本文關(guān)鍵詞：GLP-1受體激動劑Exendin-4對min6細胞GSIS的保護作用及MAPK信號通路的作用

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【摘要】：目的了解干擾素1β對min6系在高糖下胰島素合成(GSIS)得影響,Exendin-4影響下min6細胞胰島素分泌變化,及促分裂素原活化蛋白激酶MAPK(ERK1/2,p38,JNK)信號通路磷酸化程度的改變。方法(1) MIN6細胞分別在不同濃度葡萄糖(0、5.5、11.1、22.2mmol/1)的K RBH緩沖液中孵育1h,收集培養(yǎng)的上清液,用酶免法測定其胰島素濃度,提取細胞總蛋白,用蛋白質(zhì)免疫印跡法測定MAPK(ERK1/2,P38,JNK)信號通路磷酸化水平。(2)MIN6 細胞分別在不同濃度的IL-1β(0、0.25、2.5ng/ml)培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時,在高糖KRBH培養(yǎng)一個小時,收集細胞培養(yǎng)后的上清液,酶免法測定胰島素濃度,在高糖KRBH下培育5min,收集細胞總蛋白,蛋白質(zhì)免疫印跡法測定ERK1/2、P38、JNK的磷酸化水平。(3)MIN6細胞0.25ng/ml的IL-1β培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h同時加入不同濃度的的胰高糖素樣肽-1的受體激動劑Exendin-4(50、500pmol/ml),在高糖的KRBH培養(yǎng)一小時,收集培養(yǎng)上清液,酶免法測定胰島素濃度,收集細胞總蛋白蛋白質(zhì)免疫印跡法測定磷酸化的促分裂素原活化蛋白激酶(ERK1/2,P38,JNK)的磷酸化水平。結(jié)果(1)IL-1 β抑制了min6細胞胰島素的分泌,下調(diào)了ERK1/2磷酸化水平,提高了JNK和p38磷酸化水平。(2)Exendin-4對IL-1β?lián)p傷min6細胞胰島素分泌作用中起了保護作用,提高了ERK1/2的磷酸化活化程度,降低了p38的磷酸化活化程度。結(jié)論Exendin-4對胰島素分泌有保護作用,機制與MAPK信號通路相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：促分裂素原活化蛋白激酶 MIN6細胞 GSIS 糖尿病
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 縮略詞8-11
• 第一章 緒論11-19
• 1.1 糖尿病的概述11-12
• 1.2 糖尿病的致病機理與治療12
• 1.3 MAPK信號通路與糖尿病的關(guān)系12-16
• 1.3.1 ERK1/2信號通路13-14
• 1.3.2 P38信號通路14-15
• 1.3.3 JNK信號通路15-16
• 1.4 炎性細胞因子和糖尿病發(fā)病機制的關(guān)系16-17
• 1.5 GLP-1對胰島β細胞的保護機制17-19
• 第二章 正文19-53
• 2.1 材料與方法19-25
• 2.1.1 細胞來源19
• 2.1.2 主要的試劑19-21
• 2.1.3 主要的儀器21-23
• 2.1.4 主要試劑配制23-24
• 2.1.5 研究方案24-25
• 2.2 研究方法25-42
• 2.2.1 min6細胞的培養(yǎng)25-27
• 2.2.2 Min6細胞的胰島素分泌反應(GSIS)27-29
• 2.2.3 酶免分析藥盒測定胰島素濃度29
• 2.2.4 min6細胞MAPK信號通路的變化29-31
• 2.2.5 Western Blotting蛋白質(zhì)免疫印跡分析31-34
• 2.2.6 min6細胞胰島素基因表達34-36
• 2.2.7 min6細胞RNA總提取36-38
• 2.2.8 RNA的質(zhì)量檢測38
• 2.2.9 cDNA的合成38-39
• 2.2.10 引物設(shè)計39-40
• 2.2.11 熒光定量40-42
• 2.3 實驗結(jié)果與分析42-53
• 2.3.1 min6細胞形態(tài)學分析42-44
• 2.3.2 不同糖濃度刺激下min6細胞的GSIS44-45
• 2.3.3 IL-1β對min6細胞GSIS的損傷45-46
• 2.3.4 exendin-4對min6細胞GSIS保護作用46-47
• 2.3.5 不同糖濃度刺激對min6細胞MAPK信號通路影響47-48
• 2.3.6 IL-1β對min6細胞MAPK信號通路影響48-50
• 2.3.7 exendin-4對min6細胞MAPK信號通路影響50-51
• 2.3.8 胰島素基因的表達51-53
• 第三章 結(jié)論和討論53-59
• 3.1 討論53-57
• 3.1.1 不同糖濃度刺激結(jié)果分析討論53-54
• 3.1.2 IL-β刺激min6細胞結(jié)果討論54-55
• 3.1.3 Exendin-4對min6細胞的影響55-56
• 3.1.4 不同葡萄糖對min6細胞胰島素基因表達影響結(jié)果分析56-57
• 3.1.5 展望與未來57
• 3.2 結(jié)論57-59
• 致謝59-60
• 參考文獻60-71
• 附錄71

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