目的觀察人甲狀旁腺激素(PTH)的N端活性片段PTH(1-34)對人成骨肉瘤細胞MG63基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達的影響,以及PTH通過Wnt/β-catenin信號通路介導(dǎo)MGP表達調(diào)控的作用,探討PTH(1-34)在防治骨質(zhì)疏松癥作用中可能的分子機制。方法(1)用不同濃度PTH(1-34)(10-9、10-8、10-7mol/L),單獨或聯(lián)合Wnt/β-catenin信號通路抑制劑DKK-1(200 ng/m L)干預(yù)MG63細胞;(2)檢測堿性磷酸酶(ALP)染色及活力測定用于判斷細胞分化情況;(3)MGP及Wnt/β-catenin信號通路各組分的m RNA及蛋白的表達分別采用實時定量RT-PCR及Western blotting方法。結(jié)果 (1)PTH(1-34)上調(diào)MGP基因的表達,MGP m RNA的表達分別是對照組的2.56倍、4.14倍、7.81倍(P<0.05或P<0.01),且呈劑量依賴性增高;(2)PTH增強MG63細胞ALP活力,Dkk-1抑制ALP活性,Dkk-1與PTH聯(lián)用部分阻斷PTH上調(diào)ALP活力(P<0.05);(3)PTH上調(diào)M...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試劑
    1.2 細胞培養(yǎng)及藥物干預(yù)
    1.3 堿性磷酸酶(ALP)活性檢測
    1.4 熒光實時定量PCR(q PCR)檢測m RNA表達
    1.5 Western blot檢測蛋白表達
    1.6 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 PTH上調(diào)MG63細胞MGP表達,且呈劑量依懶性
    2.2 PTH增加MG63細胞堿性磷酸酶(ALP)活性
    2.3 PTH及Dkk-1對人MG63細胞MGP及wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路相關(guān)因子基因表達的影響
    2.4 PTH(1-34)及DKK-1對MG63細胞MGP及Wnt/β-catenin信號通路中相關(guān)因子蛋白表達的影響
3 討論



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