【摘要】：國際糖尿病聯(lián)盟數(shù)據(jù)顯示,目前世界上有4.25億糖尿病患者,預(yù)計到2045年這個數(shù)值將上升到6.29億,其中中國患者占1.14億。Ⅱ型糖尿病占糖尿病總數(shù)的90%左右。Ⅱ型糖尿病的兩個主要致病因素是胰島素抵抗和后期胰島β細(xì)胞衰竭。B族維生素在治療Ⅱ型糖尿病及其并發(fā)癥都有改善,但其治療機制尚不清楚。本文構(gòu)建RIN-葡萄糖依賴性腸促胰島素受體(GIPR)細(xì)胞模型,用于檢測B族維生素對GIPR激活引起細(xì)胞中GIPR內(nèi)吞,并利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和western blot檢測B族維生素評價胰島β細(xì)胞自噬。研究結(jié)果如下:1.將質(zhì)粒pCMV6-AC-GIPR/GFP轉(zhuǎn)染至RIN-m5F細(xì)胞中,通過G418的篩選獲得單克隆細(xì)胞株,該細(xì)胞通過多次傳代都能穩(wěn)定遺傳。在熒光顯微鏡下可以看到綠色熒光分布均勻。用(D-Ala~2)GIP作用20min時細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)熒光斑點,表明GIPR激動劑類藥物的篩選模型構(gòu)建成功。將該模型應(yīng)用于評價B族維生素,結(jié)果顯示在B族維生素(1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)作用于細(xì)胞后,都沒有出現(xiàn)熒光斑點激活模型,而用(D-Ala~2)GIP作用于細(xì)胞在20min和40min都出現(xiàn)了熒光斑點。表明B族維生素沒有激活GIP受體引起細(xì)胞內(nèi)吞。2將B族維生素(每種設(shè)4個濃度梯度)處理后,通過細(xì)胞免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)VitaminB1作用下的細(xì)胞自噬體沒有增加,而在VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12作用下細(xì)胞自噬點明顯增加。用western blot檢測自噬相關(guān)蛋白,發(fā)現(xiàn)VitaminB2、VitaminB3、VitaminB5、VitaminB6、VitaminB7、VitaminB9、VitaminB12處理后的RIN-m5F細(xì)胞,其LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值上調(diào),P62蛋白水平下降,AMPK磷酸化水平上升,mTOR磷酸化不變,說明這7種維生素都是通過AMPK途徑誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞自噬。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 李敬華;張紅;候雯莉;;腸促胰島素生理作用及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

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本文編號：2660084