本文關(guān)鍵詞：TNFAIP3在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者B細(xì)胞的作用初步研究

  更多相關(guān)文章： 紅斑狼瘡/系統(tǒng)性 B淋巴細(xì)胞 TNFAIP3 過表達(dá)

【摘要】：[研究背景]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus, SLE)是可引起多系統(tǒng)、多器官損傷炎癥的自身免疫性疾病,以T、B細(xì)胞免疫功能異常,產(chǎn)生多種自身抗體(如抗核抗體、抗dsDNA抗體、抗磷脂抗體)、發(fā)生引起漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、血管炎腎小球腎炎等炎癥損傷的自身免疫復(fù)合物為特點(diǎn)。病變涉及皮膚、黏膜、心臟、腎臟、肝臟和血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等多個(gè)組織和器官。迄今為止,未有任何研究明確SLE的發(fā)病機(jī)制及病因,但經(jīng)過多項(xiàng)研究證明SLE目前與環(huán)境(如強(qiáng)烈陽光)、激素、病毒感染、免疫、遺傳、藥物等多種因素有關(guān)。而綜合各科研表明,SLE是一種呈非孟德爾遺傳方式為主的多基因病,遺傳因素在SLE誘導(dǎo)因素中占主要地位。近幾年,多項(xiàng)候選基因研究及全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association study, GWAS)已證實(shí),在中國漢族SLE患者中,TNFAIP3為其易感基因之一。7NFAIP3可抑制Toll樣受體(TLR)和腫瘤壞死因子(TNF)受體誘導(dǎo)的核因子kappa-B (NF-κB)活性以及TNF介導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡(PCD),最終抑制NF-κ-B的強(qiáng)度,終止NF-κB介導(dǎo)的促炎癥反應(yīng),進(jìn)而抑制B細(xì)胞的缺陷凋亡以及活化過度,可能在SLE等自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用。[目 的]1.構(gòu)建出含TNFAIP3基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體,并能在哺乳類動(dòng)物中良好地高效表達(dá)。2、分別過表達(dá)SLE患者及正常對照者外周血B細(xì)胞TNFAIP3基因,檢測過表達(dá)該基因?qū)細(xì)胞生長、存活及對其它基因TLR7、TLR9、BAFF-R表達(dá)的影響。通過本課題實(shí)驗(yàn)研究探討TNFAIP3基因在SLE患者B細(xì)胞TLR7、TLR、BAFF-R潛在的關(guān)聯(lián),以及TNFAIP3對SLE疾病潛在的作用機(jī)制及其臨床意義,為深度研究TNFAIP3基因在SLE的發(fā)病機(jī)制、病情加重因素中起到的生物學(xué)功能及免疫調(diào)節(jié)作用打下良好的基礎(chǔ),同時(shí)也能夠?yàn)镾LE病情活動(dòng)提供新的診斷思路,也為SLE的治療提供更好的途徑。[方法]1.構(gòu)建含TNFAIP3基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體TNFAIP3-pBABEpuro。2.收集SLE患者30例及健康對照30例,采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法并使用人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離SLE患者及健康人外周血淋巴細(xì)胞,運(yùn)用免疫磁珠分選方法分選CD19+ B淋巴細(xì)胞,待用。3、選用293T細(xì)胞來對TNFAIP3-pBABEpuro、pBABE進(jìn)行慢病毒包裝質(zhì)粒,待培養(yǎng)48h后收集病毒上清液,并將其加入至盛有預(yù)先分選出的SLE患者及健康人的B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)板中,24h換液一次,待感染48h后收集細(xì)胞,從收集的B細(xì)胞中提取RNA,然后將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA；最后使用Real-time PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測過表達(dá)TNFAIP3的SLE病人以及健康人B淋巴細(xì)胞中TNFAIP3其mRNA表達(dá)水平,B細(xì)胞中TLR7、TLR9、BAFF-R mRNA的表達(dá)情況；最后采用MTT法實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)TNFAIP3基因后B淋巴細(xì)胞存活的影響。[結(jié)果]1.成功構(gòu)建了含TNFAIP3基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體,并證實(shí)了其能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中較高表達(dá)。2、分別過表達(dá)SLE患者及正常對照者B細(xì)胞TNFAIP3基因,均得出過表達(dá)質(zhì)粒感染組(TNFAIP3-pBABE)較其對照組(pBABE), TNFAIP3 mRNA的表達(dá)明顯增高,且具有顯著性的差異(P0.01)。不管是過表達(dá)SLE患者,還是正常對照B細(xì)胞中TNFAIP3基因,均可使該基因在mRNA水平明顯上調(diào),且在SLE患者B細(xì)胞該基因上調(diào)更高。3、正常對照及SLE患者,過表達(dá)質(zhì)粒感染組(TNFAIP3-pBABE)均較其對照組(pBABE),TLR7 mRNA的表達(dá)明顯降低,且具有顯著性的差異(P0.01)。且SLE患者TLR7表達(dá)下調(diào)的程度較正常對照更明顯。4、正常對照及SLE患者,過表達(dá)質(zhì)粒感染組(TNFAIP3-pBABE)均較其對照組(pBABE), TLR9 mRNA的表達(dá)明顯升高,差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與正常對照相比,過表達(dá)SLE患者B細(xì)胞TNFAIP3基因,其T LR9 mRNA表達(dá)上調(diào)更明顯。5、外源性過表達(dá)外周血B細(xì)胞TNFAIP3基因,可使B細(xì)胞中TNFAIP3基因的表達(dá)上調(diào),同時(shí)該基因的表達(dá)也影響了B細(xì)胞中BAFF-R mRNA表達(dá),使其著顯上調(diào)。6、過表達(dá)SLE患者及正常對照B細(xì)胞中TNFAIP3基因后,對B細(xì)胞的生長存活影響無明顯影響。[結(jié)論]1. TNFAIP3異常表達(dá)提示該基因在SLE免疫發(fā)病機(jī)制中起著重要的調(diào)節(jié)作用。2TNFAIP3可能通過調(diào)節(jié)受體后信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)影響TLR介導(dǎo)的信號(hào)途徑、影響TLR、BAFF-R的表達(dá)。3.TNFAIP3基因不影響B(tài)細(xì)胞的生長、存活。[研究意義]該研究探討TNFAIP3基因?qū)LE的發(fā)生、發(fā)展的影響,對SLE發(fā)病機(jī)制具有重要的研究指導(dǎo)意義,為SLE發(fā)病機(jī)制提供了理論依據(jù)。在應(yīng)用上,為SLE的治療提供新的靶點(diǎn),進(jìn)一步闡明了對SLE的在基因?qū)用嫘兄委煹目赡苄?br/> 【關(guān)鍵詞】：紅斑狼瘡/系統(tǒng)性 B淋巴細(xì)胞 TNFAIP3 過表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.241
【目錄】：

• 英文縮寫詞5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-20
• 1. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡概述13-16
• 2. TNFAWB基因概述16-17
• 3. NF-kB概述17-20
• 第一章 TNFAIP3-pBABEpuro逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定20-36
• 1.1 主要技術(shù)路線20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法21-32
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-35
• 1.5 小結(jié)35-36
• 第二章 過表達(dá)TNFAIP3對SLE患者外周血B細(xì)胞的影響36-52
• 2.1 主要技術(shù)路線36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法38-43
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-50
• 2.5 小結(jié)50-52
• 討論52-59
• 結(jié)論59-60
• 實(shí)驗(yàn)不足之處60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 綜述68-76
• 參考文獻(xiàn)73-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章及科研項(xiàng)目情況76-77
• 致謝77-78

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1 林東方;張文;趙巖;;B細(xì)胞在原發(fā)性干燥綜合征中的作用[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2009年03期

2 葉向軍;彭來君;施麗華;;不典型B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病1例[J];臨床血液學(xué)雜志;2010年05期

3 劉克洲;;傳染性單核細(xì)胞增多癥周圍血中的T和B細(xì)胞[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊);1975年01期

4 金天如;;傳染性單核細(xì)胞增多癥患者的B細(xì)胞減少癥[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1982年06期

5 張鐘儒;;用抗胸腺細(xì)胞球蛋白治療B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病骨髓再生不良[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1992年04期

6 姚仁南;腫瘤壞死因子和淋巴細(xì)胞毒素對絲裂原激活的B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的不均一增殖作用[J];國外醫(yī)學(xué)(輸血及血液學(xué)分冊);1994年01期

7 編輯部;;免疫療法有望治愈復(fù)發(fā)性B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病[J];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志;2013年02期

8 于力;汪月增;;非何杰金氏淋巴瘤患者病變組織和外周血克隆性B細(xì)胞測定的臨床意義[J];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);1991年01期

9 勇威本;;B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞淋巴瘤治療現(xiàn)狀[J];世界臨床藥物;2008年08期

10 楊文武;重組α_2-干擾素治療早期B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);1989年08期

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1 吳銘;孫雄飛;徐肇明;張新友;陳曉琳;林海清;文鴻光;孫璇;宋通微;李富榮;王興根;;基于細(xì)胞表型異常的流式細(xì)胞術(shù)檢測急性前體B細(xì)胞白血病微小殘留病[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 趙陽;張風(fēng)肖;;可溶性B細(xì)胞激活因子在原發(fā)性干燥綜合征的表達(dá)及其在致病中作用的研究[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

3 徐衛(wèi);易樹華;李建勇;邱錄貴;;中國B細(xì)胞慢性淋巴增殖性疾病診斷專家共識(shí)(2013版)[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

4 黃前榮;高曉明;;鈣網(wǎng)蛋白活化B細(xì)胞的分子機(jī)制研究[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

5 雷中勁;張軍紅;;B細(xì)胞激活因子在ITP患兒中表達(dá)的變化與意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊）[C];2012年

6 石群立;安曉靜;張正祥;馬捷;汪春年;;T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤異常表達(dá)B細(xì)胞相關(guān)抗體-CD79a[A];第十一屆中國抗癌協(xié)會(huì)全國淋巴瘤學(xué)術(shù)大會(huì)教育論文集[C];2009年

7 郭穎P，

本文編號(hào)：748255