本文關鍵詞：丁苯酞對糖尿病小鼠海馬區(qū)結構及Aβ1-42水平的影響

  更多相關文章： 糖尿病 db/db小鼠 丁苯酞 認知障礙 海馬 突觸素 血管內皮生長因子 Aβ1-42

【摘要】：目的:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)引起的認知功能障礙,越來越被大家所認識。海馬突觸作為學習、記憶的神經(jīng)生物學基礎,可以直接影響認知功能。目前我們所認識的癡呆主要包括,血管性癡呆和阿爾茲海默病(Alzheimer’s disease,AD)。2型糖尿病引起的癡呆,是否也與血管因素和阿爾茲海默病的特征性病理有關,值得關注和深入研究。丁苯酞作為神經(jīng)保護藥物,已經(jīng)證實可以改善糖尿病認知功能障礙,但其具體機制尚待研究。本實驗旨在對糖尿病小鼠預防性應用丁苯酞,觀察丁苯酞對小鼠海馬突觸可塑性、血管及β淀粉樣蛋白(Amyloidβprotein,Aβ)的影響。方法:1 糖尿病小鼠分組6周齡雄性db/m小鼠8只作為正常對照組(NC,n=8只),db/db小鼠16只,隨機分為糖尿病對照組(DM,n=8只),糖尿病丁苯酞組(DM-NBP,n=8只)。2 藥物干預實驗動物試養(yǎng)一周后,給予DM-NBP組小鼠溶于植物油的丁苯酞灌胃(丁苯酞劑量為120mg/Kg/d)[1],NC組及DM組小鼠給予等量的植物油灌胃,每日1次,連續(xù)干預6周。3 一般觀察觀察小鼠的精神狀態(tài)、進食水及尿量情況,每周監(jiān)測小鼠的血糖、體重。4 行為學檢測藥物干預6周后,進行水迷宮測試,連續(xù)5天的定位航行實驗,于第6天行空間探索實驗,記錄各組小鼠的逃避潛伏期及穿越平臺次數(shù)。5 電鏡及Western-blot、PCR檢測水迷宮實驗結束后,處死小鼠,取小鼠海馬組織制備電鏡標本,觀察海馬超微結構;應用蛋白免疫印跡法(Western-blot,WB)及聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測海馬突觸素(Synaptophysin,SYP)、血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及Aβ1-42的表達水平。結果:1 一般情況NC組小鼠精神狀態(tài)良好,毛發(fā)光順,進食水及尿量正常,DM及DM-NBP組小鼠出現(xiàn)明顯的多尿、多飲、多食癥狀,少動,毛發(fā)污穢無澤,體重迅速增加。干預6周后測DM與DM-NBP組小鼠組間血糖無顯著差異(P0.05),但與NC組比較,兩組血糖明顯升高(P0.05);DM組與DM-NBP組體重明顯高于NC組,均有統(tǒng)計學意義(P0.05),DM組與DM-NBP組比較無顯著差異(P0.05)。2 行為學觀察2.1 基礎游泳速度測定實驗開始前,為排除個體差異,讓各組小鼠自由泳60s,了解基礎游泳速度,結果顯示DM與DM-NBP組小鼠間基礎游泳速度無顯著差異(P0.05)。2.2 定位航行實驗定位航行第1天,各組小鼠間逃避潛伏期無明顯差異(P0.05)。第2-5天DM組與DM-NBP組小鼠逃避潛伏期較NC組明顯延長(P0.05),其中DM-NBP組較DM組逃避潛伏期縮短(P0.05)。2.3 空間探索實驗各組小鼠穿越平臺的次數(shù)依次減少:NC組DM-NBP組DM組(P0.05)。3 電鏡觀察結果3.1 椎體細胞NC組小鼠海馬錐體細胞:細胞核大而圓,核膜完整,染色質分布均勻;細胞器較豐富,線粒體排列密集,數(shù)量較多,粗面內質網(wǎng)網(wǎng)腔均勻一致,分布規(guī)則;DM組小鼠海馬神經(jīng)元核內染色質邊集、顆粒化;細胞器明顯減少,線粒體水腫,呈不規(guī)則形,可見嵴斷裂或消失;粗面內質網(wǎng)網(wǎng)腔擴張,分布不規(guī)則;DM-NBP組小鼠海馬椎體細胞病理改變較DM組減輕。3.2 突觸NC組小鼠海馬突觸結構清晰,突觸小泡明顯;DM組小鼠海馬突觸結構模糊不清,突觸間隙消失,突觸前成分中的線粒體腫脹;DM-NBP組小鼠海馬突觸病理改變較DM組減輕。3.3 毛細血管DM組毛細血管內皮細胞內的線粒體、粗面內質網(wǎng)明顯腫脹;DM-NBP組毛細血管損傷較DM組減輕。4 RT-PCR結果三組間比較海馬組織內突觸素表達水平:NC組DM-NBP組DM組(P0.05);VEGF表達水平:DM-NBP組DM組NC組(P0.05);Aβ1-42表達水平:DM組DM-NBP組NC組(P0.05)。5 Western-blot結果三組間比較海馬組織內突觸素蛋白表達量:NC組DM-NBP組DM組(P0.05);VEGF蛋白表達量:DM-NBP組DM組NC組(P0.05);Aβ1-42蛋白表達量:DM組DM-NBP組NC組(P0.05)。結論:1 13周齡的db/db小鼠學習、記憶能力明顯下降。海馬神經(jīng)元、突觸結構以及毛細血管均出現(xiàn)病理改變,海馬組織中VEGF、Aβ1-42蛋白及m RNA表達增加,突觸素表達下降。2 預防性應用丁苯酞,可以改善糖尿病小鼠的學習、記憶能力,減輕海馬超微結構的病理損傷,上調VEGF及突觸素蛋白、m RNA表達,降低Aβ1-42水平。
【關鍵詞】：糖尿病 db/db小鼠 丁苯酞 認知障礙 海馬 突觸素 血管內皮生長因子 Aβ1-42
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-23
• 結果23-25
• 附圖25-32
• 附表32-36
• 討論36-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-42
• 綜述 糖尿病引起認知障礙的機制研究進展42-52
• 參考文獻48-52
• 致謝52-53
• 個人簡歷53

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本文編號：679757