【摘要】：研究背景痛風性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis,GA)是一種常見病,常常是因為嘌呤代謝紊亂或者有尿酸排泄不良引起的以血尿酸增多為特征的一種急性非感染性炎性反應。發(fā)病人群以中老年男性患者居多,年齡越大,患病率也就越高,男性患者數(shù)量多于女性。痛風性關(guān)節(jié)炎以急性起病為特征,初次發(fā)作多數(shù)人在第一跖趾關(guān)節(jié)出現(xiàn)炎性癥狀,一天之內(nèi)紅腫熱痛功能障礙等炎癥反應可達到高峰,但一般在發(fā)作1-2周后自行緩解,痛風性關(guān)節(jié)炎如果長期反反復復發(fā)作,有可能導致關(guān)節(jié)畸形、腎功能衰竭、腎結(jié)石等相關(guān)疾病,使患者生活質(zhì)量大幅下降。最近幾十年,痛風性疾病在我過的發(fā)病率越來越高,并且患者的年齡也有年輕化的趨勢。IL-33(interleukin-33),是近些年發(fā)現(xiàn)的一種細胞因子,屬于IL-1細胞因子超家族,因為結(jié)構(gòu)酷似IL-18而被發(fā)現(xiàn)。IL-33的受體為ST2(ILIRL1),IL-33與ST2結(jié)合之后,相互作用,可招募下游的信號分子,例如MyD88,然后激活NF-kB、MAPK信號通路,從而激活胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2和p38絲裂原活化蛋白激酶,使得2型細胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13的分泌增加,從而誘發(fā)Th2型免疫應答。前期的研究發(fā)現(xiàn),在痛風患者的外周血和關(guān)節(jié)中,IL-33表達水平明顯增加,并且在痛風模型小鼠的相關(guān)實驗中也證實了IL-33有助于緩解MSU導致的痛風發(fā)作,但是具體的緩解機制尚不清楚。隨后我們通過進一步的研究發(fā)現(xiàn),IL-33參與了痛風患者的脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié),并起到了保護腎功能的作用。有文獻報道,替代性活化巨噬細胞(alternatively activated macrophage,AAMs or M2)與脂質(zhì)代謝有密切關(guān)系,并且還參與痛風自發(fā)緩解。我們推測IL-33可能通過誘導AAM分化參與痛風的緩解。研究目的明確IL-33是否通過誘導AAM參與痛風緩解。研究方法1.通過體外用小鼠骨髓細胞誘導巨噬細胞分化而得到小鼠巨噬細胞后,分別用予以IL-4、IL-13和IL-33細胞因子單獨處理或和IL4+IL-33或IL-13+IL-33聯(lián)合處理48小時后,流式細胞術(shù)觀察AAM細胞的數(shù)量。2.利用C57BL/6小鼠為模型,分別腹腔內(nèi)注射IL-33或者PBS,連續(xù)注射兩天,第三天處死小鼠,流式檢測小鼠腹腔灌洗液細胞,觀察AAM細胞的變化;ELISA檢測方法,測定模型鼠腹腔灌洗液中的細胞因子IL-4、IL-5以及IL-13水平的改變。3.以C57BL/6小鼠為模型,背部制作氣囊模型。在氣囊模型制成前提前三天起給實驗組小鼠腹腔內(nèi)注射IL-33,2ug/只,對照組腹腔注射等體積PBS,氣囊模型建成時再注射一次IL-33或PBS,隨后向小鼠氣囊內(nèi)注射MSU,3mg/只,建立小鼠急性痛風模型。在注射MSU后16小時處死小鼠,收集小鼠氣囊及腹腔灌洗液,流式檢測灌洗液中AAM、中性粒細胞,觀察實驗組與對照組的差異。實驗結(jié)果1.IL-33在體外與IL-4和IL-13起協(xié)同作用,間接促進巨噬細胞向AAM的分化。2.小鼠腹腔注射IL-33細胞因子可誘導腹腔灌洗液中F4/80和CD206雙陽性的AAM細胞數(shù)量增加。3.痛風氣囊模型小鼠腹腔注射IL-33細胞因子可以誘導氣囊和腹腔灌洗液中F4/80和CD206雙陽性AAM細胞增加,同時抑制MSU誘導的中性粒細胞浸潤。結(jié)論外源性IL-33可誘導巨噬細胞分化為AAM細胞,可能通過誘導AAM數(shù)量細胞增加而緩解痛風性炎癥反應。
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.7
【圖文】：

第三章實驗結(jié)果逡逑尿酸鹽的制備及內(nèi)毒素檢測逡逑尿酸鹽的制備逡逑定量的尿酸后加入ｄｄＨ２０，制成懸濁液，然后加入ＮａＯＨ，微波，幫助尿酸溶解并與氫氧化鈉發(fā)生反應，隨后將反應后的溶液濾器過濾除菌后，加入無菌的ＮａＣＩ溶液，調(diào)整尿酸鹽溶液的ＰＨ以析出，此時溶液中出現(xiàn)白色絮狀的尿酸鹽。之后通過離心的方的尿酸鹽沉淀在離心管底部，棄去上清液后，用無水乙醇洗滌超凈臺內(nèi)風Ｔ、粉碎成粉末狀后分裝保存于－２０°Ｃ冰箱內(nèi)。取少偏振光顯微鏡下可以觀察到針狀的結(jié)晶，如圖３．１．１所示。逡逑

逑ＰＢＳ組ＡＡＭ細胞百分比。此外，結(jié)合ＡＡＭ細胞百分比以及腹腔灌洗液細胞逡逑計數(shù)的總數(shù)，可以計算出兩組數(shù)據(jù)中ＡＡＭ的細胞總數(shù)。結(jié)果如圖３．３．２．２所示，逡逑ＩＬ－３３組的ＡＡＭ細胞數(shù)顯著高于ＰＢＳ組，Ｐ＜０．０１具有統(tǒng)計學意義。逡逑Ａ邋ＰＢＳ邐ＩＬ－３３逡逑１邐ｉ逡逑；２．４８邐a麇澹卞危玻叮稿危矗叮插澹赍義希翦澹礤澹椋擼擼矗蓿�？邋＾辶x希麇文獺㈠危徨危橐唬誨五危危掊義希蹂澹矗罰甦玨濉常保卞危輳玻卞錦lＶ邋：暴９．７逡逑．．．．．．４邋二，ｄ邐ｊ逡逑＿邐——＾邋Ｆ４／８０逡逑圖３．２．１．１流式細胞術(shù)分析小鼠腹腔細胞ＣＤ２０６和Ｆ４／８０雙陽性細胞代表ＡＡＭ逡逑細胞逡逑Ｆｉｇ３．２．１．１：Ｔｏ邋ｃｏｎｆｒｍ邋ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＩＬ－３３邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ＡＡＭ

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2735795