【摘要】：研究背景:慢性氟中毒是一種地方性疾病,主要病因是攝入過量氟導致以骨骼病變?yōu)橹鞯牡胤叫约膊?迄今為止發(fā)病機制并不清楚。氟中毒的骨骼改變(氟骨癥)包括骨硬化,骨軟化,骨質(zhì)疏松和骨周軟組織鈣(骨)化,其中骨周軟組織鈣(骨)化屬于異位鈣化、異位骨化的范疇,主要見于骨周軟組織,其主要細胞成分是成纖維細胞(fibrobalst,FB)。Cbfa1是成骨細胞特異性轉錄因子,是成骨細胞分化以及成骨的必要條件。本課題組過去的研究中發(fā)現(xiàn),氟化物可以明顯增強FB中Cbfa1從mRNA到蛋白的表達,證實FB在氟化物的作用下已經(jīng)具備了成骨的條件。研究還發(fā)現(xiàn),染氟成纖維細胞中骨代謝調(diào)控網(wǎng)絡中的其他成骨相關因子的表達也明顯增強,提示這些成骨因子亦在FB成骨過程中舉足輕重。本研究以體外實驗的方法,進一步確認在不同的染氟條件下FB中各種因素的改變,同時尋找各種骨生長因子在染氟FB中的相互關系,試圖發(fā)現(xiàn)其中是否存在一個或幾個重要的始發(fā)因素,從而促動或聯(lián)合其他因子共同刺激FB的成骨過程,以期為氟骨癥骨周軟組織骨(鈣)化的發(fā)病機制研究提供科學依據(jù)。實驗方法:本實驗以小鼠成纖維細胞株L929作為研究對象。將FB分為兩個染氟劑量組(劑量組一:對照組、0.0001、0.001、0.1、1 mg/L F~-組;劑量組二:對照組、2、5、10 mg/L F~-組)。采用的實驗方法包括:CCK-8法檢測細胞增殖活性;Gomori鈣鈷法檢測FB堿性磷酸酶活性;實時定量PCR和Western-Blot檢測細胞Cbfa1、BMP-2、OCN、TGF-β、IGF-1、FGF-2、PDGF-B、PTH、PTH-rp、CT和CaSR mRNA、蛋白表達水平。同時重點對檢測結果進行相關性分析。結果:1.CCK-8結果顯示,與對照組相比,2 mg/L F-、5 mg/L F-可刺激細胞活性,10 mg/L F-則抑制細胞活性,且隨著染氟時間延長,細胞的增殖活性下降;2.與對照組相比,2 mg/L F-組和5 mg/L F-組ALP活性明顯增強,而10 mg/L F-組ALP活性低于對照組;3.實時定量PCR以及Western Blot結果:(1)染氟FB Cbfa1、BMP-2和OCN m RNA和蛋白水平均有提高;(2)染氟FB TGF-βm RNA除染氟10 mg/L組表達增強以外,其余各組變化不明顯甚至明顯降低,但其蛋白表達水平在各染氟濃度下均明顯上調(diào);(3)染氟明顯上調(diào)FB IGF-1 m RNA和蛋白的表達;(4)染氟0.1 mg/L組和10 mg/L組PDGF-B m RNA表達明顯增強,1 mg/L和2 mg/L組PDGF-B蛋白表達明顯增強;(5)除染氟0.001 mg/L組外,其余加氟組FGF-2 m RNA表達均增強或明顯增強;染氟2 mg/L和5 mg/L組FGF-2蛋白表達明顯增強;(6)本實驗中PTH m RNA和蛋白在多數(shù)染氟組均表達增強,PTH-rp m RNA在較低劑量組表達明顯增強,較高劑量組表達明顯減弱,而PTH-rp蛋白的表達則與m RNA剛好相反;(7)氟對CT和Ca SR m RNA和蛋白的表達呈普遍增強趨勢;4.因素相關分析結果:(1)Cbfa1、BMP-2、OCN、TGF-β(1)染氟1 mg/L組,Cbfa1蛋白和BMP-2蛋白的表達增加呈顯著正相關;(2)染氟5 mg/L組,Cbfa1和OCN在FB中的蛋白表達水平呈顯著正相關;(3)染氟10 mg/L組Cbfa1和OCN蛋白表達呈正相關關系;(4)BMP-2和OCN之間僅在1 mg/L組蛋白表達存在負相關;(5)TGF-β和Cbfa1、BMP-2、OCN之間關系規(guī)律不明顯。(2)IGF-1、FGF-2和PDGF-B(1)IGF-1和PDGF-B蛋白表達在染氟5 mg/L、10 mg/L組呈明顯正相關;(2)IGF-1、FGF-2 m RNA表達在染氟2 mg/L組明顯正相關,但在0.001 mg/L和10 mg/L組呈負相關;(3)FGF-2和PDGF-B m RNA在0.0001 mg/L、0.1 mg/L和5 mg/L組為正相關,蛋白在2 mg/L組正相關,但在0.1 mg/L組負相關;(4)TGF-β和PDGF-B m RNA表達在2 mg/L和5 mg/L組正相關,蛋白在0.001 mg/L組正相關,但在1 mg/L組負相關。(3)PTH、PTH-rp、CT和Cas R (1)PTH和Ca SR m RNA表達在0.1 mg/L和1 mg/L組正相關,0.0001 mg/L和0.001 mg/L組負相關;(2)PTH-rp和Ca SR m RNA在0.001 mg/L、10 mg/L組均為明顯正相關,在0.0001 mg/L、0.1 mg/L組為負相關,蛋白在0.0001 mg/L、0.001 mg/L、2 mg/L組為正相關,5 mg/L組為負相關;(3)PTH-rp和CT m RNA表達在0.001 mg/L組負相關,蛋白在10 mg/L組正相關,但在0.001 mg/L、0.1 mg/L組負相關;(4)PTH和PTH-rp蛋白表達在10 mg/L組負相關,m RNA表達在0.0001 mg/L組為正相關,0.001 mg/L和0.1 mg/L組為負相關。結論:1.氟化物明顯刺激FB增殖及成骨表型表達(1)氟化物明顯刺激FB的增殖、分化;(2)染氟FB中ALP表達明顯增強;(3)染氟刺激FB Cbfa1、BMP-2和OCN從m RNA到蛋白的表達。2.染氟FB細胞骨生長因子IGF-1、FGF-2和PDGF-B的表達(1)染氟濃度影響FB中IGF-1 m RNA和蛋白的表達,總的作用以明顯上調(diào)為主;(2)染氟明顯刺激FB中FGF-2和PDGF-B的表達。3.染氟FB PTH、PTH-rp、CT以及Ca SR的表達(1)FB染氟48 h,PTH m RNA和蛋白在多數(shù)染氟組以表達增強為主但PTH-rp m RNA在較低劑量組表達明顯增強,較高劑量組明顯減弱;PTH-rp蛋白則剛好相反;(2)染氟對FB CT的作用以刺激增強為主;(3)染氟FB Ca SR m RNA和蛋白的表達以增強趨勢為主。4.Cbfa1與其他相關因素的相關性分析(1)Cbfa1與成骨蛋白、骨生長因子以及和成骨相關的諸多因素存在錯綜復雜的相互關系。這種相關性受染氟濃度的影響,而且在m RNA和蛋白表達方面反應不同甚至作用相反;(2)成骨相關因素之間存在復雜、規(guī)律不明顯的相互關系。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R599.1
【圖文】：

圖 1 FB 生長曲線細胞增長趨勢來看，染氟早期，各組細胞的增殖活性均有 5 mg/L 組的細胞增殖活性顯著高于對照組，染氟 2 mg/輕微刺激細胞活性。隨著染氟時間延長，細胞的增殖活性 氟作用下細胞活性明顯受到抑制。同時發(fā)現(xiàn)，不同時間段濃度的影響趨勢基本相同。i 鈣鈷法檢測 FB 堿性磷酸酶活性

圖 1 FB 生長曲線從圖中細胞增長趨勢來看，染氟早期，各組細胞的增殖活性均有一定程度的提高且染氟 5 mg/L 組的細胞增殖活性顯著高于對照組，染氟 2 mg/L 和染氟 10mg/L 只是輕微刺激細胞活性。隨著染氟時間延長，細胞的增殖活性下降，并且在 10 mg/L 氟作用下細胞活性明顯受到抑制。同時發(fā)現(xiàn)，不同時間段細胞增殖受到不同染氟濃度的影響趨勢基本相同。3.2 Gomori 鈣鈷法檢測 FB 堿性磷酸酶活性

FBCbfa1mRNA表達

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 鄭曉斌;陳作良;;口腔癌相關成纖維細胞的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2010年02期

2 孫鑫;何永文;;腫瘤微環(huán)境和口腔癌相關成纖維細胞[J];國際病理科學與臨床雜志;2009年04期

3 安美霞;吳開力;林少春;胡世興;;漢防己甲素對翼狀胬肉成纖維細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的影響[J];國際眼科雜志;2007年04期

4 王健;唐捷;蔣秋云;;成纖維細胞在骨創(chuàng)傷修復過程中的作用[J];中國基層醫(yī)藥;2007年08期

5 王繼峰,牛建昭;外周血中一種分泌膠原的新型細胞——循環(huán)成纖維細胞[J];解剖學報;2005年06期

6 劉強,柴家科;成纖維細胞與皮膚替代物的研究與應用[J];中華燒傷雜志;2004年04期

7 盧旭華,陳德玉,趙定麟;成纖維細胞成骨潛能的研究進展[J];骨與關節(jié)損傷雜志;2004年08期

8 蔣俊,徐nr,尚宇陽,張妍;介紹一種簡易的成纖維細胞培養(yǎng)方法[J];實用手外科雜志;2001年02期

9 張建華,蘇波,張素貞;兔角膜成纖維細胞的兩種培養(yǎng)方法[J];第二軍醫(yī)大學學報;1998年04期

10 崔玉芳,楊紅,高亞兵,熊呈琦,夏國偉,王德文;5-羥色胺對正常和受照射成纖維細胞生長的影響[J];輻射研究與輻射工藝學報;1998年03期

相關會議論文 前10條

1 李繼坤;薛小平;楊秀竹;李東華;張艷萍;郭世鐸;;中藥調(diào)控成纖維細胞活性的實驗研究[A];第七屆全國中西醫(yī)結合普通外科臨床及基礎研究學術會議論文匯編[C];2001年

2 劉定志;肖衡;杜成友;羅詩樵;;腫瘤上清液激活成纖維細胞后對血管內(nèi)皮生長因子-A表達影響[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

3 張海波;胡甜甜;吳金鵬;呂恒勇;;針灸對成纖維細胞的調(diào)節(jié)作用研究進展[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第三十三屆學術年會論文集[C];2013年

4 李亞東;牛建昭;田如玉;李銀生;張會存;解克芳;王繼峰;;人循環(huán)成纖維細胞的分離和鑒定[A];第八屆全國中西醫(yī)結合實驗醫(yī)學研討會論文匯編[C];2006年

5 陳若澤;甘小敏;梁瑩;唐德思;莫肖敏;;成纖維細胞形態(tài)學變化的電鏡觀察[A];第五次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1988年

6 劉杰峰;趙超莉;龍忠恒;許幼文;謝挺;;抑瘢檫劑對成纖維細胞的生物學的作用[A];第八屆全國燒傷外科學年會論文匯編[C];2007年

7 聶倩倩;文歡;姜支農(nóng);鄧紅;;原代結直腸癌相關成纖維細胞特征分析[A];2015年浙江省醫(yī)學會病理學術年會論文匯編[C];2015年

8 楊慶;王興桂;李程;劉峰;陳波;;基本機械力學刺激對腧穴筋膜成纖維細胞力感受器分子整合素α1、α3亞基表達影響研究[A];中國針灸學會經(jīng)絡分會第十二屆全國針灸經(jīng)絡學術研討會論文集[C];2012年

9 辛國華;羅旭;張友來;萬子楊;曾元臨;;改良五黃油對成纖維細胞生長增殖的影響[A];中華醫(yī)學會燒傷外科學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

10 程飚;劉宏偉;付小兵;盛志勇;張萍;孟晉紅;;S100蛋白參與介導bFGF對熱損傷誘導凋亡成纖維細胞中的生物學作用[A];中華醫(yī)學會第十二次全國皮膚性病學術會議論文集[C];2006年

相關重要報紙文章 前10條

1 首席記者 劉志勇 通訊員 劉文琴 林偉吟;精準干預成纖維細胞能抑制腫瘤[N];健康報;2018年

2 記者 劉海英;英發(fā)現(xiàn)成纖維細胞具有不同類型[N];科技日報;2013年

3 劉霞;美成功將成纖維細胞直接變?yōu)樾募〖毎鸞N];科技日報;2010年

4 記者 譚嘉 通訊員 肖鑫 王澤鋒;成纖維細胞向干細胞分化途徑找到[N];健康報;2013年

5 記者 白毅;人類成纖維細胞向視網(wǎng)膜色素上皮細胞定向轉分化首獲成功[N];中國醫(yī)藥報;2013年

6 記者 劉霞;物理特性被證實可助推細胞“返老還童”[N];科技日報;2013年

7 本報記者 王婷婷;李善剛：兩例克隆兔,一顆平常心[N];科技日報;2007年

8 暨南大學醫(yī)藥生物技術研究開發(fā)中心 李校X 姚成燦;bFGF肌膚“裝修”揭秘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

9 本報記者 孟剛;幫你認識高機能水[N];中國消費者報;2009年

10 編譯 李勇;微環(huán)境可作為抗癌藥研發(fā)新靶點[N];中國醫(yī)藥報;2013年

相關博士學位論文 前10條

1 薛成;β-欖香烯抑制人原代氣道肉芽成纖維細胞生長的相關機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2018年

2 李自良;PDGF-BB因子誘導口腔黏膜成纖維細胞活化的作用及機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

3 曹黎;Ang-(1-7)通過抑制NCX1/Ca~(2+)/CaMKII通路拮抗AngⅡ誘導的成纖維細胞表型轉化的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

4 李文倩;卵巢癌中腫瘤相關成纖維細胞分泌外泌體中的TGFβ1促進腫瘤細胞上皮間質(zhì)轉化過程的研究[D];華中科技大學;2018年

5 吳曉東;成纖維細胞CD147分子重編程腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)乳腺癌進展的功能研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學;2018年

6 李文佼;羊膜成纖維細胞表達的血清淀粉樣蛋白A1調(diào)控促炎性基因表達的研究[D];上海交通大學;2017年

7 巴鵬飛;低濃度姜黃素對舌麟癌相關成纖維細胞表型及功能特征和促癌活性的影響[D];山東大學;2018年

8 馮鵬飛;擴張性角膜疾病的力學生物學研究[D];太原理工大學;2016年

9 盧旭華;頸椎間盤纖維環(huán)成纖維細胞成骨潛能的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2004年

10 湯成春;心室成纖維細胞向心肌樣細胞轉化用于心肌重建的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 王嵐;Cbfa1在氟誘導成纖維細胞成骨中的作用機制探討[D];吉林大學;2019年

2 趙啟泰;食管鱗癌相關的成纖維細胞通過分泌外泌體促進單核型髓源性抑制性細胞形成的機制研究[D];鄭州大學;2019年

3 薛嘉;雷帕霉素誘導牛成纖維細胞發(fā)生自噬改善細胞老化狀態(tài)的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2019年

4 唐雪梅;PRMT1介導的細胞外基質(zhì)沉積及維生素D_3的緩解機制研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2019年

5 陳蘭;miR-146a對甲狀腺相關眼病眼眶成纖維細胞的調(diào)控作用[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

6 胡桓;iRGD外泌體抑制成纖維細胞體外增殖的研究[D];上海交通大學;2017年

7 魏俊超;基底硬度對角膜成纖維細胞行為的影響[D];太原理工大學;2019年

8 朱喜忠;Scleraxis慢病毒載體介導hAMSCs向韌帶成纖維細胞分化的體外研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

9 李揚;中華田園犬耳緣成纖維細胞系的建立與生物學特性的研究[D];延邊大學;2018年

10 耿玉聰;Ac-SDKP通過α-TAT1調(diào)節(jié)成纖維細胞轉分化和凋亡的作用及其機制[D];華北理工大學;2018年

本文編號：2757574