【摘要】：目的:研究1型糖尿病小鼠松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨骨量下降差異并探討其機制。方法:以30只8周齡C57BL/6J小鼠為對象,隨機分為健康對照組(wild type,WT)和1型糖尿病小鼠組(type 1 diabetes mellitus,T1DM)。T1DM組通過注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立1型糖尿病模型,WT組小鼠注射同等劑量生理鹽水。行Micro-CT、X線掃描、HE染色與骨形態(tài)計量檢測分析比較2組小鼠骨量、成骨活動的變化。通過免疫組化與實時定量聚合酶鏈反應(real-time PCR,RT-PCR)檢測經(jīng)典Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子,包括低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-6(low-density lipoprotein receptor-related protein 6,LRP-6)、β-catenin、淋巴細胞增強因子(lymphoid enhancer factor,LEF-1)、T細胞因子(T cell factor,TCF)以及成骨細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子包括堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨鈣素(osteocalcin,OCN)、成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(osterix,Osx)、成骨細胞標志物核心結(jié)合因子(runt-related transcription factor 2,Run X2)的m RNA與蛋白表達水平。結(jié)果:觀察2組小鼠形態(tài)學結(jié)果發(fā)現(xiàn),T1DM組小鼠股骨遠端骨量下降最為明顯,而股骨中段骨量下降幅度較小。Micro-CT重建結(jié)果顯示,T1DM組小鼠松質(zhì)骨指標骨體積占組織總體積百分比(BV/TV)、松質(zhì)骨厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)較WT小鼠相比下降幅度較大[(0.16±0.01)vs.(1.27±0.08),(0.04±0.01)vs.(0.09±0.01),(1.90±0.27)vs.(4.53±0.45);P0.01]。而皮質(zhì)骨對應指標,單位體積內(nèi)骨組織面積比(BA/TA)與皮質(zhì)骨厚度(CT.Th)其降低幅度明顯減小[(0.35±0.05)vs.(0.40±0.02),(0.17±0.01)vs.(0.18±0.01);P0.05]。骨組織形態(tài)計量結(jié)果顯示T1DM小鼠較WT相比松質(zhì)骨單位骨面積內(nèi)成骨細胞表面積比值(Ob.S/BS)、單位骨面積內(nèi)骨礦化面積比值(MS/BS)、骨礦化沉積率(MAR)、骨形成率(BFR)下降幅度較大[(12.15±0.46)vs.(21.69±0.37),(30.19±1.02)vs.(38.02±0.70),(0.74±0.06)vs.(1.13±0.10),(0.25±0.02)vs.(0.48±0.04),P=0.000]。而皮質(zhì)骨下降幅度較小分別為[(12.80±0.13)vs.(16.41±0.29),(36.16±1.22)vs.(42.21±0.54),(0.67±0.34)vs.(0.83±0.03),(0.27±0.02)vs.(0.36±0.04);P=0.000]。RT-PCR結(jié)果顯示T1DM小鼠Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子LRP6、β-catenin、Tcf、LEF-1與成骨分化指標ALP、OCN、OSX、Run X2的表達水平較WT組明顯降低,其中松質(zhì)骨下降幅度較大[(0.18±0.13)vs.(1.00±0.13),(0.23±0.20)vs.(1.00±0.15),(0.29±0.23)vs.(1.00±0.23),(0.22±0.17)vs.(1.00±0.12),(0.52±0.10)vs.(1.00±0.00),(0.52±0.11)vs.(1.00±0.10),(0.42±0.01)vs.(1.00±0.10),(0.34±0.12)vs.(1.00±0.08);P0.01],皮質(zhì)骨下降幅度較小為[(0.74±0.65)vs.(1.00±0.07),(0.63±0.45)vs.(1.00±0.09),(0.75±0.58)vs.(1.00±0.08),(0.70±063)vs.(1.00±0.05),(0.67±0.19)vs.(1.00±0.23),(0.73±0.08)vs.(1.00±0.23),(0.63±0.08)vs.(1.00±0.39),(0.62±0.08)vs.(1.00±0.11),P0.05]。免疫組化結(jié)果顯示T1DM小鼠Wnt/β-catenin通路相關(guān)因子LRP6、β-catenin、Tcf與成骨分化指標OCN、OSX、Run X2的表達水平較WT組明顯降低,其中松質(zhì)骨下降幅度較大[(9.17±1.18)vs.(19.13±1.83),(8.92±0.92)vs.(20.72±1.32),(7.36±0.45)vs.(19.43±1.31),(4.20±0.91)vs.(20.20±1.92),(9.36±0.78)vs.(18.72±1.24),(10.36±1.47)vs.(18.66±1.28);P0.01],皮質(zhì)骨下降幅度較小為[(8.46±0.61)vs.(11.45±1.57),(4.88±0.67)vs.(6.25±0.56),(9.17±0.42)vs.(11.06±0.67),(8.16±1.05)vs.10.98±1.09),(7.51±0.99)vs.(9.62±1.20),(6.92±0.86)vs.(10.34±1.22),P0.05]。結(jié)論:T1DM小鼠松質(zhì)骨骨量下降幅度較皮質(zhì)骨更顯著,其機制可能為Wnt/β-catenin信號通路表達水平在松質(zhì)骨下降幅度更顯著。
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R580
【圖文】：

組小鼠HE染色（200×）

圖 5.免疫組化結(jié)果顯示兩組小鼠成骨細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達水平（40察 T1DM 小鼠松質(zhì)骨與皮質(zhì)骨 Wnt/β-catenin 信號通路表達水平CR 結(jié)果顯示，無論是松質(zhì)骨還是皮質(zhì)骨，T1DM 小鼠 Wnt 目的6、β-catenin、Tcf、LEF-1 表達均下降。其中松質(zhì)骨 Wnt 目的基因 Ltenin、Tcf、LEF-1 下降幅度比皮質(zhì)骨更大[（0.18±0.13）vs（.1.00±023±0.20）vs.（1.00±0.15），（0.29±0.23）vs.（1.00±0.23），（0.22±1.00±0.12）；P=0.000]；皮質(zhì)骨相對應下降幅度較小[（0.74±0.6500±0.07），（0.63±0.45）vs.（1.00±0.09），（0.75±0.58）vs.（1.00±070±063）vs.（1.00±0.05）；P＜0.01]。見表 10、表 11，圖 6。免疫顯示松質(zhì)骨 LRP6 、β-catenin、TCF 下降幅度較大[（9.17±1.18

免疫組化結(jié)果顯示兩組小鼠Wnt/βcatenin通路表達水平（400×）

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本文編號：2785587