本文關鍵詞：MiRNA-138對氣道上皮細胞上皮—間質轉分化影響的研究

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【摘要】：研究背景氣道重塑重要標志為氣道上皮細胞脫落,細胞外基質沉積,成纖維細胞和肌成纖維細胞增殖,引起基底膜增厚和上皮下纖維化。氣道上皮細胞上皮-間質轉分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)改變被認為參與了這一過程。目前認為氣道上皮異常損傷修復參與了哮喘氣道重塑,氣道上皮細胞發(fā)生EMT可能參與了氣道重塑。EMT是上皮細胞轉分化為間質細胞的過程。許多研究發(fā)現,哮喘患者及小鼠肺泡灌洗液及氣道壁內TGF-β1增高,因此TGF-β1與哮喘氣道重塑密切相關[1,2],而且TGF-β1是誘導EMT的重要細胞因子。MiRNA通過其種子序列與靶mRNA 3’-UTR端非翻譯區(qū)特異性結合而抑制其靶基因的翻譯。研究表明上調miRNA-138可以抑制非小細胞肺癌細胞如A549細胞株發(fā)生EMT[3,4]。MiRNA-138抑制肺上皮來源的腫瘤細胞發(fā)生EMT,是否也在氣道上皮細胞產生EMT過程中異常表達,上調miRNA-138能否也抑制氣道上皮細胞發(fā)生EMT,從而抑制氣道重塑?因此,本實驗旨在探討TGF-β1是否能誘導小鼠氣道上皮細胞發(fā)生EMT及miRNA-138能否阻止TGF-β1誘導的氣道上皮細胞發(fā)生EMT,從而為研究哮喘氣道重塑機制提供依據。研究目的驗證TGF-β1是否可以誘導小鼠氣道上皮細胞株TC-1發(fā)生EMT;驗證miRNA-138是否在TC-1細胞株發(fā)生EMT時異常表達;驗證miRNA-138過表達能否抑制TGF-β1誘導的EMT;研究方法1、予TGF-β1刺激小鼠氣道上皮細胞株TC-1細胞,Western Blot檢測TGF-β1誘導TC-1細胞株的EMT相關上皮細胞標志蛋白和間質細胞標志蛋白的表達情況,RT-qPCR檢測miRNA-138的表達情況。2、予攜帶cy3熒光片段的miRNA-138 mimic轉染TC-1細胞株,熒光顯微鏡觀察轉染效率,RT-qPCR檢測miRNA-138的表達。同時給予TGF-β1刺激轉染miRNA-138的TC-1細胞,Western Blot檢測EMT相關上皮細胞標志蛋白和間質細胞標志蛋白變化情況。研究結果1、予20ng/ml的TGF-β1刺激TC-1細胞后,相比于正常對照組,上皮細胞表型蛋白E-cadherin表達減弱,間質細胞表型蛋白vimentin、α-SMA、collagen-Ⅰ表達增強;提示TGF-β1可以誘導上皮細胞發(fā)生EMT。2、予10ng/ml的TGF-β1刺激TC-1細胞24h后,miRNA-138表達較正常對照組減弱;提示miRNA-138在氣道上皮細胞發(fā)生EMT過程中表達受到抑制。3、TC-1轉染miRNA-138 mimic后miRNA-138表達上調。給予TGF-β1刺激并轉染miRNA-138組上皮細胞表型蛋白E-cadherin和間質細胞表型蛋白vimentin、α-SMA、collagen-Ⅰ與未給予TGF-β1刺激的正常對照組表達無顯著差異。結論1、在TGF-β1的刺激下,氣道上皮細胞可以通過EMT轉變?yōu)槌砷g質細胞,如成纖維細胞和(或)肌成纖維細胞,且伴隨miRNA-138表達下調。2、MiRNA-138過表達可以抑制TGF-β1誘導的氣道上皮細胞發(fā)生EMT,為哮喘氣道重塑機制和防治研究提供思路。
【關鍵詞】：上皮間質轉分化(EMT) miRNA 哮喘 氣道重塑
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 英文縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 TGF-β1誘導小鼠氣道上皮細胞株TC-1發(fā)生上皮-間質細胞轉分化13-23
• 2.1 實驗材料、方法13-20
• 2.2 結果20-22
• 2.3 討論22
• 2.4 小結22-23
• 第三章 MiRNA-138過表達以抑制TGF-β1誘導的EMT23-38
• 3.1 實驗材料、方法23-33
• 3.2 結果33-37
• 3.3 討論37
• 3.4 小結37-38
• 全文結論38-39
• 參考文獻39-45
• 參考綜述 上皮-間質細胞轉分化與氣道重塑相關研究進展45-58
• 參考文獻51-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章58-59
• 致謝59

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 王春梅;李慶章;;microRNA在小鼠乳腺不同發(fā)育時期差異表達譜及作用(英文)[J];遺傳學報;2007年11期

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本文編號：790913