研究背景和目的:2型糖尿病(T2D)是最常見的代謝性疾病之一,其主要特征是由于胰島素分泌不足或胰島素抵抗而出現(xiàn)慢性高血糖。慢性創(chuàng)傷具有特征性的病理聯(lián)系,不能通過有序和及時的修復(fù)來恢復(fù)結(jié)構(gòu)和功能的完整性。在糖尿病患者中,每年有2%-3%的患者發(fā)生足部潰瘍。糖尿病足是一種嚴(yán)重的T2D并發(fā)癥,常導(dǎo)致疼痛、痛苦和生活質(zhì)量低下。內(nèi)皮克隆形成細(xì)胞(Endothelial colony-forming cells,ECFCs)被認(rèn)為晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs),在創(chuàng)傷修復(fù)中的作用受到廣泛關(guān)注。ECFCs是一種來源于骨髓的原始細(xì)胞,在一定的條件下可誘導(dǎo)分化成為成熟的內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,ECs)。該細(xì)胞不僅參與胚胎時期的血管生成,而且在人體出生后的血管新生、血管損傷的內(nèi)皮修復(fù)以及功能維持中仍然有重要的作用。干/祖細(xì)胞對創(chuàng)面的修復(fù)機制可概括為:(1)分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞;(2)旁分泌產(chǎn)生多種生物活性的細(xì)胞因子促進創(chuàng)面的血管新生及神經(jīng)再生。為此,我們推測內(nèi)皮克隆形成細(xì)胞通過旁分泌機制可促進糖尿病患者慢性創(chuàng)面的愈合以及破損處血管再...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 實驗材料
    2.1 一般資料
    2.2 主要儀器
    2.3 實驗試劑
3 實驗方法
    3.1 ECFCs細(xì)胞的提取
    3.2 ECFCs細(xì)胞傳代
    3.3 ECFCs細(xì)胞凍存
    3.4 ECFCs表面抗原檢測
    3.5 ECFCs檢測鑒定--免疫熒光標(biāo)記
    3.6 Matrigel基質(zhì)膠成管實驗
    3.7 細(xì)胞條件培養(yǎng)基ECFCs-CM的制備
    3.8 抗體芯片檢測ECFCs-CM中細(xì)胞因子表達(dá)
    3.9 ELISA法檢測ECFCs-CM中細(xì)胞因子表達(dá)情況
    3.10 CCK8檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
    3.11 遷移--劃痕實驗
    3.12 遷移--transwell共培養(yǎng)
    3.13 細(xì)胞凋亡
    3.14 細(xì)胞周期檢測
    3.15 絲素蛋白/海藻酸鈉水凝膠的制備及表征檢測
4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析
5 結(jié)果
    5.1 ECFCs培養(yǎng)及傳代
    5.2 免疫熒光染色ECFCs檢測鑒定
    5.3 流式細(xì)胞儀檢測ECFCs表面抗原檢測鑒定
    5.4 ECFCs細(xì)胞的成管能力檢測
    5.5 抗體芯片法檢測ECFCs-CM細(xì)胞因子表達(dá)
    5.6 ELISA法檢測ECFCs-CM中細(xì)胞因子表達(dá)情況
    5.7 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HUVECs增殖能力的影響
    5.8 CCK-8法檢測ECFCs-CM對HDFs增殖能力的影響
    5.9 細(xì)胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
    5.10 細(xì)胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
    5.11 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs遷移能力的影響
    5.12 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HDFs遷移能力的影響
    5.13 流式細(xì)胞儀法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs細(xì)胞凋亡的影響
    5.14 流式細(xì)胞儀檢測ECFCs-CM對HUVECs細(xì)胞周期的影響
    5.15 流式細(xì)胞儀檢測ECFCs-CM對HDFs細(xì)胞周期的影響
    5.16 SF/ALG水凝膠合成大體形態(tài)觀察
    5.17 SF/ALG水凝膠傅里葉變換紅外光譜(FTIR)分析
    5.18 SF/ALG水凝膠孔隙率分析
6 討論
    6.1 為什么選擇人源性ECFCs作為糖尿病慢性損傷修復(fù)的細(xì)胞
    6.2 如何通過表面抗原檢測鑒定ECFCs細(xì)胞
    6.3 為何采用抗體芯片法對ECFCs-CM中細(xì)胞因子進行檢測
    6.4 ECFCs-CM中細(xì)胞因子表達(dá)情況的分析
    6.5 ECFCs-CM對HUVECs和HDFs增殖能力的影響
    6.6 胞劃痕法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
    6.7 Transwell間接共培養(yǎng)法檢測ECFCs-CM對HUVECs和HDFs遷移能力的影響
7 結(jié)論
8 展望
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
攻讀學(xué)位期間科研著作情況
致謝



本文編號：3752024