本文關(guān)鍵詞：阿魏酸促進(jìn)糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面血管化及其作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿魏酸 慢性難愈性創(chuàng)面 糖尿病大鼠 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 ERK1/2信號(hào)通路

【摘要】：目的在體內(nèi)試驗(yàn)中,研究阿魏酸(ferulic acid,FA)對(duì)2型糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中,分別在常氧和缺氧狀態(tài)下,探討不同濃度阿魏酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管生成相關(guān)功能的影響;研究阿魏酸對(duì)HUVEC細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板衍化生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)及缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表達(dá)的影響;研究阿魏酸調(diào)節(jié)HUVEC細(xì)胞VEGF及PDGF基因的表達(dá)與細(xì)胞外調(diào)蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)信號(hào)通路的關(guān)系。方法我們以凡士林為基質(zhì),制作了阿魏酸軟膏。為了研究阿魏酸的軟膏制劑在水中的釋放度,分別將2%、5%及10%的阿魏酸軟膏各150mg分別置入50ml純水中,在不同時(shí)間點(diǎn)取樣,用比色法測(cè)量吸光度值,計(jì)算阿魏酸在水中釋放度。以高糖高脂鼠料喂養(yǎng)SD大鼠4周后,再以45mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素,監(jiān)測(cè)空腹血糖值,建立2型糖尿病大鼠模型。建立糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型,分別設(shè)置糖尿病對(duì)照組(diabetic control group,DC)、凡士林對(duì)照組(vaseline control group,VC)、生理鹽水對(duì)照組(normal saline control group,NSC)、10%阿魏酸外用組(10%ferulic acid ointment treatment group,10%FA)和40mg/kg阿魏酸灌胃組(40mg/kg ferulic acid irrigation treatment group,40mg FA),觀察不同處理對(duì)各組創(chuàng)面愈合率及愈合時(shí)間的影響,CD34免疫組織化學(xué)染色觀察阿魏酸對(duì)慢性創(chuàng)面血管生成的影響。原代培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞,分別在常氧和缺氧條件下實(shí)驗(yàn)。以不同濃度的阿魏酸(1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4及1×10-3 mol/L)處理后,分別采用MTS法、劃痕法、Matrigel法分析不同濃度阿魏酸處理對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖、遷移和管腔樣結(jié)構(gòu)形成的影響;以1×10-5mol/L阿魏酸處理HUVEC細(xì)胞后,在0h、3h、6h、24h時(shí)提取蛋白,采用western blot分析對(duì)血管生成密切相關(guān)的因子VEGF、PDGF及HIF-1α表達(dá)的影響;以ERK1/2信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059預(yù)處理HUVEC細(xì)胞,阻斷ERK1/2信號(hào)通路后,再采用1×10-5mol/L阿魏酸處理6h,western blot分析VEGF及PDGF蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果分析阿魏酸軟膏在水中的釋放度,12h時(shí)2%、5%及10%的阿魏酸軟膏的釋放度分別達(dá)到8.6%、11.2%和16.2%;在24h時(shí)分別達(dá)到10.4%、13.2%和21.8%。阿魏酸軟膏在水中的釋放良好,可以用于慢性創(chuàng)面的治療。SD大鼠以高糖高脂鼠料喂養(yǎng)4周后,采用小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射,監(jiān)測(cè)血糖值,維持在16.7mmol/L以上至少4周,成功建立了2型糖尿病大鼠模型。慢性創(chuàng)面造模后,第16天,10%FA組創(chuàng)面愈合率為94.0±5.7%,高于VC組的87.2±6.4%;40mg FA組的創(chuàng)面愈合率為91.3±6.5%,亦明顯高于NSC組的82.2±6.9%。10%FA組愈合時(shí)間為20.29±1.67天,與VC組(22.86±2.23天)相比,明顯縮短了愈合時(shí)間;40mg FA組的愈合時(shí)間為20.57±1.84天,與NSC組(23.29±1.98天)相比,明顯加快了創(chuàng)面的愈合速度。處理后11天,創(chuàng)面組織取材,并采用CD34免疫組化染色,統(tǒng)計(jì)各組創(chuàng)面的微血管密度(Micro-vessel Density,MVD),阿魏酸處理組與對(duì)照組相比,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多,管腔數(shù)目較多,結(jié)構(gòu)也較完整,p0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分別在常氧和缺氧條件下以不同濃度的阿魏酸處理HUVEC細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)阿魏酸能不同程度的促進(jìn)HUVEC細(xì)胞的增殖,在常氧狀態(tài)下以1×10-4 mol/L的阿魏酸處理效果最好,而在缺氧條件下,阿魏酸濃度為1×10-5 mol/L時(shí),細(xì)胞增殖最活躍,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,當(dāng)阿魏酸濃度為1×10-8~1×10-5mol/L時(shí),阿魏酸可呈濃度依賴性地促進(jìn)HUVEC細(xì)胞遷移和管腔樣結(jié)構(gòu)的形成,以1×10-5 mol/L阿魏酸處理的作用最好,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,以1×10-5 mol/L的阿魏酸處理HUVEC細(xì)胞,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PDGF、VEGF及HIF-1α蛋白的表達(dá)上調(diào),在6h時(shí)蛋白的表達(dá)達(dá)到最大值,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在常氧和缺氧狀態(tài)下,用ERK1/2信號(hào)通路特異性抑制劑PD98059預(yù)處理HUVEC細(xì)胞30min后,再用1×10-5mol/L阿魏酸處理6h。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),阻斷了ERK1/2信號(hào)通路后,抑制了阿魏酸依賴的VEGF及PDGF蛋白表達(dá)的上調(diào),甚至還有所降低,與對(duì)照組相比,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論在水中,阿魏酸能從以凡士林為基質(zhì)的軟膏中溶出;阿魏酸能加速糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面的愈合,并能提高創(chuàng)面組織中的微血管密度;在常氧和缺氧條件下,阿魏酸能促進(jìn)HUVEC細(xì)胞增殖、遷移和管腔樣結(jié)構(gòu)的形成;在常氧和缺氧條件下,阿魏酸能上調(diào)VEGF、PDGF及HIF-1α蛋白的表達(dá),并且其調(diào)節(jié)VEGF及PDGF蛋白的表達(dá)與ERK1/2信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：阿魏酸 慢性難愈性創(chuàng)面 糖尿病大鼠 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 ERK1/2信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-25
• 1 研究背景及意義14-15
• 2 慢性創(chuàng)面的血管化機(jī)制15-18
• 3 慢性創(chuàng)面的治療方法18-23
• 4 阿魏酸與慢性創(chuàng)面愈合23-25
• 實(shí)驗(yàn)一 阿魏酸對(duì)糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面愈合的影響25-42
• 1 材料25-26
• 2 方法26-32
• 3 結(jié)果32-39
• 4 討論39-42
• 實(shí)驗(yàn)二 阿魏酸對(duì)HUVEC細(xì)胞血管生成的影響及其分子機(jī)制研究42-55
• 1 材料42-44
• 2 方法44-48
• 3 結(jié)果48-53
• 4 討論53-55
• 小結(jié)55-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果65-66
• 致謝66

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李玉梅,張翠英,徐小遲,任聯(lián),張靈芝,郭妍;多孔敷料負(fù)壓封閉治療創(chuàng)面的觀察和護(hù)理[J];實(shí)用護(hù)理雜志;2000年12期

2 肖龍明,譚江海;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在瘢痕防治及創(chuàng)面處理中的療效觀察(附40例報(bào)告)[J];廣西醫(yī)學(xué);2000年03期

3 季建峰,陸菊花,趙賢忠;豬皮在燒傷早期Ⅱ度創(chuàng)面中的應(yīng)用體會(huì)[J];交通醫(yī)學(xué);2000年04期

4 許龍順,陳紹宗,李學(xué)擁;負(fù)壓封閉治療慢性創(chuàng)面的初步報(bào)告[J];現(xiàn)代康復(fù);2001年14期

5 陳鴻昌,趙廣賀,張宏,楊曉東;成批燒傷患者的早期創(chuàng)面處理[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2002年02期

6 賴西南,王正國(guó),朱佩芳,楊志煥;第12屆歐洲創(chuàng)面處理協(xié)會(huì)年會(huì)論文綜述[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年06期

7 張志學(xué),張志哲,郭萌軍,王黎,張沛;中藥燒傷粉創(chuàng)面外用治療燒傷1000例療效觀察[J];中國(guó)中藥雜志;2004年05期

8 付小兵;進(jìn)一步重視體表慢性難愈合創(chuàng)面發(fā)生機(jī)制與防治研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2004年08期

9 常柏;李巧芬;張庚揚(yáng);;糖尿病足的創(chuàng)面處理[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2006年02期

10 賈赤宇;;燒傷早期創(chuàng)面處理[J];繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2006年14期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳玉林;;創(chuàng)面處理幾個(gè)問(wèn)題的商榷[A];急慢性創(chuàng)面治療新技術(shù)專題系列研討會(huì)之感染創(chuàng)面綜合治療論壇論文匯編[C];2011年

2 劉靜;王曉東;李燕歡;許巧琴;魏偉;周燕輝;;不同創(chuàng)面處理方法對(duì)壓瘡創(chuàng)面療效的對(duì)比研究[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

3 陳欣;;震災(zāi)傷員開(kāi)放創(chuàng)面處理的體會(huì)[A];急、慢性創(chuàng)面治療新技術(shù)專題系列研討會(huì)之災(zāi)難性成批傷早期救治與創(chuàng)面修復(fù)論壇論文匯編[C];2010年

4 薛寶升;;慢性創(chuàng)面的治療總結(jié)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

5 陳鴻昌;趙廣賀;張宏;楊曉東;;成批燒傷患者的早期創(chuàng)面處理[A];全國(guó)燒傷早期處理專題研討會(huì)論文集[C];2002年

6 黃道強(qiáng);史浩銳;謝家水;;燒傷及創(chuàng)面處理38例電擊傷骨外露創(chuàng)面處理體會(huì)[A];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)會(huì)修復(fù)重建外科專業(yè)委員會(huì)第十四次全國(guó)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

7 付小兵;;進(jìn)一步重視燒傷、創(chuàng)傷創(chuàng)面處理中幾個(gè)重要環(huán)節(jié)的研究[A];第五屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

8 梁黎明;柴家科;楊紅明;賈曉明;郝岱峰;宋慧鋒;李峰;申傳安;蔡笑;白樺;;燒傷患者糖尿病足的診斷及創(chuàng)面處理[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

9 賈赤宇;;創(chuàng)面愈合基礎(chǔ)研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)整形外科學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)議、中國(guó)人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)、中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會(huì)全國(guó)會(huì)議論文集[C];2011年

10 劉旭盛;黃躍生;王甲漢;楊宗城;;改進(jìn)創(chuàng)面處理方法提高燒傷治愈率[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 江蘇省金壇市中醫(yī)院 戴揚(yáng);功能性敷料——美寶創(chuàng)面速愈貼的臨床應(yīng)用[N];健康報(bào);2007年

2 湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院(湖南省人民醫(yī)院)整形激光美容科 譚軍 李高峰;激光創(chuàng)面的原位再生修復(fù)(之一)[N];健康報(bào);2009年

3 遼寧省鐵嶺市中醫(yī)醫(yī)院 劉強(qiáng);濕潤(rùn)燒傷膏 在創(chuàng)面換藥技術(shù)中應(yīng)注意的問(wèn)題[N];健康報(bào);2009年

4 江蘇省金壇市中醫(yī)院燒傷、皮膚科 戴揚(yáng);美寶創(chuàng)面速愈貼治療創(chuàng)瘍臨床體會(huì)[N];健康報(bào);2007年

5 何仁亮邋劉英祥;美寶創(chuàng)面速愈貼治療皮膚潰瘍臨床體會(huì)[N];健康報(bào);2008年

6 湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院(湖南省人民醫(yī)院)整形激光美容科 譚軍 李高峰;激光創(chuàng)面的原位再生修復(fù)(之二)[N];健康報(bào);2009年

7 洪東;規(guī)范應(yīng)用MEBT/MEBO是治療燒傷的關(guān)鍵[N];健康報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 李穎;慢性創(chuàng)面為何難愈合？[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

9 肖摩;燒傷皮膚原位再生醫(yī)療技術(shù)[N];健康報(bào);2006年

10 廣西壯族自治區(qū)桂林市中醫(yī)醫(yī)院 陽(yáng)旭升;治療蛇咬傷創(chuàng)面的臨床觀察[N];健康報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 羅小波;負(fù)壓創(chuàng)面療法在深層結(jié)核創(chuàng)面中的相關(guān)作用研究及應(yīng)用[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

2 許龍順;創(chuàng)面封閉負(fù)壓引流技術(shù)促進(jìn)創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

3 白明;創(chuàng)面負(fù)壓治療對(duì)人慢性創(chuàng)面中血紅素氧合酶-1表達(dá)的影響及其技術(shù)應(yīng)用的臨床分析和系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

4 劉道宏;負(fù)壓創(chuàng)面療法治療感染性軟組織損傷相關(guān)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

5 姜玉峰;中國(guó)體表慢性難愈合創(chuàng)面流行病學(xué)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 冀凌云;中藥“蚓黃散”外治糖尿病潰瘍大鼠創(chuàng)面對(duì)相關(guān)因子的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 李國(guó)瑞;負(fù)壓封閉引流對(duì)兔顱骨外露創(chuàng)面愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 石定;阿魏酸促進(jìn)糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面血管化及其作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

4 劉公洪;濕性醫(yī)療技術(shù)在兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2012年

5 李靖;封閉負(fù)壓引流技術(shù)對(duì)創(chuàng)面微循環(huán)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

6 紀(jì)賡;封閉負(fù)壓引流技術(shù)促進(jìn)慢性創(chuàng)面愈合機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2013年

7 尚念勝;水凝膠敷料在磨削痂后創(chuàng)面中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2015年

8 吳巍巍;外用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子凝膠在Ⅱ°燒（燙）傷創(chuàng)面應(yīng)用的療效觀察[D];吉林大學(xué);2010年

9 張美光;負(fù)壓封閉引流聯(lián)合含氧液沖洗治療慢性創(chuàng)面的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

10 張夢(mèng)思;銀離子抗菌凝膠敷料治療Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的臨床應(yīng)用研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：704212