離培養(yǎng)小鼠骨髓樹突狀細胞(dendritic cell, DC),以500MOIHVJ-E病毒樣粒子刺激小鼠骨髓DC,同時設PBS陰性對照與LPS陽性對照,培養(yǎng)48h后,檢測各組DC細胞上清中細胞因子的分泌水平和DC細胞表面分子的表達率。結果顯示,HVJ-E處理組DC細胞分泌的IFN-β、IFN-γ水平顯著高于PBS、LPS對照組(p0.05),IL-6、TNF-α水平顯著高于PBS對照組(p0.05),但略低于LPS對照組；HVJ-E處理組的DC細胞表面分子CD80、CD40、CDllc和MHCⅡ均呈高表達。該實驗說明HVJ-E能夠刺激未成熟DC成熟并且分泌細胞因子從而發(fā)揮抗瘤作用。 最后,通過C57BL/6J小鼠皮內接種B16F10細胞制作小鼠黑色素瘤模型,待瘤體直徑達0.5cm時,將荷瘤小鼠隨機分組,每組20只,實驗組小鼠瘤內注射HVJ-E病毒樣粒子,同時設PBS陰性對照組,4天之后重復治療,連續(xù)治療3次,每次治療后測量腫瘤體積,觀察并分析荷瘤鼠的存活率。另取兩組荷瘤小鼠,每組6只,瘤內注射HVJ-E病毒樣粒子,同時設PBS陰性對照,連續(xù)注射3天,最后1次注射后24,48,120h時,每組各處死2只小鼠,分別取瘤組織進行熒光定量PCR檢測CD4, CD8, CXCL10, CDllc, IL-2, MITF, IGFIRα, β-catenin mRNA的轉錄水平。治療結果表明,HVJ-E治療組小鼠的腫瘤體積顯著小于PBS對照組,且在成瘤后40天內,HVJ-E治療組小鼠的存活率為80%,而對照組為0%。熒光定量PCR結果顯示HVJ-E治療組CD4, CD8, CXCL10, CDllc, IL-2mRNA轉錄水平在24,48,120h時均高于PBS對照組,MITF, IGFIRα,β-catenin mRNA轉錄水平在24,48h時均低于PBS對照組。該實驗說明HVJ-E能激發(fā)機體的特異性與非特異性細胞免疫,從而延長黑色素瘤小鼠的生存期。 體內外實驗證明仙臺病毒囊膜(HVJ-E)能刺激DC成熟,釋放細胞因子,并具備潛在的免疫增強效應；HVJ-E能直接誘導小鼠黑色素瘤細胞凋亡,其作用機制可能與MITF, IGF1R α和β-catenin的表達下降有關；HVJ-E直接進行瘤內注射后能顯著抑制小鼠惡性黑色素瘤的生長,延長荷瘤小鼠的生存期,其作用機制不僅僅體現(xiàn)在HVJ-E可誘導特異性細胞免疫的產(chǎn)生,還可能是HVJ-E的致腫瘤細胞凋亡效應,但具體的作用機制仍需進一步的研究�？梢钥隙ǖ氖�,HVJ-E可有效減緩腫瘤的生長和延長荷瘤鼠生存期,并有望為黑色素瘤治療提供新的理論依據(jù)和方法。
[Abstract]:The malignant melanoma ( MM ) of mice has the characteristics of high malignancy degree , easy metastasis and easy recurrence . The study shows that Hemaglobating virus of Japan Envelope ( HVJ - E ) has the function of inhibiting or eliminating the tumor and has been verified on animal tumor model . However , it has not been reported directly by HVJ - E in the treatment of mouse melanoma . Therefore , we have carried out the study of treating mouse melanoma with HVJ - E , aiming at initially exploring its anti - tumor mechanism . The expression of IGF1R 偽 , 尾 - catenin in HVJ - E group was significantly lower than that in control group ( P < 0.01 ) . The results showed that the levels of IFN - 尾 and IFN - 緯 were significantly higher in HVJ - E treated group than in PBS , LPS control group ( P < 0.05 ) , IL - 6 and TNF - 偽 were significantly higher than that in PBS control group ( P < 0.05 ) . The results showed that HVJ - E could stimulate immature DC maturation and secrete cytokines to exert anti - tumor effect . The results showed that HVJ - E could stimulate the specific non - specific cell immunity of mice and prolong the survival time of melanoma mice . HVJ - E can significantly inhibit the growth of mouse melanoma cells and prolong the survival of tumor - bearing mice . The mechanism of HVJ - E can significantly inhibit the growth of mouse malignant melanoma and prolong the survival time of tumor - bearing mice .

【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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1 張正華,劉維達;黑素瘤疫苗的研究進展[J];國外醫(yī)學(皮膚性病學分冊);2003年04期

2 王娜,陸洪光;黑色素瘤相關基因的研究新進展[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);2004年S1期

3 李春英,劉玉峰,高天文;惡性黑素瘤免疫治療研究進展[J];臨床皮膚科雜志;2003年09期

4 羅雪菲;鐘振國;王坤;;腫瘤免疫治療技術及其研究進展[J];遼寧中醫(yī)藥大學學報;2010年03期

5 趙明東,胡雪梅,孫殿敬,莊悅新,馮秀栓,張迪,孟瑋;胰島素樣生長因子-1及其受體在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用[J];腫瘤防治雜志;2004年01期

6 王強;陳德玉;;以樹突狀細胞疫苗為基礎的腫瘤免疫治療[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2008年12期

7 呂海燕;王瑤;黃建華;郭佳;汪濤;;樹突狀細胞瘤內注射聯(lián)合放療對小鼠腎癌細胞因子的影響[J];實驗動物科學;2008年06期

8 范子榮,楊冬華,覃漢榮,黃純熾,徐重,邱慶林;肝癌和癌旁肝組織中IGF-Ⅰ,IGF-Ⅰ受體mRNA的表達[J];世界華人消化雜志;1999年10期

9 李若冰,陳紅松,費然,叢旭,孫婧,魏來,王宇;慢性乙型肝炎病人外周血樹突狀細胞功能的研究[J];中華醫(yī)學雜志;2002年13期

10 袁立軍;李曉眠;李梅;;仙臺病毒基因結構與功能的研究進展[J];中國病原生物學雜志;2006年06期

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本文編號：1471351