理想上來說,自身免疫性疾病的治療應該消除致病性的自身免疫細胞而不影響機體正常的保護性免疫功能。但是,可行性的策略一直很難被發(fā)現(xiàn)。這里,我們提出在自身抗體介導的自身免疫性疾病中,BCR識別自身抗原,其可變區(qū)發(fā)生重排產(chǎn)生只針對自身抗原的特異性序列,此序列只在致病性B細胞上表達,而在其它正常的B細胞表面不表達。因此,根據(jù)此B細胞受體(BCR)的特異性,構建自身抗原為基礎的嵌合體免疫受體的NK92MI細胞,殺傷過度反應的表達特異性BCR的B細胞。我們重新編輯了NK92MI細胞,使其表達一個嵌合體自體抗體受體修飾的結構(CAAR),此結構包括自身免疫性疾病自身抗原La/SSB及CD28-CD137-CD3ζ信號結構域。我們發(fā)現(xiàn)La/SSB嵌合體自體抗體修飾的NK92MI(La/SSB-CAAR NK92MI)細胞能夠特異性有效的殺傷特異性表達抗La/SSB B細胞受體(La/SSB-BCR)的B細胞來源的細胞(LaA-BCR Romas,LaA-BCRMaver-1)及T細胞來源的細胞(LaA-BCR-Jurkat)。此外,La/SSB嵌合體自體抗體受體修飾的NK92MI細胞(La/SSB-CA...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1A：cDNA中PCR獲得LaA片段，經(jīng)過SDS-PAGE瓊脂糖電泳，在凝膠成像儀下觀察條帶大小，由圖可示，在250-500bp可見目的條帶，大小正確

46NA中PCR獲得LaA片段，經(jīng)過SDS-PAGE瓊脂糖電泳，在帶大小，由圖可示，在250-500bp可見目的條帶，大小正確體雙酶切后，條帶大小正確。C：LaA片段連接的pET28a（

圖2：菌液PCR鑒定結果

SB嵌合體自體抗體受體修飾的NK92MI細胞靶向性治療自身免疫性疾病三、結果達載體示意圖。D：pET28a（+）載體示意圖的具體序列，本實驗選取的酶切為NheI和XhoI，由圖可示，我們保留了一個His標簽，便于進一步LaA原達蛋白的誘導及純化。將帶有Nh....

圖3：A：LaA-pET28a（+）原核表達載體轉化入BL-21菌株后，經(jīng)過IPTG誘導4.5h后，SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍染色觀察LaA蛋白條帶的大小，LaA蛋白分子量大約為16KD，16KD左右沒有目的條帶

LaA-pET28a（+）原核表達載體轉化入BL-21菌株后，DS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍染色觀察LaA蛋白條帶的為16KD，16KD左右沒有目的條帶。Lane1：對照組對照組BL-21菌液上清液；Lane3：LaA-LaA-pET28ae4：LaA-LaA-....

圖4：LaA與Non-LaA蛋白經(jīng)過鎳柱親和純化后，經(jīng)過SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍染色后，觀察純化效果及目的條帶的大小

獲取上清進行鎳柱親和純化，獲得高純度的LaA與Non-LaA蛋白，見圖4。圖4：LaA與Non-LaA蛋白經(jīng)過鎳柱親和純化后，經(jīng)過SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍染色后，觀察純化效果及目的條帶的大小。Lane1為純化前的LaA蛋白；Lane2為純化前的....

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