背景和研究目的:糖尿病（Diabetes mellitus,DM）是一類(lèi)以血糖持續(xù)升高為特征的代謝性疾病,臨床上依據(jù)其對(duì)胰島素依賴(lài)與否可分為Ⅰ型糖尿病（Type 1 diabetes mellitus,T1DM）和Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）。糖尿病晚期可出現(xiàn)多器官損傷如糖尿病足、眼疾、腎病及心肌病等。糖尿病的治療根據(jù)其類(lèi)型不同、是否伴有并發(fā)癥等而不同。一般地,Ⅰ型糖尿病需要長(zhǎng)期給予胰島素醫(yī)治,Ⅱ型糖尿病的防治是在調(diào)節(jié)飲食結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)促進(jìn)胰島素分泌或增強(qiáng)胰島素敏感性或延遲食物吸收等藥物進(jìn)行單用或聯(lián)合應(yīng)用,嚴(yán)重者也可給予胰島素治療。因此,研發(fā)可以有效防治糖尿病的新型藥物具有重大意義。BefA（Beta cell expansion factor A）是一種由人體腸道細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白,研究顯示該蛋白具有促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖的作用,提示其可能具有潛在的治療糖尿病的價(jià)值。在本研究中,我們首先構(gòu)建了原核BefA表達(dá)載體,利用大腸桿菌BL21系統(tǒng)進(jìn)行蛋白表達(dá)與提純,進(jìn)而獲得較高純度的BefA重組蛋白,并通過(guò)灌胃給藥方式觀察了該重組蛋白對(duì)小鼠Ⅰ型和Ⅱ型... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１重組菌株ＢＬ２１－ｐＥＴ２８Ｃ－ＢｅｆＡ正確性驗(yàn)證

?第３章結(jié)果與分析???８５－９０％之間。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（條帶３）中的表達(dá)量相對(duì)與裂解??液沉淀（條帶４）比例更高，說(shuō)明ＢｅｆＡ蛋白為上清表達(dá)，這一特性降低了蛋白??發(fā)酵和純化的難度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后續(xù)研究及開(kāi)發(fā)中的潛力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??圖３．２純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的純度檢測(cè)。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：誘導(dǎo)前菌體：２：誘導(dǎo)后菌體；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清純化后蛋白。??３．３驗(yàn)證純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的條帶位置??為進(jìn)一步驗(yàn)證目的蛋白位置，我們以Ｈｉｓ為一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)，結(jié)??果顯示２５?ｋＤ處有ＢｅｆＡ目的條帶，說(shuō)明我們純化的蛋白完全正確（圖３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??圖３．３驗(yàn)證純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的條帶位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：誘導(dǎo)前菌體？，２：誘導(dǎo)后??菌體；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清純化后蛋白。??１８??

?第３章結(jié)果與分析???８５－９０％之間。此外，ＢｅｆＡ蛋白在裂解液上清（條帶３）中的表達(dá)量相對(duì)與裂解??液沉淀（條帶４）比例更高，說(shuō)明ＢｅｆＡ蛋白為上清表達(dá)，這一特性降低了蛋白??發(fā)酵和純化的難度，提高了?ＢｅｆＡ蛋白在后續(xù)研究及開(kāi)發(fā)中的潛力。??Ｍ?１?２?３?４?５??Ｊ｜??一—ｒ￣ｒｗ??一－＂ＷＳＳ?ｒ??２５ｋＤ［?－二Ｈ??—＇丨?＿＿?１．１１１．１１?ｍｉ?ｊｔｍｔｍ．??圖３．２純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的純度檢測(cè)。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：誘導(dǎo)前菌體：２：誘導(dǎo)后菌體；??３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清純化后蛋白。??３．３驗(yàn)證純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的條帶位置??為進(jìn)一步驗(yàn)證目的蛋白位置，我們以Ｈｉｓ為一抗做了?Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)，結(jié)??果顯示２５?ｋＤ處有ＢｅｆＡ目的條帶，說(shuō)明我們純化的蛋白完全正確（圖３．３）。??Ｍ?１?２?３?４?５??圖３．３驗(yàn)證純化獲得ＢｅｆＡ蛋白的條帶位置。Ｍ：蛋白Ｍａｒｋｅｒ；?１：誘導(dǎo)前菌體？，２：誘導(dǎo)后??菌體；３：裂解液上清；４：裂解液沉淀；５：上清純化后蛋白。??１８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3404458