【摘要】：目的:觀察二甲雙胍對人成熟脂肪細(xì)胞中囊泡相關(guān)可溶性N-乙酰基亞胺敏感因子附著蛋白受體(vescical-souble N-ethymaleimide sensitive factor attachment proteins receptor,v-SNAREs)家族成員VAMP2、3、4、5、7、8表達(dá)的影響。方法:1.選擇擇期開腹手術(shù)病人,術(shù)中無菌條件切取腹部大網(wǎng)膜脂肪組織,采用膠原酶消化法分離前脂肪細(xì)胞。于37℃、5%CO2條件下DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基中培養(yǎng),并誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞,用油紅O染色鑒定證實(shí)。2.予不同濃度二甲雙胍(0m M,1m M,10m M)干預(yù)成熟脂肪細(xì)胞24h后,運(yùn)用實(shí)時熒光相對定量PCR技術(shù)檢測細(xì)胞VAMP2、3、4、5、7、8m RNA的表達(dá)水平。3.使用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,樣本間均數(shù)比較采用配對樣本T檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)果:1.成功進(jìn)行了人前脂肪細(xì)胞的原代培養(yǎng),并誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞。2.RT-PCR結(jié)果:與對照組(0m M二甲雙胍)相比,1m M二甲雙胍上調(diào)脂肪細(xì)胞VAMP4、5、8水平(分別P0.05,P0.05,P0.05,),下調(diào)VAMP3、7水平(分別P0.05,P0.01),VAMP2表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與對照組相比10m M二甲雙胍上調(diào)脂肪細(xì)胞VAMP4、5、8水平(分別P0.01,P0.01,P0.01),下調(diào)VAMP7水平(P0.01),VAMP2、3表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;10m M二甲雙胍干預(yù)組與1m M組比較,VAMP3、4、5、8表達(dá)水平升高(P0.05,P0.05,P0.05,P0.01),VAMP2、7表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.使用膠原酶消化法分離并原代培養(yǎng)了人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞,并成功的誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞,驗(yàn)證了本實(shí)驗(yàn)室建立的前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)方法的可行性和實(shí)用性。2.二甲雙胍可上調(diào)VAMP4、5、8的表達(dá),可下調(diào)VAMP3、7的表達(dá),且具有一定的劑量依賴效應(yīng),對VAMP2的表達(dá)無影響,顯示二甲雙胍可能通過對v-SNAREs家族表達(dá)的調(diào)節(jié)而參與對脂肪細(xì)胞GLUT4轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)加深了對二甲雙胍改善胰島素抵抗機(jī)制的理解,為進(jìn)一步研究二甲雙胍的降糖機(jī)制提供了線索。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of metformin on the expression of VAMP2,3,4,5,7,8 of vesicular associated soluble N-acetylimide receptor (vescical-souble N-ethymaleimide sensitive factor attachment proteins receptor,v-SNAREs) family in human mature adipocytes. Methods: 1. The abdominal omentum adipose tissue was removed under aseptic condition and the preadipocytes were separated by collagenase digestion. It was cultured in DMEM/F12 (1:1) medium at 37 鈩，

本文編號：2299121