本文關(guān)鍵詞：一氧化氮在ALA光動(dòng)力誘導(dǎo)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞凋亡中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 5-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法 人表皮鱗癌 一氧化氮 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 凋亡 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑 1400w 一氧化氮供體 SNP

【摘要】：目的： 探索5-氨基酮戊酸光動(dòng)力(5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT)誘導(dǎo)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞凋亡過程中NO的作用,以深入認(rèn)識(shí)ALA-PDT治療鱗狀細(xì)胞癌的分子機(jī)制。 方法： 1、培養(yǎng)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 2、在最佳ALA孵育濃度1mM,最佳孵育時(shí)間點(diǎn)5h時(shí),采用30mW/cm2功率密度的630nm紅光作為光源,給予不同光劑量(2J/cm2,4J/cm2)對(duì)A431細(xì)胞進(jìn)行ALA-PDT處理,采用磷脂結(jié)合蛋白V (Annexin V)/碘化丙錠(PI)雙染法通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ALA-PDT后不同時(shí)間點(diǎn)(4h,12h,20h,24h),人皮膚鱗癌A431細(xì)胞凋亡情況。 3、western blot法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)A431細(xì)胞內(nèi)iNOS的表達(dá)情況。 4、Griss法檢測(cè)ALA-PDT后不同時(shí)間點(diǎn)(4h,12h,20h,24h) A431細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO的釋放情況。 5、通過上述實(shí)驗(yàn)確定最佳光照劑量及最佳的觀察時(shí)間點(diǎn),在ALA-PDT處理的同時(shí)分別給予iNOS抑制劑1400w和外源性NO供體SNP, CCK-8法檢測(cè)各組A431細(xì)胞增殖情況,倒置相差顯微鏡及HE染色后觀察凋亡的形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞的嗜酸性變化,同時(shí)采用磷脂結(jié)合蛋白V (Annexin V)/碘化丙錠(PI)雙染法通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ALA-PDT誘導(dǎo)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞的凋亡情況。 結(jié)果： 1、成功培養(yǎng)了A431細(xì)胞,觀察其正常形態(tài)并繪制了其生存曲線。 2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到ALA-PDT組A431細(xì)胞凋亡率隨著時(shí)間的增加而增加,且光劑量為4J/cmm2時(shí)細(xì)胞凋亡率較2J/cmm2多,呈一定的時(shí)間及劑量依賴性,較其他對(duì)照組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。 3、Griss法檢測(cè)到ALA-PDT處理后NO水平隨著時(shí)間的增加而增加,且光劑量為4J/cm2時(shí)產(chǎn)生的NO量較2J/cm2多,呈一定的時(shí)間及劑量依賴性,較其他對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),且western blot檢測(cè)到光劑量2J/cm2時(shí)ALA-PDT組iNOS的表達(dá)量隨時(shí)間增加而增加。 5、分別給予iNOS抑制劑1400w和外源性NO供體SNP后,ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT聯(lián)合SNP組及單純SNP組與單純ALA組、單純照光組、空白對(duì)照組相比細(xì)胞存活率明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05), ALA-PDT聯(lián)合1400w組細(xì)胞生存率較ALA-PDT組高,而ALA-PDT聯(lián)合SNP組較ALA-PDT組生存率低,單純SNP組細(xì)胞較ALA-PDT聯(lián)合SNP組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 6、倒置相差顯微鏡下可見ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合SNP組細(xì)胞及單純SNP組細(xì)胞與單純ALA組、單純635nm紅光組及空白對(duì)照組相比,細(xì)胞皺縮、變圓,ALA-PDT聯(lián)合SNP組細(xì)胞皺縮、變圓程度較ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組強(qiáng),ALA-PDT組次之,ALA-PDT聯(lián)合1400w組相對(duì)較弱。 7、HE染色后光鏡下可見ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組及ALA-PDT聯(lián)合SNP組細(xì)胞組、單純SNP組與單純ALA組、單純635nm紅光組及空白對(duì)照組相比,嗜酸性染色增強(qiáng),ALA-PDT聯(lián)合SNP組細(xì)胞體積縮小,胞質(zhì)致密、嗜酸性染色增強(qiáng)程度較ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組、單純SNP組強(qiáng),視野下呈樹葉散落狀,ALA-PDT組次之,ALA-PDT聯(lián)合1400w組相對(duì)較弱。 8、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合1400w組及ALA-PDT聯(lián)合SNP組細(xì)胞凋亡率與單純ALA組、單純635nm紅光組、單純1400w組及空白對(duì)照組相比明顯增高(p0.05)。 結(jié)論： 1、ALA-PDT可以抑制人皮膚鱗癌A431細(xì)胞的增殖；小劑量的ALA-PDT主要通過凋亡方式誘導(dǎo)鱗癌A431細(xì)胞死亡,且有一定的時(shí)間劑量依賴性； 2、A431細(xì)胞株本身可以釋放少量的NO,在ALA-PDT治療過程中NO的產(chǎn)生量增多,且呈一定的時(shí)間劑量依賴性,而NO的產(chǎn)生受其上游iNOS合酶的限制,NOS表達(dá)量上調(diào)可致細(xì)胞內(nèi)源性NO的釋放增多,同時(shí)可釋放到細(xì)胞外； 3、NO在ALA-PDT誘導(dǎo)A431細(xì)胞的凋亡過程中起著促進(jìn)用,外源性給予NO供體可與ALA-PDT起著協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：5-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法 人表皮鱗癌 一氧化氮 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 凋亡 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑 1400w 一氧化氮供體 SNP
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• ~.略詞表4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-17
• 第一部分 研究ALA-PDT誘導(dǎo)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞凋亡中的NO釋放情況及iNOS表達(dá)情況17-30
• 引言17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-30
• 第二部分 初步探索NO在ALA-PDT誘導(dǎo)人皮膚鱗癌A431細(xì)胞凋亡中的作用30-41
• 引言30
• 材料與方法30-35
• 結(jié)果35-39
• 討論39-41
• 全文小結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 碩士期間發(fā)表與待發(fā)表文章47-48
• 綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 宋勇;孫聃;張?zhí)K娟;鄭新亮;;鈣信號(hào)在光動(dòng)力療法中的產(chǎn)生及作用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2008年01期

2 王秀麗,徐世正,張春榮,朱小瑾,夏偉;δ-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法治療男性尿道尖銳濕疣[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2000年02期

3 王秀麗,王宏偉,張春榮;δ-氨基酮戊酸光動(dòng)力療法治療尖銳濕疣的機(jī)理探討[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2001年04期

4 劉金麗;胡白;蔣法興;張思平;趙政龍;吳愛麗;廖理超;;5-氨基酮戊酸-光動(dòng)力療法治療復(fù)發(fā)性尖銳濕疣[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

5 王秀麗,徐世正,張春榮,鄭衛(wèi);5-氨基酮戊酸光動(dòng)力學(xué)療法治療Bowen病[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;1999年01期

，

本文編號(hào)：1091837