本文關(guān)鍵詞：TLR2對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞與不同皮膚癬菌共孵育時(shí)的影響研究

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【摘要】：第一部分角質(zhì)形成細(xì)胞對(duì)不同皮膚癬菌生長(zhǎng)的抑制作用及封閉TLR2對(duì)其的影響 目的 研究角質(zhì)形成細(xì)胞對(duì)紅色毛癬菌、犬小孢子菌及石膏樣小孢子菌生長(zhǎng)的抑制作用以及封閉TLR2對(duì)上述作用的影響。 方法 將培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中的角質(zhì)形成細(xì)胞在5%CO_2、37℃環(huán)境下進(jìn)行孵育，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到80%左右時(shí)分為兩組，以無血清培養(yǎng)基配置的菌絲懸液（懸液濃度為4×10~5/ml）替代原培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)為刺激組（即A組），阻斷組（即B組）則先加入TLR2抗體（使抗體濃度達(dá)到20ug/ml），37℃孵育1小時(shí)以阻斷TLR2的作用，再加入菌懸液，同時(shí)設(shè)立無細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基加入菌絲段懸液為空白對(duì)照。分別制備在不同時(shí)間點(diǎn)（4h、8h、16h和24h）共孵育后的菌絲段懸液，通過臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法計(jì)算得出真菌的生長(zhǎng)抑制率。 結(jié)果 在角質(zhì)形成細(xì)胞和菌絲段懸液共孵育的不同時(shí)間點(diǎn)，采用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)法檢測(cè)的結(jié)果為：紅色毛癬菌刺激組生長(zhǎng)抑制作用4h即顯現(xiàn)，16h可達(dá)（67.8%±3.1%），封閉TLR2后的阻斷組生長(zhǎng)抑制作用減弱，封閉前后生長(zhǎng)抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組犬小孢子菌4h生長(zhǎng)抑制率為41.8%±2.5%，隨時(shí)間推移，16h達(dá)70.0%±6.8%，24h逐漸下降，封閉TLR2后的阻斷組在各時(shí)間點(diǎn)生長(zhǎng)抑制作用均明顯下降，阻斷前后生長(zhǎng)抑制作用差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組石膏樣小孢子菌隨共孵育時(shí)間的延長(zhǎng)生長(zhǎng)抑制作用逐漸加強(qiáng)，24h達(dá)63.0%±3.5%，封閉TLR2阻斷組4h生長(zhǎng)抑制率為15.6%±1.7%，且各個(gè)時(shí)間點(diǎn)生長(zhǎng)抑制作用均減弱，阻斷前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論 角質(zhì)形成細(xì)胞與體外培養(yǎng)的親人性紅色毛癬菌、親動(dòng)物性犬小孢子菌及親土性石膏樣小孢子菌共孵育時(shí)對(duì)其均有抑制作用；阻斷TLR2后此抑制作用明顯減弱，TLR2在角質(zhì)形成細(xì)胞抑制不同皮膚癬菌生長(zhǎng)的過程中產(chǎn)生重要的影響。 第二部分TLR2在不同皮膚癬菌感染中對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子的影響 目的 觀察紅色毛癬菌、犬小孢子菌及石膏樣小孢子菌與角質(zhì)形成細(xì)胞共孵育后炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-8及TNF-α的表達(dá)變化，以及中和TLR2前后上述因子的變化情況，探討TLR2在皮膚癬菌感染中發(fā)揮的作用。 方法 角質(zhì)形成細(xì)胞與上述三種皮膚癬菌菌懸液分別共孵育，角質(zhì)形成細(xì)胞直接與懸液共孵育為刺激組（即A組），阻斷組（即B組）為先阻斷TLR2后角質(zhì)形成細(xì)胞再與三種皮膚癬菌共孵育，采用酶聯(lián)免疫復(fù)合物法（ELISA）檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞上清中IL-6、IL-8及TNF-α的濃度，比較中和TLR2抗體前后各種細(xì)胞因子的濃度變化情況，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照。 結(jié)果 紅色毛癬菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后刺激組IL-8濃度明顯升高，在各時(shí)間點(diǎn)分別與對(duì)照組、阻斷組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組IL-6及TNF-α濃度8h分泌明顯增加，且隨時(shí)間延長(zhǎng)其濃度不斷升高，24h分別達(dá)（498.133±20.159）pg/ml和（32.133±3.674）pg/ml，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），封閉TLR2阻斷組IL-6及TNF-α濃度下降，刺激組和阻斷組8h、16h和24h差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 犬小孢子菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后IL-8表達(dá)量隨時(shí)間推移逐漸增多，4h濃度即可達(dá)到（542.867±37.846）pg/ml,24h升高到（671.358±26.247）pg/ml，阻斷TLR2后則表達(dá)明顯降低，各時(shí)間點(diǎn)刺激組與對(duì)照組、刺激組與阻斷組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組IL-6、TNF-α在4h及8h時(shí)濃度無顯著變化，16小時(shí)后分泌量明顯增加，且隨時(shí)間推移逐漸增多，阻斷TLR2后各時(shí)間點(diǎn)IL-6、TNF-α表達(dá)降低，其中16h和24h時(shí)刺激組與阻斷組、刺激組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 石膏樣小孢子菌刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后刺激組IL-8濃度在各時(shí)間點(diǎn)均升高，分別與對(duì)照組及阻斷組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組IL-6不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)表達(dá)量不同，4h和8h刺激組與對(duì)照組、刺激組與阻斷組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），而在16h和24h時(shí)刺激組濃度分別可達(dá)到（38.70±8.41）pg/ml、（51.70±10.32）pg/ml，與阻斷組及對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；刺激組TNF-α濃度16h方升高明顯，24h達(dá)（40.61±5.94）pg/ml，與阻斷組及對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論 紅色毛癬菌、犬小孢子菌及石膏樣小孢子菌分別刺激角質(zhì)形成細(xì)胞后，均可使角質(zhì)形成細(xì)胞分泌IL-6、IL-8及TNF-α的量增加，阻斷TLR2各細(xì)胞因子表達(dá)量降低；TLR2在角質(zhì)形成細(xì)胞抗不同膚癬菌感染時(shí)分泌IL-6、IL-8及TNF-α的過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：角質(zhì)形成細(xì)胞 TLR2 紅色毛癬菌 犬小孢子 石膏樣小孢子菌 角質(zhì)形成細(xì)胞 TLR2 紅色毛癬菌 犬小孢子菌 石膏樣小孢子菌 IL-6 IL-8 T NF-α
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R756
【目錄】：

• 中英文對(duì)照表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 角質(zhì)形成細(xì)胞對(duì)不同皮膚癬菌生長(zhǎng)的抑制作用及封閉TLR2對(duì)其的影響15-23
• 材料和方法15-18
• 結(jié)果18-21
• 討論21-22
• 小結(jié)22-23
• 第二部分 TLR2在不同皮膚癬菌感染中對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子的影響23-34
• 材料和方法23-26
• 結(jié)果26-31
• 討論31-33
• 小結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述37-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 熊瑛,陳興平;Toll樣受體在抗系統(tǒng)性真菌感染中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè);2004年04期

2 陳輝;劉維達(dá);呂桂霞;余曉東;沈永年;;HaCaT細(xì)胞對(duì)紅色毛癬菌生長(zhǎng)的抑制作用[J];中華皮膚科雜志;2007年02期

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本文編號(hào)：1066109