本文關鍵詞：IL-17對小鼠黑色素瘤細胞體外VEGF-a表達和血管生成擬態(tài)的影響

  更多相關文章： IL-17 VEGF B16細胞 黑色素瘤 遷移 侵襲 血管生成 血管生成擬態(tài)

【摘要】：目的 在前期研究的基礎上,通過體外實驗探討IL-17對B16細胞血管內皮生長因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)-a表達水平和對B16細胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)的影響,從而闡明IL-17對黑色素瘤血管生成的影響。 方法 體外培養(yǎng)小鼠黑色素瘤B16細胞,用不同濃度重組鼠IL-17處理細胞,設空白對照組。分別采用MTT法和ELISA法檢測不同濃度IL-17對B16細胞增殖能力和VEGF-a表達水平的影響；通過Transwell遷移、侵襲實驗,明膠酶譜法和三維培養(yǎng)實驗觀察不同濃度IL-17對B16細胞遷移、侵襲能力,MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影響；通過Western-blot和免疫熒光染色法檢測B16細胞中IL-17受體(IL-17receptor, IL-17R)的表達情況。 結果 1.MTT法檢測結果顯示,不同濃度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17處理組與對照組相比,B16細胞的增殖能力無明顯變化(P0.05)；ELISA法檢測結果顯示,不同濃度(10、50、100ng/mL)IL-17處理的B16細胞培養(yǎng)上清液中VEGF-a含量比對照組升高(P0.05),呈濃度依賴性。 2.觀察不同濃度IL-17(10、50、100ng/mL)對B16細胞遷移、侵襲能力,MMP-2和MMP-9活性及VM的影響。Transwell遷移實驗結果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細胞穿膜細胞數比對照組明顯增多(P0.05),呈濃度依賴性；Transwell侵襲實驗結果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細胞穿膜細胞數比對照組明顯增多(P0.05),呈濃度依賴性；明膠酶譜法分析結果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細胞MMP-9的活性比對照組增強(P0.05),呈濃度依賴性,lOng/mL IL-17組MMP-2活性無明顯變化(P0.05),50、100ng/mLIL-17組MMP-2活性增強(P0.05)；三維培養(yǎng)結果顯示,不同濃度IL-17處理的B16細胞體外VM形成能力與對照組相比無明顯變化(P0.05)。 3.Western-blot檢測結果顯示B16細胞高表達IL-17R,免疫熒光染色顯示B16細胞中可見IL-17R的陽性表達,IL-17R主要定位表達于胞膜和胞漿。 結論 1.IL-17可以誘導B16細胞分泌VEGF-a。IL-17不直接影響B(tài)16細胞的增殖。 2.能力本研究中IL-17對B16細胞體外血管生成擬態(tài)無影響,但可通過增強MMP-2、MMP-9活性促進B16細胞遷移和侵襲,具有促進B16細胞轉移的潛能。 3.IL-17R表達于B16細胞中,IL-17可能通過IL-17R信號通路發(fā)揮其對B16細胞的上述調節(jié)作用,其具體機制尚待進一步研究。
【關鍵詞】：IL-17 VEGF B16細胞 黑色素瘤 遷移 侵襲 血管生成 血管生成擬態(tài)
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、IL-17對B16細胞增殖和VEGF-a表達的影響16-26
• 1.1 對象和方法16-20
• 1.1.1 細胞系16
• 1.1.2 主要材料與試劑16
• 1.1.3 主要器材與儀器16-17
• 1.1.4 主要溶液的配制17
• 1.1.5 主要實驗方法17-19
• 1.1.6 統(tǒng)計方法19-20
• 1.2 結果20-21
• 1.3 討論21-25
• 1.4 小結25-26
• 二、IL-17對B16細胞遷移、侵襲和VM的影響26-45
• 2.1 對象和方法26-34
• 2.1.1 細胞系26
• 2.1.2 主要材料與試劑26
• 2.1.3 主要器材與儀器26-27
• 2.1.4 主要溶液的配制27-28
• 2.1.5 主要實驗方法28-34
• 2.1.6 統(tǒng)計方法34
• 2.2 結果34-39
• 2.2.1 IL-17對B16細胞遷移能力的影響34-35
• 2.2.2 IL-17對B16細胞侵襲能力的影響35-36
• 2.2.3 IL-17對B16細胞MMP-2、MMP-9活性的影響36-38
• 2.2.4 IL-17對B16細胞體外VM形成能力影響的結果38
• 2.2.5 B16細胞中IL-17R的表達情況38-39
• 2.3 討論39-44
• 2.4 小結44-45
• 結論45-46
• 參考文獻46-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述51-61
• 綜述參考文獻58-61
• 致謝61

【共引文獻】

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本文編號：1065368