發(fā)布時間：2021-05-22 00:59

　　目的:本項目中,我們擬探索lncRNA AK085865在小鼠過敏性哮喘模型中對氣道炎癥、氣道重塑和氣道高反應(yīng)性的影響,進(jìn)一步深入探討AK085865在體內(nèi)環(huán)境中調(diào)控巨噬細(xì)胞極化對過敏性哮喘小鼠的影響,旨在闡明AK085865在過敏性哮喘小鼠模型中的作用及其細(xì)胞免疫學(xué)機(jī)制,從而為過敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制研究和生物學(xué)防治提供新的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法:（1）分組:6-8周齡的雌性野生型C57BL/6小鼠隨機(jī)分成PBS組,WT-Df1組,6-8周齡的雌性基因敲除小鼠則分為KO-Df1組;（2）造模:WT-Df1組與KO-Df1組采用塵螨蛋白（Dermatophagoidesfarinae1,Df1）聯(lián)合霧化攻擊的方法誘導(dǎo)C57BL/6小鼠建立過敏性哮喘模型,而PBS組則給予PBS致敏及霧化;（3）檢測:采用熒光定量PCR檢測哮喘小鼠肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）細(xì)胞及肺組織中l(wèi)ncRNA AK085865表達(dá)水平;通過HE及PAS染色觀察各組小鼠組織病理學(xué)變化,比較各組小鼠氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤水平和氣道重塑水平;通過小鼠肺功能儀,觀察各組小鼠... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 Lnc RNAAK085865 調(diào)控巨噬細(xì)胞極化對過敏性哮喘模型的易感性
    1.實驗動物、試劑和儀器
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗相關(guān)試劑
        1.3 實驗儀器
        1.4 常規(guī)試劑配制與造模試劑配制
        1.5 實驗方法
            1.5.1 構(gòu)建小鼠哮喘模型
            1.5.2 Lnc RNAAK085865 基因敲除小鼠鑒定
            1.5.3 肺組織病理學(xué)檢查
            1.5.4 肺泡灌洗液細(xì)胞和肺組織勻漿及單細(xì)胞懸液獲取
            1.5.5 Lnc RNAAK085865 在氣道組織中表達(dá)水平檢測
            1.5.6 野生型與基因敲除小鼠氣道高反應(yīng)性檢測
            1.5.7 野生型與基因敲除小鼠氣道組織炎性細(xì)胞檢測
            1.5.8 野生型與基因敲除小鼠氣道組織中炎性細(xì)胞因子檢測
            1.5.9 統(tǒng)計學(xué)分析
        1.6 研究結(jié)果
            1.6.1 過敏性哮喘模型構(gòu)建成功
            1.6.2 Lnc RNAAK085865 參與到Df1 誘導(dǎo)的過敏性哮喘的發(fā)病過程中
            1.6.3 Lnc RNAAK085865 基因敲除鼠構(gòu)建成功
            1.6.4 Lnc RNAAK085865 敲除減輕了過敏性哮喘小鼠肺組織炎癥
            1.6.5 Lnc RNAAK085865 敲除減輕了過敏性哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性
            1.6.6 Lnc RNAAK085865 敲除降低了過敏性哮喘小鼠氣道組織中炎癥細(xì)胞表達(dá)水平
            1.6.7 Lnc RNAAK085865 敲除降低了過敏性哮喘小鼠氣道組織中炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)
    討論
    結(jié)論
第二部分 Lnc RNAAK085865 基因敲除對過敏性哮喘小鼠系統(tǒng)和局部細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響
    2.實驗動物、試劑和儀器
        2.1 實驗動物
        2.2 實驗相關(guān)試劑
        2.3 實驗儀器
        2.4 常規(guī)試劑配制與造模試劑配制
        2.5 實驗方法
            2.5.1 Lnc RNAAK085865 基因敲除小鼠鑒定
            2.5.2 構(gòu)建小鼠哮喘模型
            2.5.3 流式檢測野生型和基因敲除哮喘小鼠氣道組織中巨噬細(xì)胞表達(dá)水平
            2.5.4 q RT-PCR檢測野生型和基因敲除哮喘小鼠氣道組織中巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物
            2.5.5 小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)
            2.5.6 小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞鑒定
            2.5.7 巨噬細(xì)胞過繼回輸實驗
            2.5.8 流式檢測哮喘小鼠II型固有淋巴樣細(xì)胞(ILC2s)的表達(dá)譜變化
            2.5.9 流式檢測野生型和基因敲除哮喘小鼠氣道組織中固有淋巴樣細(xì)胞群(ILCs)表達(dá)水平
            2.5.10 流式檢測野生型和基因敲除哮喘小鼠氣道組織中ILC2s分泌的Th2型細(xì)胞因子(IL-4/5/13)
            2.5.11 統(tǒng)計學(xué)分析
        2.6 研究結(jié)果
            2.6.1 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠氣道組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量水平
            2.6.2 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠氣道組織中巨噬細(xì)胞相關(guān)基因標(biāo)志物的表達(dá)
            2.6.3 小鼠體外誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的鑒定
            2.6.4 Lnc RNAAK085865 敲除是減輕過敏性哮喘炎癥程度的關(guān)鍵因素
            2.6.5 哮喘小鼠氣道組織中II型固有淋巴樣細(xì)胞(ILC2s)表面分子檢測
            2.6.6 Lnc RNAAK085865 敲除減少了哮喘小鼠氣道組織中固有淋巴樣細(xì)胞群(ILCs)的含量
            2.6.7 Lnc RNAAK085865 敲除降低了哮喘小鼠氣道組織中ILC2s分泌的Th2型細(xì)胞因子(IL-4/5/13)的水平
    技術(shù)路線圖
    討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝



本文編號：3200677