本文關(guān)鍵詞：人表皮細(xì)胞對(duì)胰酶耐受及黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： 人表皮細(xì)胞 耐受性 胰酶消化作用 黑素小體 角質(zhì)形成細(xì)胞 吞噬

【摘要】：目的:觀察人表皮細(xì)胞對(duì)胰酶消化的耐受能力,探索分離和純化表皮細(xì)胞的新方法,探討胰酶耐受細(xì)胞的干性表達(dá)。并在原代細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,探索角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocyte,KC)對(duì)黑素小體(Melanosome,MS)的吞噬,同時(shí)驗(yàn)證煙酰胺對(duì)吞噬的抑制作用。方法:(1)中性蛋白酶及胰酶消化獲取表皮細(xì)胞,用0.25%的胰酶懸浮表皮細(xì)胞,以3.0×105/ml的細(xì)胞密度種植于12孔板,每間隔半小時(shí)或1小時(shí)終止胰酶1孔,其中胰酶作用時(shí)間最長達(dá)46小時(shí),同樣地胰酶處理培養(yǎng)過的表皮細(xì)胞,記錄不同細(xì)胞貼壁時(shí)間、生長狀態(tài),并在接種后第7天,對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行Nestin、Sox10抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色。(2)從人毛發(fā)中提取的黑素小體經(jīng)透射電鏡檢測后,加到人原代角質(zhì)形成細(xì)胞中,觀察黑素小體是否被吞噬,用HMB-45抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測。同時(shí)利用Millicell建立了黑素細(xì)胞(Melanocyte,MC)和角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)模型,用HMB-45熒光抗體標(biāo)記角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬的黑素小體,并分別加煙酰胺進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果:(1)隨著胰酶作用時(shí)間的延長,貼壁細(xì)胞數(shù)目遞減,細(xì)胞貼壁所用時(shí)間也延長。所有孔中最早出現(xiàn)的貼壁細(xì)胞為樹突狀細(xì)胞,這些細(xì)胞開始生長緩慢,大約4天后生長迅速,10天后部分孔出現(xiàn)魚群樣細(xì)胞團(tuán)。培養(yǎng)過的表皮細(xì)胞胰酶消化后結(jié)果和原代細(xì)胞類似,但不出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)。部分孔經(jīng)Nestin、SOX10抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果均為陽性,其中以Nestin抗體較明顯。(2)角質(zhì)形成細(xì)胞能吞噬從人毛發(fā)中提取的黑素小體,在共培養(yǎng)模型中,黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑素小體可以通過孔徑為8微米的孔膜,并被其下的角質(zhì)形成細(xì)胞所吞噬,兩者均驗(yàn)證了煙酰胺抑制吞噬作用。結(jié)論:(1)人表皮細(xì)胞對(duì)胰酶消化的耐受能達(dá)46小時(shí),中和后,黑素細(xì)胞貼壁早于角質(zhì)形成細(xì)胞,貼壁后大多數(shù)細(xì)胞增殖力強(qiáng),干細(xì)胞表面標(biāo)記顯示陽性。(2)角質(zhì)形成細(xì)胞可以吞噬從毛發(fā)中提取的黑素小體,Millicell共培養(yǎng)模型可以用于黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的研究中,并為黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的研究提供新方法,從而為美白制劑的篩選提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R751

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宋東穎;王毅;孫嵐;張英鴿;;腫瘤干細(xì)胞理論及腫瘤干細(xì)胞分離和鑒定研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2012年05期

，

本文編號(hào)：1252681