【摘要】：目的:探究ω-3 PUFA對(duì)高脂小鼠腸道菌群晝夜節(jié)律的干預(yù)作用。方法:雄性C57BL/6小鼠飼喂高脂膳食12周,實(shí)驗(yàn)分為四組(每組20只動(dòng)物):正常組(CON組);高脂組(HFD組);魚油組(FO組,在高脂飼料基礎(chǔ)上添加魚油);藻油組(AO組,在高脂飼料基礎(chǔ)上添加藻油)。處死小鼠時(shí)分2個(gè)時(shí)間點(diǎn),每組按間隔12小時(shí),隨機(jī)分為早(ZT0)、晚(ZT12)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)組(各10只)。采集血漿、盲腸和結(jié)腸內(nèi)容物,收集肝臟、結(jié)腸、腎周脂肪和附睪脂肪。參照試劑盒方法測(cè)定血漿TC、TG、LDL-C、HDL-C血脂含量,檢測(cè)血漿ALT、AST活力。肝組織HE染色組織學(xué)觀察。提取盲腸內(nèi)容物基因組DNA,進(jìn)行16S r RNA基因測(cè)序,比較各組在相同時(shí)間點(diǎn)(ZT0或ZT12)或同組在ZT0和ZT12間菌群的變化。通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)快速定量分析結(jié)腸內(nèi)容物菌群代謝物短鏈脂肪酸(SCFAs)含量。RT-qPCR檢測(cè)結(jié)腸組織中SCFAs受體GPR41、GPR43基因表達(dá)變化,腸組織促炎細(xì)胞因子IL-1β,TNF-α和IL-6表達(dá)變化,通透性指標(biāo)occludin、claudin-1和zo-1的表達(dá)。結(jié)果:HFD組相較于CON組,生理指標(biāo)均顯著增加。富含ω-3 PUFA的FO組和AO組顯著降低肝指數(shù)。HFD組與CON組相比,血漿中血脂含量呈相反變化。與HFD組相比,FO組TC、TG、LDL-C、ALT和AST顯著下降;AO組TC、LDL-C、ALT和AST顯著下降,HDL-C含量顯著增加。FO、AO組顯著改善了HFD誘導(dǎo)的肝脂肪變性,肝細(xì)胞脂滴明顯減少,脂滴稀疏。正常小鼠腸道菌群豐度和多樣性等呈現(xiàn)明顯的早(ZT0)高-晚(ZT12)低的晝夜節(jié)律,高脂小鼠腸道菌群紊亂,菌群晝夜振蕩喪失,早晚顯著差異的菌屬數(shù)量減少,有益菌屬在晚上時(shí)與CON組相比豐度均降低,有害菌屬無(wú)論早晚與CON相比豐度均升高。魚油和藻油對(duì)高脂小鼠的菌群豐度和多樣性無(wú)顯著影響,但能增加有益菌的數(shù)量和豐度,并且可以改善高脂小鼠腸道菌群節(jié)律紊亂:(1)FO和AO組早晚差異顯著的菌屬數(shù)量多于HFD組;(2)增加早上產(chǎn)糞甾醇真細(xì)菌(Eubacterium coprostanoligenes)相對(duì)豐度;(3)AO組早上乳酸桿菌屬(Lactobacillus)相對(duì)豐度增加,晚上顫桿菌克屬(Oscillibacter)相對(duì)豐度增加;(4)FO和AO組中產(chǎn)SCFAs的Butyricimonas、毛螺菌科(Lachnospiraceae)中的部分屬恢復(fù)至正常晝夜節(jié)律;(5)FO組促炎菌鏈球菌屬(Streptococcus)、促炎菌丹毒桿菌(Erysipelatoclostridium)、薩特氏菌屬(Sutterella)恢復(fù)至正常晝夜節(jié)律;(6)AO組中產(chǎn)SCFAs的羅斯氏菌屬(Roseburia)恢復(fù)至正常晝夜節(jié)律。高脂飲食小鼠腸道內(nèi)短鏈脂肪酸含量最低,FO和AO組中含量有所增加,并激活GPR41和GPR43,晝夜趨勢(shì)恢復(fù)至正常狀態(tài),這可能是產(chǎn)SCFAs的Butyricimonas在ω-3 PUFA干預(yù)組中早上含量高于晚上含量所引起。富含ω-3 PUFA的FO組和AO組與HFD組相比,顯著降低結(jié)腸組織促炎因子表達(dá),顯著增加通透性指標(biāo)表達(dá)。HFD組中緊密連接蛋白claudin-1和occludin在結(jié)腸中不存在晝夜節(jié)律性表達(dá),而AO組能部分恢復(fù)緊密粘連蛋白的節(jié)律。結(jié)論:富含DHA/EPA的魚油和富含DHA的藻油可以緩解高脂飲食導(dǎo)致的脂代謝紊亂,增加腸道中有益菌的數(shù)量和豐度,增加有晝夜節(jié)律變化的菌屬數(shù)量,恢復(fù)菌屬的晝夜節(jié)律至正常狀態(tài),改善腸道菌代謝物SCFAs和腸道通透性的晝夜節(jié)律。
【圖文】：

小鼠生理指標(biāo)Fig2.1Theresultofmicephysiologicalindex

肝臟HE染色（400x）
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R593.2

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本文編號(hào)：2691103