【背景和目的】:骨質(zhì)疏松多發(fā)于老年群體及絕經(jīng)后的女性群體,分為年齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松,患者骨密度降低,骨小梁數(shù)量減少,骨折風險增加。而且骨質(zhì)疏松骨折后易引起其他并發(fā)癥,影響患者生活質(zhì)量,帶來一系列社會經(jīng)濟學(xué)問題。骨質(zhì)疏松是一種由骨代謝異常導(dǎo)致的退行性疾病,而骨代謝是由控制骨形成的細胞——成骨細胞,和調(diào)控骨吸收的細胞——破骨細胞共同作用的,骨質(zhì)疏松的發(fā)病主要是由于破骨細胞活性大于成骨細胞活性導(dǎo)致的。已應(yīng)用的治療骨質(zhì)疏松的藥物也主要是通過調(diào)控這兩種細胞的活性進行治療。miRNA是一類長度為18-25個核苷酸的非編碼小RNA,主要通過降解mRNA的3’-UTR和抑制轉(zhuǎn)錄后翻譯來調(diào)控基因的表達。諸多研究證明miRNA能調(diào)控成骨細胞和破骨細胞的增殖,分化和凋亡,同時miRNA也在骨質(zhì)疏松疾病的發(fā)生發(fā)展及診斷治療中起到重要作用。本研究通過芯片篩選出和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松相關(guān)的miRNA,并研究其對成骨細胞和破骨細胞的調(diào)控,試圖為骨質(zhì)疏松的治療尋找新靶點和新的機制。【方法】:本研究利用了外加雌激素刺激和OVX導(dǎo)致的雌激素缺失模型,檢測了雌激素對骨髓單核巨噬細胞(BMM)增殖、凋亡和破骨分化的影響。并用雌激素受體抑制劑阻斷了雌激素受體,以驗證雌激素對BMM增殖、凋亡和破骨分化的影響是否通過雌激素受體(ER)介導(dǎo)。隨后我們構(gòu)建了雙側(cè)卵巢切除(OVX)導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松小鼠模型,在假手術(shù)組(sham)和OVX組之間用miRNA芯片篩選出明顯變化的miR-146a。構(gòu)建miR-146a敲基因小鼠(miR-146a~(-/-)),并在野生型(WT)和miR-146a~(-/-)小鼠中構(gòu)建OVX模型,利用microCT對其骨微結(jié)構(gòu)進行分析,同時對組織內(nèi)?血清內(nèi)?細胞內(nèi)相關(guān)標志物進行檢測。體外過表達和降低miR-146a并檢測其對成骨細胞和破骨細胞分化的影響。體外共培養(yǎng)WT-sham?WT-OVX和miR-146a~(-/-)-sham?miR-146a~(-/-)-OVX小鼠的成骨細胞和破骨細胞,檢測其培養(yǎng)上清中相關(guān)細胞因子的表達�！窘Y(jié)果】:雌激素能抑制BMM增殖和破骨分化,促進BMM凋亡,且這一作用是通過ER介導(dǎo)的。miR-146a在雌激素缺失的骨質(zhì)疏松小鼠中表達明顯升高。miR-146a miR-146a~(-/-)小鼠與WT小鼠骨量無明顯差異,但骨轉(zhuǎn)換率增加。MiR-146a抑制成骨細胞和破骨細胞分化。WT小鼠OVX后骨量減少,破骨細胞活性增強;miR-146a~(-/-)小鼠OVX后骨量不僅沒有下降,反而上升,破骨細胞的活性未見增強,同時其骨微環(huán)境中M-CSF?RANKL/OPG含量下降。【結(jié)論】:miR-146a負調(diào)控成骨細胞與破骨細胞分化。在雌激素缺失引起的骨質(zhì)疏松中,敲除miR-146a能降低骨微環(huán)境中的M-CSF?RANKL/OPG含量,從而降低破骨細胞活性,保護骨量丟失。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R580
【部分圖文】：

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文老齡人口還在以每年 800 萬人的速度增加;有關(guān)專家預(yù)計，至 2050 年，我國老齡人口將達到總?cè)丝诘?1/3。根據(jù) WHO 的估計，50 歲以上女性中約 30%罹患此病，另外隨著人口老齡化發(fā)展，這個比例仍然在持續(xù)上升[11]。據(jù)預(yù)測中國大陸 2030 年骨質(zhì)疏松性骨折年發(fā)生 436 萬例次，至 2050 年達 599 萬例次，相應(yīng)的醫(yī)療支出達 178億美元和 254 億美元[1-6, 12]。女性一生發(fā)生骨質(zhì)疏松性，骨折的危險性(40%)高于乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌的總和，男性一生發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折的危險性(13%)高于前列腺癌。患有骨質(zhì)疏松的患者日常生活中骨折發(fā)生率高達 40%，且主要發(fā)生在脊柱、髖部、腕部[8]。骨折造成的運動性和自主性缺失，顯著降低了患者生活質(zhì)量[13]，且脊柱骨折和髖部骨折會導(dǎo)致患者死亡率上升，主要原因是長期臥床導(dǎo)致的肺炎和血管栓塞等并發(fā)癥[8]。骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為我國所面臨的重要公共健康問題。因此研究出有效的骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防與治療方法迫在眉睫。

臟和骨髓中檢測到受 NF-κB 調(diào)節(jié)的基因表達上調(diào)[51]免疫性失調(diào)、髓質(zhì)增生和自發(fā)性腫瘤[52]。關(guān)于 miR尚未有文獻報道，但 miR-146a 被證實在類風濕性關(guān)作用，主要通過靶向抑制 TRAF6[53]。我們已有的實驗體內(nèi)破骨細胞活性明顯增強，且 miR-146a 敲除老年重。這些證據(jù)都支持我們提出的 miR-146a 與骨代謝調(diào)義在于可以探究 miR-146a 的新功能，同時可以為骨能靶點。與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動態(tài)的，代謝水平很高的器官，骨組織中不僅有礦化統(tǒng)，同時伴隨著血管侵入，骨微環(huán)境中的諸多細胞因旁分泌途徑在不同細胞間發(fā)揮作用。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松

細胞用 4%對聚甲醛固定 30 分鐘，PBST 洗干凈后用 0.5%Triton-100 通透 15 分鐘 用 5%BSA 封閉 1 小時，加入 1：200 的 F4/80 一抗，4°C 過夜，PBST 洗干凈后加入熒光二抗，室溫孵育 1 小時，DAPI 染核，用 PBST 洗干凈，用熒光封片劑封片后在熒光顯微鏡下拍照。1.2 實驗結(jié)果1.2.1 BMM 與破骨細胞的鑒定分離小鼠的 BMM 并用其標志物 F4/80 流式鑒定，發(fā)現(xiàn) F4/80 陽性的細胞率達到 97.2%(圖 1.1A)。同時用 F4/80 免疫熒光染色鑒定分離的小鼠 BMM(圖 1.1B)。用75ng/ml 濃度的細胞因子 RANKL 誘導(dǎo)小鼠 BMM 破骨分化，5 天后形成成熟的破骨細胞，TRAP 染色鑒定成熟的破骨細胞。其中白色箭頭標注為成熟破骨細胞，綠色箭頭標注為正在分化過程的破骨細胞，黑色箭頭標注為未分化的 BMM (圖 1.1C)。
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1 范帥;;中西醫(yī)結(jié)合治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松臨床觀察[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2017年23期

2 賈小玥;鄭黎薇;袁泉;周學(xué)東;徐欣;;腸道菌群:絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松防治新靶點[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2017年03期

3 吐爾遜江·達地汗;穆葉沙爾·吾拉木;哈木拉提·吾甫爾;艾尼瓦爾·托合提;阿依努爾·買提斯迪克;顏培兵;丁文康;;異常黑膽質(zhì)型絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠動物模型的建立及評價[J];新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2017年06期

4 汪琳;李全;蘇佳燦;;低氧誘導(dǎo)因子與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松研究進展[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2017年04期

5 許海波;馬一鳴;方志祥;;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者發(fā)生骨折的相關(guān)因素分析[J];預(yù)防醫(yī)學(xué);2017年09期

6 張鑒;王亦璜;王文超;張曦;;中藥骨舒康治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者的臨床效果觀察[J];臨床合理用藥雜志;2017年29期

7 李凌芳;;依普黃酮對防治女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的療效評價[J];中國當代醫(yī)藥;2013年14期

8 薛守旺;王鋼;王佳;王濤;;云克聯(lián)合依降鈣素治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的臨床療效觀察[J];中國民族民間醫(yī)藥;2011年01期

9 梁文娜;李燦東;高碧珍;沈建英;廖凌虹;張凌媛;;天癸盛衰調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松物質(zhì)本源的探討[J];世界中醫(yī)藥;2011年02期

10 梁文娜;李燦東;高碧珍;沈建英;廖凌虹;張凌媛;;天癸盛衰調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松物質(zhì)本源的探討[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2011年08期

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1 宮蕊;六味地黃丸干預(yù)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與骨質(zhì)疏松相關(guān)疾病基因表達生物信息學(xué)分析研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2019年

2 桑成林;TNF-α調(diào)控Semaphorin Ⅲ家族蛋白參與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生的機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

3 舒小雨;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與血漿醛固酮/腎素的相關(guān)性研究/吲哚與2型糖尿病的相關(guān)性研究/21-羥化酶缺陷癥個例報道[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

4 馬陳;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與Wnt/β-catenin-CEACAM1信號通路的相關(guān)性研究及古方青娥丸的治療作用[D];華中科技大學(xué);2017年

5 王淑麗;復(fù)方仙貞湯對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松婦女平衡能力的影響及其對成骨細胞作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

6 董榮菂;預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松科學(xué)健身指導(dǎo)系統(tǒng)的研究與應(yīng)用[D];北京體育大學(xué);2005年

7 鄒穎剛;更年甘露飲加小劑量雌激素防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實驗研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 黃建睿;滋補腎陰法干預(yù)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松轉(zhuǎn)子間骨折術(shù)后的臨床研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

9 張蓉;杜仲防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松及其機理研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 王俊玲;二仙湯治療骨質(zhì)疏松的系統(tǒng)評價及用于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松治療的初步研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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3 陶有娣;高通量測序探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松與免疫功能的關(guān)系[D];廈門大學(xué);2017年

4 孫瀟灑;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松中醫(yī)證型分布及與甲狀旁腺素基因多態(tài)性相關(guān)性研究[D];山西中醫(yī)藥大學(xué);2017年

5 曹祥昌;基于氧化應(yīng)激機制研究MnTBAP對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)生發(fā)展的影響[D];廈門大學(xué);2017年

6 杜狄;TNF-α通過上調(diào)P2Y2受體表達抑制骨形成在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松中的作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

7 王文杰;從細胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)探討壯骨止痛方抗絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松機理的初步研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 王玉;胰島素樣生長因子受體基因多態(tài)性與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的相關(guān)性研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2017年

9 張煥堂;雷公藤口服液對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的影響及初步臨床觀察[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 孫曉東;甲狀旁腺激素對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松期牙周炎動物模型影響的相關(guān)實驗研究[D];山東大學(xué);2013年

本文編號：2847808