本文關鍵詞：PCBP1在皮膚鱗狀細胞癌干細胞維持中的作用研究

  更多相關文章： 多聚胞嘧啶結合蛋白1 皮膚鱗狀細胞癌 腫瘤干細胞 干細胞維持 轉錄后調控

【摘要】：目的：研究皮膚鱗狀細胞癌(Skin squamous-cell carcinoma, SCC)干細胞維持過程中多聚胞嘧啶結合蛋白PCBP1的表達,并在體外和體內(nèi)驗證其對SCC發(fā)生發(fā)展的作用,進一步研究調控PCBP1在SCC干細胞維持過程中表達抑制的內(nèi)在分子機制。方法：1、采取無血清成球培養(yǎng)法從SCC細胞系COLO-16富集腫瘤干細胞(Cancer Stem Cells, CSCs),使之繼續(xù)增殖、去分化、建立較為穩(wěn)定的CSC細胞,利用流式細胞技術和免疫熒光技術驗證細胞內(nèi)腫瘤自我更新標志物和干細胞標志物的表達情況,判斷CSC建系是否成功.2、將上述CSC細胞正常連續(xù)培養(yǎng)3天,分別收取每天CSC細胞的RNA和總蛋白,利用定量PCR和免疫印跡實驗檢測CSC干性維持過程中PCBP1的表達變化。3、構建PCBP1過表達的CSC細胞系和對照細胞系,通過軟瓊脂克隆形成實驗和裸鼠成瘤實驗闡述PCBP1在SCC發(fā)生發(fā)展中的作用。4、利用生物信息學工具Targetscan發(fā)現(xiàn)PCBP1基因3'-UTR區(qū)域含有較為保守的微小NA-490-3p(miR-490-3p)種子序列,利用定量PCR驗證miR-490-3p在CSC干性維持過程中的表達情況。5、富集多核糖體結合的mRNA,檢測翻譯依賴性的PCBP1 mRNA表達,確認PCBP1在CSC干性維持中表達下降的調控層面。6、構建包含PCBP1基因3'-UTR區(qū)域的螢光素酶報告基因質粒及對應的突變質粒,驗證miR-490-3p表達改變對PCBP1的直接調控。7、進一步在20例臨床SCC組織樣本中檢測miR-490-3pp和PCBP1的表達,分析二者表達的相關性。結果：1、我們從COLO-16細胞系中成功富集、擴增得到CD34陽性的CSC細胞,干細胞標志物如CD44、SSEA4、TR1-60、和TR1-81都呈陽性表達。2.發(fā)現(xiàn)在CSC干性維持過程中,PCBP1基因mRNA水平表達較為穩(wěn)定,但隨CSC細胞培養(yǎng)時間延長,PCBP1蛋白表達顯著下降。3、在上述獲得的CD34+CD44+CSC細胞中過表達PCBP1,可顯著抑制其在體外的增殖能力和裸鼠體內(nèi)成瘤能力.4、發(fā)現(xiàn)miR-490-3p可靶向PCBP1基因3'-UTR,在CSC干性維持過程中miR-490-3p表達呈逐漸增加趨勢。5、多核糖體結合的iRNA中,PCBP1在CSC干性維持后期表達下降,證實其蛋白表達下降的機制是轉錄后的翻譯水平調控。6、PCBP1 3'-UTR體外熒光素酶報告基因實驗證實miR-409-3p的表達高低可直接影響螢光素酶活性,即PCBP1是miR-490-3p的真實靶點。7、SCC組織樣本中也發(fā)現(xiàn)miR-490-3p表達異常增加、PCBP1表達下降,二者表達呈負性相關。結論：PCBP1在SCC干細胞維持過程中蛋白表達下降,可抑制SCC體外增殖和體內(nèi)成瘤能力,其表達受到上游niR-490-3p的負向調控,二者在SCC組織中表達呈負相關。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳京杰;頭部皮膚鱗狀細胞癌1例[J];山東醫(yī)藥;2005年01期

2 Mehrany K.;Weenig R.H.;Lee K.K. ;崔榮;;慢性淋巴細胞性白血病患者的皮膚鱗狀細胞癌的轉移率和死亡率增加[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2006年03期

3 趙天恩;鄭家潤;;皮膚鱗狀細胞癌研究進展[J];國際皮膚性病學雜志;2006年04期

4 呂全興;于桂英;;74例皮膚鱗狀細胞癌的臨床與病理分析[J];黑龍江醫(yī)學;2010年06期

5 孫瑩;鄭華;于艷;陳曉偉;;皮膚鱗狀細胞癌74例臨床病理分析[J];中國老年學雜志;2010年19期

6 王俊啟;燙傷瘢痕繼發(fā)皮膚鱗狀細胞癌1例[J];中國皮膚性病學雜志;1997年03期

7 黃云麗,李峰,余秀峰,呂昭萍,李紅賓;皮膚鱗狀細胞癌并短帚霉菌感染1例報告[J];云南醫(yī)藥;2004年03期

8 Lindel銉f B;Jarnvik J.;Ternesten-Bratel A. ;馮義國;;器官移植受者患皮膚鱗狀細胞癌的病死率和臨床病理特征:瑞典的一項隊列研究[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(皮膚病學分冊);2006年09期

9 楊穎濤;劉林]，

本文編號：1164310