本文關(guān)鍵詞：Nodal-Cripto-1信號(hào)分子用于黑色素瘤治療策略的研究

  更多相關(guān)文章： Nodal-Cripto-1 細(xì)胞微囊化 Lefty 單克隆抗體

【摘要】：近年來(lái)，惡性黑色素瘤的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)快速增長(zhǎng)，已經(jīng)成為人類皮膚類癌癥中第三大疾病，并且由于它的預(yù)后高風(fēng)險(xiǎn)和極高的腫瘤轉(zhuǎn)移率大大提高了人們治愈它的難度。盡管人們對(duì)黑色素瘤的研究數(shù)十年來(lái)從未間斷，但患者的存活率卻始終得不到有效提升，尤其當(dāng)患者體內(nèi)形成轉(zhuǎn)移瘤后，問(wèn)題將變得更加麻煩。 研究表明，胚胎微環(huán)境具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞惡性表型的作用，這其中Nodal-Cripto-1信號(hào)分子起到了決定性作用。本論文基于腫瘤發(fā)生的組織結(jié)構(gòu)場(chǎng)學(xué)說(shuō)和表觀遺傳學(xué)理論，利用細(xì)胞微囊化技術(shù)，將能夠穩(wěn)定分泌Nodal抑制因子Lefty和Nodal受體Cripto-1單克隆抗體的細(xì)胞株包覆在微囊內(nèi)，成功構(gòu)建了微囊緩釋系統(tǒng)，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究，證實(shí)該緩釋系統(tǒng)能夠抑制B16腫瘤的生長(zhǎng)。 本研究首先通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)成功構(gòu)建了HEK293-pCDNA3.1-LEFTY1和HEK293-IRES-GFP-LEFTY2細(xì)胞株，經(jīng)檢測(cè)該細(xì)胞株具有穩(wěn)定表達(dá)Lefty1和Lefty2的能力；并通過(guò)雜交瘤技術(shù)成功制備出抗Cripto-1-KVFELGLVAGLGHQE多肽的單克隆抗體細(xì)胞株2株，命名為2B11和2H7，經(jīng)檢測(cè)其ELISA效價(jià)分別為1：32000和1：16000。 利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的高壓靜電裝置，我們使用高壓滴定法成功制備出直徑200μm的明膠-海藻酸鈉復(fù)合細(xì)胞微囊，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞能夠在微囊內(nèi)貼附生長(zhǎng)；為確保微囊結(jié)構(gòu)穩(wěn)固，我們根據(jù)正負(fù)離子間易形成離子鍵的原理，利用多聚賴氨酸和海藻酸鈉對(duì)微囊進(jìn)行多層包覆，實(shí)驗(yàn)證明該微囊能在ICR小鼠體內(nèi)存在3周以上。 利用該細(xì)胞微囊，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究，我們發(fā)現(xiàn)：Lefty1能夠促進(jìn)B16細(xì)胞凋亡，并將B16腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為惡性程度低的黑色素樣細(xì)胞，從而抑制B16腫瘤的生長(zhǎng)；2B11分泌的抗Cripto-1單克隆抗體能夠抑制B16腫瘤血管再生，并降低腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力，從而顯著抑制B16腫瘤的生長(zhǎng)，并表現(xiàn)出治愈B16腫瘤的趨勢(shì)。 該方法將工程化外源細(xì)胞包覆到微囊內(nèi)，避免了細(xì)胞移植的異體反應(yīng)，與常規(guī)的藥物緩釋技術(shù)相比具有緩釋時(shí)間長(zhǎng)、藥物濃度穩(wěn)定、方便快捷的優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)本論文以組織結(jié)構(gòu)場(chǎng)和表觀遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，突破了常規(guī)腫瘤治療的思路，為腫瘤治療開辟了新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：Nodal-Cripto-1 細(xì)胞微囊化 Lefty 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 緒論9-21
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義9-10
• 1.1.1 課題來(lái)源9
• 1.1.2 研究目的及意義9-10
• 1.2 腫瘤發(fā)生機(jī)制及黑色素瘤研究進(jìn)展10-14
• 1.2.1 腫瘤發(fā)生機(jī)制的學(xué)說(shuō)演變10-11
• 1.2.2 Nodal-Cripto-1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在腫瘤發(fā)生中的作用11-13
• 1.2.3 黑色素瘤治療研究進(jìn)展13-14
• 1.3 細(xì)胞微囊化緩釋系統(tǒng)的研究與改進(jìn)14-18
• 1.3.1 高分子半透膜的保護(hù)作用和機(jī)制15-16
• 1.3.2 半透膜通透性的控制16-17
• 1.3.3 細(xì)胞微囊化材料選取17
• 1.3.4 微囊的形狀17
• 1.3.5 細(xì)胞微囊化技術(shù)的臨床應(yīng)用17-18
• 1.3.6 細(xì)胞微囊化技術(shù)的挑戰(zhàn)18
• 1.4 本課題的主要研究?jī)?nèi)容18-21
• 1.4.1 穩(wěn)定緩釋信號(hào)分子的細(xì)胞株的制備和獲取18-19
• 1.4.2 微囊化細(xì)胞緩釋 Lefty 用于 B16 腫瘤治療的研究19-20
• 1.4.3 微囊化細(xì)胞緩釋抗 Cripto-1 單克隆抗體用于 B16 腫瘤治療的研究20
• 1.4.4 課題主要實(shí)驗(yàn)路線圖20-21
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法21-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-25
• 2.1.1 主要試劑21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物21-22
• 2.1.3 主要儀器及耗材22-23
• 2.1.4 主要分析軟件23
• 2.1.5 培養(yǎng)基及配制23
• 2.1.6 緩沖液及其他溶液的配制23-25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-33
• 2.2.1 高壓靜電法制備海藻酸鈉微囊25-26
• 2.2.2 穩(wěn)定分泌抗 Cripto-1 小鼠單克隆抗體的細(xì)胞株的制備26-27
• 2.2.3 細(xì)胞微囊化用于黑色素瘤治療的體外研究27-29
• 2.2.4 細(xì)胞微囊化用于黑色素瘤治療的體內(nèi)研究29-33
• 2.3 本章小結(jié)33-34
• 第3章 細(xì)胞微囊緩釋 Lefty 用于 B16 腫瘤逆轉(zhuǎn)治療的研究34-44
• 3.1 引言34
• 3.2 海藻酸鈉微囊緩釋系統(tǒng)的構(gòu)建34-35
• 3.3 微囊化細(xì)胞促進(jìn) B16 腫瘤細(xì)胞凋亡的檢測(cè)35-36
• 3.4 微囊化細(xì)胞用于腫瘤逆轉(zhuǎn)的體內(nèi)研究36-42
• 3.4.1 B16 腫瘤模型在 ICR 小鼠體內(nèi)的構(gòu)建36-37
• 3.4.2 微囊化細(xì)胞用于腫瘤治療后瘤體大小及質(zhì)量變化37-39
• 3.4.3 ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠體內(nèi) Lefty 因子緩釋情況39-40
• 3.4.4 HE 染色進(jìn)行腫瘤組織病理學(xué)研究40-42
• 3.4.5 western-blot 測(cè)定治療后腫瘤組織細(xì)胞 Nodal 抑制情況42
• 3.5 討論42-43
• 3.6 本章小結(jié)43-44
• 第4章 細(xì)胞微囊緩釋 Cripto-1 抗體用于 B16 腫瘤逆轉(zhuǎn)治療的研究44-52
• 4.1 引言44
• 4.2 微囊化細(xì)胞用于腫瘤逆轉(zhuǎn)的體內(nèi)研究44-49
• 4.2.1 微囊化細(xì)胞用于腫瘤治療后瘤體大小及質(zhì)量變化44-45
• 4.2.2 HE 染色進(jìn)行腫瘤組織病理學(xué)研究45-46
• 4.2.3 免疫組織化學(xué)及 western-blot 探究腫瘤逆轉(zhuǎn)治療的機(jī)理46-49
• 4.3 討論49-50
• 4.4 本章小結(jié)50-52
• 結(jié)論52-53
• 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果60-62
• 致謝62

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8 記者 張e

本文編號(hào)：1125327