【摘要】：目的:初步探討linc00619在人肺上皮細(xì)胞中的作用及其調(diào)節(jié)機理,從而為過敏性哮喘的治療提供潛在的靶點。方法:運用生物信息學(xué)方法對公共數(shù)據(jù)集GSE8190(塵螨(HDM)誘導(dǎo)的人氣道上皮細(xì)胞表達(dá)譜數(shù)據(jù)集)進行數(shù)據(jù)挖掘;利用CY3標(biāo)記的探針采用RNA-FISH方法對linc00619在人肺上皮細(xì)胞(BEAS-2B)進行亞細(xì)胞定位;采用CRISPR/Cas9方法構(gòu)建linc00619的dgRNA慢病毒載體并測序確認(rèn),利用linc00619的dgRNA慢病毒載體瞬時轉(zhuǎn)染BEAS-2B細(xì)胞,嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株后,分析linc00619敲除對BEAS-2B細(xì)胞的細(xì)胞增殖和遷移能力的影響;Western blot分析AKT、MEK以及ERK等增殖相關(guān)信號分子;lncRNA芯片檢測linc00619敲除后差異表達(dá)的lncRNAs和mRNAs,對差異表達(dá)的mRNAs進行GO和KEGG富集分析;同時預(yù)測linc00619的順式(cis)和反式(trans)調(diào)控的靶基因并進行GO和KEGG富集分析。結(jié)果:linc00619在HDM誘導(dǎo)的上皮細(xì)胞中顯著高表達(dá)(4倍);linc00619定位于細(xì)胞質(zhì);linc00619的dgRNA慢病毒載體瞬時轉(zhuǎn)染BEAS-2B細(xì)胞,嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株后,PCR檢測及測序結(jié)果表明,成功獲得了linc00619的dgRNA突變株。細(xì)胞增殖試驗及Transwell檢測結(jié)果表明,linc00619敲除促進了細(xì)胞的增殖和遷移能力;WB檢測結(jié)果表明,linc00619敲除抑制了p-AKT/AKT、p-MEK/MEK的表達(dá)并促進了p-ERK/ERK的表達(dá)。對芯片檢測的linc00619敲除后顯著差異表達(dá)的mRNAs進行GO和KEGG富集分析結(jié)果表明,linc00619通過多個生物進程和多個信號通路參與了BEAS-2B的生物學(xué)功能。該現(xiàn)象在linc00619順式和反式調(diào)控的靶基因中也存在。結(jié)論:1.linc00619位于細(xì)胞質(zhì);2.linc00619抑制了肺上皮細(xì)胞的增殖和遷移;3.linc00619通過多個生物進程和多個信號通路參與了過敏性哮喘的發(fā)生發(fā)展;
【圖文】：

為了分析linc00619在各組織中的表達(dá)情況，我們用UCSC網(wǎng)站進行了分析，結(jié)果表明：linc00619在各個組織中都有所表達(dá)，且其在轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高（圖1），由此我們推測linc00619可能參與了過敏性哮喘發(fā)生發(fā)展進程中發(fā)揮了重要的作用。圖 1：linc00619 在各組織的表達(dá)Figure 1: Expression of linc00619 in various organizations為了分析linc00619的潛在功能，我們預(yù)測了它的靶基因，并通過DAVID

（https://www.david.ncifcrf.gov/tools.jsp）在線數(shù)據(jù)庫對靶基因進行了KEGG信號通路富集分析。結(jié)果表明，抗原加工與提呈信號通路（Antigen processing and presentation，，圖2）顯著被富集，說明linc00619可能通過該信號調(diào)控了人肺上皮細(xì)胞的功能，從而影響了過敏性哮喘的發(fā)病機制。圖 2：抗原加工與提呈信號通路Figure 2: Antigen processing and presentation signaling pathways
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R562.25

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