發(fā)布時間：2017-05-11 05:15

  本文關鍵詞：κ-阿片受體在改善高脂誘導的血管內(nèi)皮細胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：高脂血癥引起的以肥胖、胰島素抵抗、高血壓等為表現(xiàn)的代謝綜合征的發(fā)病率逐年升高,并呈年輕化趨勢,其可導致大血管病變發(fā)病風險的增加。在高血脂作用下,內(nèi)皮功能發(fā)生紊亂,其主要機制是血管內(nèi)皮合成釋放的各種血管活性物質和細胞因子二者之間的平衡被打破。內(nèi)皮功能紊亂被認為是促進大血管病變早期發(fā)生發(fā)展的主要因素。因此,改善內(nèi)皮功能紊亂并阻止其進展將會有效降低代謝綜合征的發(fā)病率。k-阿片受體(k-opioid receptor,k-OR)在心血管系統(tǒng)中廣泛表達。心臟可產(chǎn)生并釋放內(nèi)源性k-阿片肽,其可作用于k-OR從而調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的活動。我們課題組既往的研究發(fā)現(xiàn):①激活k-OR能夠以時間、劑量以及內(nèi)皮依賴性的方式舒張大鼠的腹主動脈,在整體可以顯著降低正常和高血壓大鼠的動脈血壓;②激活k-OR可上調(diào)低氧條件下NO的水平,同時抑制內(nèi)皮素(ET-1)和血管緊張素II(Ang II)的表達,并可改善低氧誘導的肺動脈內(nèi)皮功能紊亂;③激活k-OR還可以抑制心肌缺血導致的炎癥反應和心肌細胞凋亡。這些作用均與NO的生成密切相關,提示k-OR的激活可能具有內(nèi)皮依賴性的舒張血管、調(diào)節(jié)血管舒張/收縮因子的平衡狀態(tài)、改善內(nèi)皮功能以及抗炎等作用。然而,關于k-OR在高脂引起的內(nèi)皮損傷中的調(diào)節(jié)作用及分子機制尚不明確,因此,本課題在前期工作的基礎上,成功構建了高脂誘導的內(nèi)皮細胞凋亡模型,觀察k-OR在改善高脂誘導的血管內(nèi)皮細胞凋亡中的作用及其可能的分子機制。研究結果可為治療高脂血癥引起的內(nèi)皮損傷提供新的策略。【目的】1.在高脂誘導的內(nèi)皮凋亡模型中,闡明k-OR的激活對內(nèi)皮細胞生物學行為的影響;2.揭示k-OR的激活對內(nèi)皮細胞生物學行為產(chǎn)生影響的具體分子機制。【材料與方法】1.人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)經(jīng)培養(yǎng)和鑒定后,用軟脂酸鈉(sodium palmitate)高脂誘導細胞損傷48小時后進行后續(xù)實驗。2.分組情況如下:正常對照組;高脂處理組;高脂處理+U50,488H(選擇性k-OR激動劑)組;高脂處理+U50,488H+nor-BNI(選擇性k-OR拮抗劑)組。3.采用光學顯微鏡觀察各組細胞生長狀態(tài)。4.采用油紅染色分析各組細胞脂滴合成情況。5.采用細胞活力測定試劑盒(CCK-8)評價各組細胞生長活力。6.采用雙染色法,通過流式細胞技術分析各組細胞凋亡比率。7.采用特異性抑制劑和小干擾RNA分別處理細胞,通過Western blot法檢測各組細胞中k-OR、p-Akt、total-Akt、p-e NOS、total-e NOS、Caspase 3等分子的蛋白表達情況。8.利用一氧化氮檢測試劑盒,檢測各組細胞培養(yǎng)上清中NO的含量。【結果】1.k-OR的激活對高脂誘導的HUVEC生物學行為的影響Sodium palmitate處理48小時后,高脂處理組細胞數(shù)目減少,細胞形態(tài)發(fā)生變化,呈典型的凋亡形態(tài),細胞中脂滴含量增加;同時,細胞生存率明顯下降,凋亡顯著上調(diào)。U50,488H可以顯著改善高脂誘導細胞的生長狀態(tài),降低細胞中脂滴的含量,提高細胞生存率,抑制細胞凋亡。上述作用可被κ-OR拮抗劑nor-BNI所阻斷,表明U50,488H是通過激活κ-OR,并可能介導了下游信號通路的活化,繼而引發(fā)了一系列細胞生物學行為的改善。2.κ-OR的激活在改善高脂誘導的內(nèi)皮細胞凋亡中的可能機制實驗表明U50,488H可通過激活k-OR并活化PI3K-Akt-e NOS信號通路,進而促進NO的生成,同時抑制Caspase 3的表達,從而抑制高脂誘導的細胞凋亡。為進一步驗證抗高脂誘導的細胞凋亡的作用是由κ-OR介導的,并且是通過PI3K-Akt-e NOS信號通路的活化實現(xiàn)的,本實驗利用針對κ-OR和Akt的si RNA處理細胞,結果表明轉染針對κ-OR的si RNA后高脂誘導的細胞凋亡顯著增加,轉染針對Akt的si RNA后可以阻斷U50,488H的抗凋亡作用。上述結果表明,κ-OR介導的抗高脂誘導的細胞凋亡的作用與PI3K-Akt-e NOS信號通路的活化有關�！窘Y論】本研究首次提出κ-OR激動后能夠通過介導PI3K-Akt-e NOS信號通路的活化,提高e NOS的生物活性,促進NO的生成,從而抑制高脂誘導的細胞凋亡。研究結果為臨床應用阿片類物質防治高脂誘導的內(nèi)皮損傷提供了理論依據(jù),同時為防治高脂血癥與代謝綜合征向心血管疾病的發(fā)展提供了新的思路及策略。
【關鍵詞】：高脂血癥 血管內(nèi)皮功能 κ-阿片受體 U50 488H 凋亡
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R589.2
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文獻回顧15-28
• 第一部分：k-阿片受體選擇性激動劑U50,488H對高脂誘導的HUVEC生物學行為的影響28-37
• 前言28
• 1 材料28-29
• 2 方法29-32
• 3 結果32-36
• 4 討論36-37
• 第二部分：k-阿片受體在內(nèi)皮細胞中介導的信號通路的初步探索37-48
• 前言37
• 1 材料37-39
• 2 方法39-42
• 3 結果42-47
• 4 討論47-48
• 第三部分：k-阿片受體在改善高脂誘導的內(nèi)皮細胞凋亡中的作用及分子機制48-66
• 前言48
• 1 材料48-51
• 2 方法51-55
• 3 結果55-64
• 4 討論64-66
• 小結66-67
• 參考文獻67-74
• 個人簡歷和研究成果74-75
• 致謝75

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本文編號：356352