目的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）是一種慢性的系統(tǒng)性的自身免疫性疾病,最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)的損傷和功能的喪失。本課題組前期研究首次發(fā)現(xiàn),酸敏感離子通道1a（acid-sensing ion channel 1a,ASIC1a）在佐劑關(guān)節(jié)炎鼠模型（adjuvant-induced arthritis,AA）中顯著高表達(dá),且在AA大鼠軟骨損傷的病理過程中起著至關(guān)重要的作用,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ASIC1a可能通過介導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的自噬和凋亡參與RA病理過程。自噬和凋亡作為程序性死亡的兩種形式,二者間的關(guān)系密切又復(fù)雜。本研究主要目的是探討ASIC1a介導(dǎo)的自噬對大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響,探討自噬在RA發(fā)病進(jìn)程中的作用。方法建立體內(nèi)AA大鼠模型,分別致炎0天,15天,25天,35天,觀察自噬和凋亡的動態(tài)變化;在體內(nèi)實驗中選用阿米洛利（amiloride）阻斷AA大鼠的ASIC1a,觀察ASIC1a與自噬和凋亡的相關(guān)性;在體內(nèi)和體外實驗中,選用特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）和誘導(dǎo)劑雷帕霉素（Rapamycin,Rapa）阻斷或誘導(dǎo)自噬... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗儀器和實驗設(shè)備
    2.3 實驗藥物、試劑和抗體
    2.4 試劑的配制
3 實驗方法
    3.1 AA大鼠模型的制備、動物分組、及給藥方案
    3.2 體重指數(shù)和關(guān)節(jié)炎評分
    3.3 ELISA檢測血漿炎癥因子
    3.4 大鼠踝關(guān)節(jié)病理學(xué)檢測
    3.5 Tunel & immunofluorescence雙染檢測自噬和凋亡的共表達(dá)
    3.6 分離與培養(yǎng)原代大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
    3.7 Annexin V-FICT/PI流式檢測軟骨細(xì)胞的凋亡率
    3.8 Hochst 33342 染色法檢測軟骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化
    3.9 Western Blot
    3.10 統(tǒng)計學(xué)分析
4 實驗結(jié)果
    4.1 體內(nèi)實驗
        4.1.1 AA大鼠模型的不同時期
        4.1.2 ASIC1a介導(dǎo)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞自噬
        4.1.3 ASIC1a與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性
        4.1.4 ASIC1a介導(dǎo)的自噬對大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的影響
        4.1.5 ASIC1a介導(dǎo)的自噬抑制大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡
    4.2 體外實驗
        4.2.1 3-MA抑制自噬上調(diào)大鼠軟骨細(xì)胞凋亡
        4.2.2 Rapa誘導(dǎo)自噬下調(diào)大鼠軟骨細(xì)胞凋亡
5 討論
6 結(jié)論
7 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3545031