目的:利用多種基因檢測手段探究28個Joubert綜合征家系的致病基因及變異位點。研究對象及方法:在全國范圍內募集了 28個Joubert綜合征家系（共29名患者）,對患者的病例資料進行匯總整理并對家系成員進行提取核酸。1.利用靶向基因組測序和全外顯子組測序技術對患者基因組DNA進行高通量測序。2.利用生物信息學方法對二代測序數(shù)據(jù)進行比對、注釋、過濾,挑選出可能致病的變異位點。3.利用Sanger測序對變異位點在患者及其直系親屬中進行驗證。4.進行拷貝數(shù)變異分析檢測樣本可能存在的拷貝數(shù)變化并通過MLPA和Q-PCR的方法進行驗證。5.利用RT-PCR的方法在cDNA水平上驗證剪接位點對剪接的影響。結果:本實驗為來自24個Joubert綜合征家系的25例患者明確了致病基因和變異位點,占比86.2%,在兩例患者中各找到一個位于已知致病基因雜合型的可能致病的變異位點,占比6.9%,兩例患者的致病基因及位點尚未找到,占比6.9%。篩選出位于 CC2D2A、C5orf42、AHI1、ARMC9、CEP290、NPHP1、ARL13B、B9D2、CSPP1、INPP5E、PIBF1、RPGRIPI... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．纖毛疾病基因和表型的復雜交疊Ｍ??１．２?Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征的研究進展??Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征（Ｊｏｕｂｅｒｔｓｙｎｄｒｏｍｅ，簡稱ＪＳ，ＭＩＭ＃２１３３００）是纖毛病的典型代表，??

ｒｔ綜合征是１９６９年由Ｊｏｕｂｅｒｔ［４４］及其同事首次在一個法裔－加拿妹發(fā)現(xiàn)的。這四個患者均存在認知障礙、共濟失調、呼吸急蝴部發(fā)育不全的異常表型。隨后在１９７７年，Ｂｏｌｔｓｈａｕｓｅｒ和Ｉｓｌｅｒ［４似臨床癥狀的患者，并將具有相同或類似這種臨床表型的這合征。后來隨著醫(yī)學技術的發(fā)展和磁共振成像技術應用到臨察多數(shù)Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征患者的臨床病例后，Ｍａｒｉｅ［４６］發(fā)現(xiàn)在Ｊｏｕｂｅ振成像中存在普遍的異�，F(xiàn)象，即因患者小腦蚓部發(fā)育不良現(xiàn)為中后腦連接部位呈現(xiàn)“磨牙征”的現(xiàn)象，隨后將顱腦磁共”作為Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征的特征性診斷標志。隨著對Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征ｒｔ綜合征致病機制的不斷探索，目前，己經(jīng)有相對完善的Ｊｏｕｂｅｔ主要包括：：（１）顱腦磁共振成像顯示為“磨牙征”，具體體現(xiàn)為間窩加深以及小腦上腳的抬高增粗；（２）患者存在不同程度的（３）存在嬰幼兒時期的肌張力減退；（４）下列兩項中至少存在一的呼吸節(jié)律異常（體現(xiàn)為呼吸急促和／或呼吸暫�；騼煞N呼吸異眼運動異常（包括眼球震顫和／或眼球運動失能）［４７］。??Ｎｏｒｍａｌ?Ｃｌａｓｓｉｃ?ＭＴＳ??

圖４．?Ｊｏｕｂｅｒｔ綜合征基因突變分析的技術路線??２實驗材料和方法??２．１實驗設備??儀器設備?生產(chǎn)商???微量移液器（２．５，１０，１００，２００，１?ＯＯＯｐＬ）?Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ??高壓蒸汽滅菌鍋（ＭＪＳ－５４Ａ）?施都凱儀器設備有限公司??恒溫金屬浴（ＨＢ－１００）?杭州博日科技有限公司??高速離心機（１－１４）?Ｓｉｇｍａ??核酸蛋白定量儀（Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００Ｃ）?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，??ＱｕｂｉｔＲ３．０?Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ?Ｌｉｆｅ?Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｕ．Ｓ．Ａ??Ｍｉｌｌｉ－Ｑ?Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，?Ｕ．Ｓ．Ａ??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3011078