目的:自身免疫甲狀腺炎（Autoimmune thyroiditis,AIT）是由Th1淋巴細胞介導的器官特異性自身免疫性疾病,是遺傳、環(huán)境等多因素共同作用所致的免疫穩(wěn)態(tài)失衡。碘是AIT發(fā)病的重要環(huán)境因素之一,碘過量引起甲狀腺免疫穩(wěn)態(tài)失衡,但是碘過量致甲狀腺自身免疫的始動環(huán)節(jié)和具體機制尚不明確。有研究表明,AIM2炎癥小體在感染性疾病、腫瘤、炎癥性疾病以及自身免疫疾病等方面起重要作用,也有研究證明多種炎癥小體與AIT的發(fā)病有關,證實了AIM2炎癥小體及其下游細胞因子可能代表AIT的潛在治療靶點和生物標志物。本文旨在利用高碘誘導的NOD.H-2^h4小鼠AIT模型,探究AIM2炎癥小體影響AIT發(fā)生發(fā)展的分子機制以及干預AIM2炎癥小體對AIT的作用。研究方法:在NOD.H-2^h4小鼠甲狀腺原位注射AIM2腺相關病毒,預防性阻斷AIM2的表達,再以高碘飲水喂養(yǎng)小鼠,冰凍切片HE染色鏡下觀察小鼠甲狀腺炎癥和甲狀腺腫是否有所緩解。ELISA檢測TgAb的表達量,以判斷AIT的發(fā)生情況,RT-PCR和WB檢測甲狀腺組織中AIM2炎癥小體及其下游細胞因子... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

在甲狀腺組織中AIM2的表達

中國醫(yī)科大學碩士學位論文10在NOD.H-2h4小鼠4周齡時，高碘實驗組在小鼠的甲狀腺原位注射AIM2腺相關病毒，預防性地阻斷甲狀腺AIM2的表達，12周后檢測對AIT的影響。高碘實驗組小鼠甲狀腺相對重量與高碘對照組相比未觀察到明顯差異（P=0.37），二組均高于正常碘組（P<0.01；P<0.01），說明高碘實驗組甲狀腺腫的情況并未緩解。甲狀腺組織切片HE染色，顯微鏡下觀察甲狀腺組織炎癥浸潤情況并進行炎癥評分，高碘實驗組的小鼠甲狀腺炎癥評分（P=0.83）與高碘對照組相比無明顯差異，二組均高于正常碘組（P<0.01；P<0.01），說明甲狀腺炎癥發(fā)生情況也沒有得到明顯緩解。酶聯(lián)免疫吸附法測定小鼠血清中TgAb的濃度，高碘對照組較正常碘組有所增加（P=0.04），高碘實驗組的小鼠TgAb濃度相對于高碘對照組有所降低，但沒有明顯差異（P=0.63）,相對于正常碘對照組也沒有明顯差異（P=0.13）。提示甲狀腺自身免疫未得到明顯改善，腺相關病毒特異性沉默甲狀腺AIM2的表達并未緩解NOD.H-2h4小鼠的甲狀腺腫的發(fā)生和甲狀腺炎癥嚴重程度。（表2，圖3）表2.小鼠甲狀腺原位注射AAV后甲狀腺相關指標變化n甲狀腺相對重量（1/10000）甲狀腺評分血清TgAb濃度CON110.66±0.150.59±0.430.26±0.03H-CON93.16±1.053.00±1.090.39±0.17H-AIM2102.81±1.142.90±1.260.36±0.17P1<0.01<0.010.04P2<0.01<0.010.13P30.370.830.63(表示形式：均數±標準差，P1:CONv.s.H-CON;P2:CONv.s.H-AIM2;P3:H-CONv.s.H-AIM2)圖3.小鼠甲狀腺原位注射AAV后甲狀腺相關指標變化

中國醫(yī)科大學碩士學位論文11圖4.甲狀腺組織HE染色(光鏡，×200)3.3小鼠甲狀腺原位注射AAV-shRNA-AIM2沉默甲狀腺AIM2的表達對脾臟Th1和Th17的影響高碘實驗組在NOD.H-2h4小鼠4周齡時在甲狀腺原位注射AIM2腺相關病毒，預防性地阻斷甲狀腺AIM2的表達，12周后檢測對脾臟Th1和Th17的影響。提取小鼠脾臟單個核細胞，流式細胞術檢測Th1細胞和Th17細胞的比例。與正常碘組相比，高碘對照組小鼠Th1細胞減少(P=0.04)，Th17細胞增加(P<0.01)；高碘實驗組的Th1細胞和Th17細胞比例與正常碘組無明顯差異(P=0.23；P=0.25)；高碘實驗組較高碘對照組的Th17細胞比例下降(P<0.01)。說明甲狀腺炎癥發(fā)生時Th1細胞減少，Th17細胞增多，甲狀腺原位沉默AIM2的表達可以降低Th17細胞的比例，但未觀察到Th1細胞比例的明顯變化。（表3，圖5）A.炎癥評分1分B.炎癥評分2分C.炎癥評分3分D.炎癥評分4分


本文編號：3072295