【摘要】：實驗背景和目的:骨質疏松癥(osteoporosis,OP)是全世界最為常見的系統(tǒng)性疾病之一,而且骨質疏松骨缺損的修復也一直是困擾口腔醫(yī)生的難題。對于骨質疏松癥的治療,常見的全身藥物治療治療效果較慢,并且還有許多的藥物副作用。所以在全身治療的方法之外,如何通過局部治療來促進骨質疏松患者牙槽骨缺損的恢復已經成為如今的研究熱點。骨髓間充質干細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)作為現(xiàn)今骨組織工程常用的種子細胞,已經證實對骨缺損具有促進愈合作用;而酪蛋白激酶2-相互作用蛋白1(Casein kinase 2-interacting protein-1,CKIP-1)是新近發(fā)現(xiàn)的負調控骨形成的重要因子。本實驗將探究CKIP-1在骨質疏松大鼠和正常大鼠牙槽骨的表達差異,以及CKIP-1修飾的BMSCs對骨質疏松大鼠牙槽骨缺損的修復作用。實驗方法:(1)OP模型建立與驗證:20只10周齡雌性SD大鼠隨機分為兩組,OP組:以70mg/(kg·d)的維甲酸連續(xù)灌胃21天;正常組:以同體積雙蒸水連續(xù)灌胃21天;停止灌胃第1天和30天分別對大鼠進行麻醉后骨密度檢測;停止灌胃30天后處死所有大鼠,取股骨進行HE染色驗證OP模型,上頜骨進行免疫組化染色觀察兩組大鼠體內CKIP-1的表達差異。(2)CKIP-1基因修飾的BMSCs的培養(yǎng)鑒定:1只1周齡SD乳鼠處死,分離培養(yǎng)BMSCs。再對所培養(yǎng)的細胞進行增殖能力、成骨能力、成脂能力和免疫表型流式鑒定。通過慢病毒轉染的方法修飾BMSCs內CKIP-1的表達,RT-PCR鑒定CKIP-1的表達是否降低。(3)體內骨缺損修復實驗:44只SD大鼠隨機分為4組,1)OP+BMSCs/CKIP-1組:22只骨質疏松大鼠右側骨缺損內植入慢病毒轉染沉默CKIP-1的BMSCs與明膠海綿的復合體;2)OP+BMSCs組:22只骨質疏松大鼠左側骨缺損植入空載體轉染的BMSCs與明膠海綿的復合體:3)OP組:另外11只骨質疏松大鼠雙側骨缺損內植入明膠海綿;4)對照組:11只正常大鼠雙側植入明膠海綿。術后恢復30天后處死所有大鼠,取上頜骨分別進行HE染色組織學評分和新生骨面積百分比計算骨缺損恢復情況,PCR檢測各組CKIP-1、ALP、OCN的mRNA相對表達量,免疫組化染色觀察ALP、OCN的陽性表達情況。實驗結果:(1)維甲酸灌胃致骨質疏松模型成功建立,停止灌胃30天后模型依然成立;OP組CKIP-1的mRNA表達量比對照組高。(2)BMSCs培養(yǎng)鑒定成功,并且通過慢病毒轉染的方式沉默細胞CKIP-1的表達。(3)術后30天,OP+BMSCs/CKIP-1組骨缺損恢復情況與正常組相近,比OP+BMSCs組和OP組都好,成功促進骨質疏松骨缺損的愈合;PCR和免疫組化證明OP+BMSCs/CKIP-1組成骨相關的基因蛋白表達更多,成骨效能更高。結論:骨質疏松大鼠牙槽骨部位CKIP-1表達量較正常大鼠更多。CKIP-1轉染后的BMSCs局部移植對骨質疏松大鼠牙槽骨缺損具有促進修復的作用,并且比單純的BMSCs修復作用更佳,CKIP-1在其中發(fā)揮重要作用。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R580;R78

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7 何o，

本文編號：2662873