本文關鍵詞：沙棘籽蛋白對2型糖尿病模型小鼠體內降血糖與炎癥因子的干預作用

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【摘要】：沙棘(Hippohae rhamnoides L.)是一種天然的藥食同源性植物,屬于胡禿子科(Elaeagnaceae)沙棘屬(Hippophae),沙棘的根、莖、葉、花、果實均含有豐富的營養(yǎng)和生物活性物質。此外,沙棘籽蛋白質含量豐富,是一種很好的植物蛋白資源。沙棘資源廣泛分布于歐亞地區(qū),我國是沙棘資源最豐富的國家,主要分布于西南、西北和華北等地。本文以沙棘籽為原料,采用石油醚脫脂、乙醇去黃酮與原花青素,堿提酸沉的方法制備沙棘籽蛋白,同時研究了沙棘籽蛋白對糖尿病小鼠的降血糖作用、對炎癥因子的干預作用以及對相關基因表達的影響,并對其功效、機制進行了探索,為沙棘籽蛋白產品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。本研究以沙棘籽為原料制備沙棘籽蛋白,蛋白質全自動測定儀測定沙棘籽蛋白含量及其得率。氨基酸全自動分析儀測定沙棘籽蛋白氨基酸成分。利用高脂飲食結合化學試劑誘導得到2型糖尿病小鼠實驗模型,以沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素進行灌胃處理4周,研究其對糖尿病小鼠體重(BW)、空腹血糖(FBG)、血脂、血清胰島素(SIN)的影響以及對糖尿病小鼠胰島素抵抗的改善作用；用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法檢測小鼠血清C反應蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子-a (TNF-α)核因子-κB (NF-κB)、白細胞介素-6(IL-6)水平,檢測小鼠肝臟AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、沉默信息調節(jié)因子1 (Silent information regulator 1, Sirtl)活性；用半定量RT-PCR (sqRT-PCR)的方法研究沙棘籽蛋白對糖尿病小鼠肝臟葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase, G-6-P),糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)、肉堿棕櫚酰基轉移酶-1(carnitine palmitoyl transferase 1-α, CPT1-a)、糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase, GP)基因表達的影響。結果顯示,采用堿提酸沉的方法制備沙棘籽蛋白的含量為70.1%,總提取率為36.5%,氨基酸種類齊全,必需氨基酸組成比例均勻。動物實驗結果顯示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素處理組小鼠空腹血糖、總甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均顯著低于模型組(p0.05),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、胰島素敏感指數(shù)顯著高于模型組(p0.05),血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)(IRI)顯著低于模型組(p0.05)；沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素處理組小鼠血清炎癥因子水平均顯著低于模型組(p0.05),小鼠肝臟AMPK、 Sirtl活性均顯著高于模型組(p0.05)。各組小鼠RT-PCR結果顯示,沙棘籽蛋白、沙棘多糖和沙棘原花青素各劑量組G-6-P, GSK-3β, CPT1-α和GP mRNA表達水平均低于模型組。本研究結果表明,沙棘籽蛋白具有降低2型糖尿病小鼠的體重的功效,具有改善小鼠高血脂和高血糖癥狀的功效。Elisa實驗證明,沙棘籽蛋白能夠改善2型糖尿病小鼠胰島素抵抗及炎癥因子水平,提高AMPK、Sirt1活性的功效.sqRT-PCR結果顯示沙棘籽蛋白能夠抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因的表達。其作用機制可能與增強AMPK、Sirt1活性,抑制G-6-P、GsK-3β、cPT1-α和GP等基因表達有關。說明沙棘籽蛋白能夠有效預防和控制2型糖尿病的發(fā)生。
【關鍵詞】：糖尿病 沙棘 降血糖 抗炎
【學位授予單位】：合肥工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS201.21;R587.1
【目錄】：

• 致謝7-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-17
• 第一章 緒論17-24
• 1.1 糖尿病研究進展、現(xiàn)狀、成果17-18
• 1.2 沙棘簡介18-21
• 1.2.1 沙棘籽蛋白簡介及研究進展19-20
• 1.2.2 沙棘多糖簡介及研究進展20
• 1.2.3 沙棘原花青素簡介及研究進展20-21
• 1.3 糖尿病與炎癥反應的關系21
• 1.4 糖尿病與相關酶活性的關系21-22
• 1.5 本課題研究的目的及意義22-24
• 第二章 沙棘籽蛋白的制備、含量測定及成分分析24-32
• 2.1 材料與儀器24-25
• 2.1.1 實驗材料24
• 2.1.2 主要試劑24
• 2.1.3 主要儀器24-25
• 2.2 實驗方法25-28
• 2.2.1 沙棘籽蛋白質制備25
• 2.2.2 沙棘籽蛋白含量測定25-26
• 2.2.3 沙棘籽蛋白氨基酸測定方法26-27
• 2.2.4 沙棘籽蛋白黃酮含量測定27
• 2.2.5 沙棘籽蛋白原花青素含量測定27-28
• 2.2.6 結果處理28
• 2.3 結果與分析28-30
• 2.3.1 沙棘籽蛋白含量及成品中蛋白質量分數(shù)計算與分析28
• 2.3.2 沙棘籽蛋白氨基酸測定結果28-29
• 2.3.3 沙棘籽蛋白原花青素含量測定29-30
• 2.3.4 沙棘籽蛋白原花青素含量測定30
• 2.4 本章小結30-32
• 第三章 沙棘籽蛋白對2型糖尿病小鼠胰島素抵抗及血脂的影響32-46
• 3.1 材料與儀器32-33
• 3.1.1 實驗動物與材料32
• 3.1.2 主要試劑32
• 3.1.3 主要儀器32-33
• 3.1.4 實驗器具33
• 3.2 實驗方法33-39
• 3.2.1 2型糖尿病模型的建立33
• 3.2.2 成模小鼠分組及灌胃處理方案33-34
• 3.2.3 小鼠體重和空腹血糖測定34
• 3.2.4 小鼠血清和臟器采集34-35
• 3.2.5 胰島素抵抗相關指標測定35
• 3.2.6 小鼠血脂測定35-39
• 3.2.7 數(shù)據(jù)處理39
• 3.3 實驗結果與分析39-44
• 3.3.1 SSP對糖尿病小鼠體重的影響39-40
• 3.3.2 SSP、SPR、SPO對糖尿病小鼠血糖的影響40-41
• 3.3.3 處理后實驗小鼠胰島素抵抗指標41-42
• 3.3.4 SSP、SPR、SPO對糖尿病小鼠臟器指數(shù)的影響42-43
• 3.3.5 SSP、SPR和SPO對糖尿病小鼠血脂水平影響43-44
• 3.4 本章小結44-46
• 第四章 沙棘籽蛋白對2型糖尿病模型小鼠炎癥因子的干預作用及相關基因表達的影響46-59
• 4.1 材料與儀器46-47
• 4.1.1 材料46
• 4.1.2 主要儀器46
• 4.1.3 主要試劑46-47
• 4.2 實驗方法47-50
• 4.2.1 小鼠血清C反應蛋白含量測定47
• 4.2.2 小鼠血清IL-6含量測定47
• 4.2.3 小鼠血清TNF-α含量測定47-48
• 4.2.4 小鼠血清NF-κB含量測定48
• 4.2.5 小鼠肝臟組織AMPK活性測定48
• 4.2.6 小鼠肝臟組織SIRT1活性測定48-49
• 4.2.7 基因引物序列設計49
• 4.2.8 肝臟組織總RNA提取49
• 4.2.9 cDNA合成49-50
• 4.2.10 RT-PCR50
• 4.2.11 瓊脂糖凝膠電泳50
• 4.2.12 數(shù)據(jù)處理50
• 4.3 結果與分析50-57
• 4.3.1 SSP對糖尿病小鼠血清CRP因子水平的影響50-51
• 4.3.2 SSP對糖尿病小鼠血清IL-6因子水平的影響51-52
• 4.3.3 SSP對糖尿病小鼠血清TNF-α因子水平的影響52-53
• 4.3.4 SSP對糖尿病小鼠血清NF-κB因子水平的影響53-54
• 4.3.5 SSP對糖尿病小鼠肝臟組織AMPK水平的影響54-55
• 4.3.6 SSP對糖尿病小鼠肝臟組織SIRT1水平的影響55-56
• 4.3.7 SSP對糖尿病小鼠肝臟相關基因表達的影響56-57
• 4.4 本章小結57-59
• 第五章 結論與展望59-60
• 5.1 結論59
• 5.1.1 沙棘籽蛋白的制備方法59
• 5.1.2 SSP降血糖、降血脂及對血清炎癥因子的影響59
• 5.1.3 SSP對糖尿病小鼠肝臟相關蛋白活性及基因表達的影響59
• 5.2 展望59-60
• 參考文獻60-67
• 攻讀碩士學位期間的學術活動及成果情況67

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本文編號：949224