【摘要】：目的:探討鈣、鎂、銅、鋅、維生素D和大豆干預燃煤型氟中毒對雌鼠卵巢生殖功能影響及其干預可能機制。方法:1.采用自由食用添加鈣、鎂、銅、鋅、維生素D和大豆不同配方的織金病區(qū)原煤加拌泥煤烘烤的玉米飼料構建動物模型;2.動態(tài)觀察雌鼠染氟期間牙齒的變化情況;3.采用離子選擇電極法、高溫灰化-氟離子選擇電極法測定雌鼠尿氟、骨氟含量;4.分離卵巢:①稱重,計算卵巢的臟器系數。②電鏡下觀察卵泡組織超微結構及顆粒細胞凋亡情況。③用免疫組化法觀察卵巢顆粒細胞凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的表達。④HE染色光鏡下觀察卵巢組織形態(tài)、各級卵泡及黃體的數量變化。5.于不同時間段(60d、120d、180d)的動情期處死雌鼠,采用股動脈取血法收集雌鼠血液,分離血清,采用放射免疫法檢測血清中雌二醇(E2)含量;結果:1.成功復制染氟組和干預組動物模型;2.隨著染氟時間的延長,雌鼠氟斑牙癥狀逐漸加重,干預組出現輕度氟斑牙,且多種元素+大豆干預組氟斑牙的發(fā)生較多種元素干預組輕;3.染氟時間相同的組別(60、120、180d):染氟組雌鼠尿氟、骨氟含量均高于對照組,有統(tǒng)計學意義(P0.05),且染氟組、兩干預組雌鼠的尿氟逐漸增加,且后者明顯高于前者,均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與染氟組比較,兩干預組雌鼠的骨氟逐漸降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05);各組內比較:隨著時間的延長,尿氟含量均逐漸增加,各組尿氟含量間均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。染氟組骨氟含量逐漸增加均有統(tǒng)計學意義(P0.05);兩干預組骨氟含量均逐漸降低,多種元素干預組僅60d、120d骨氟含量與180d有統(tǒng)計學意義(P0.05),多種元素+大豆干預組骨氟含量均有統(tǒng)計學意義(P0.05);4.染氟組卵泡組織超微結構出現顆粒細胞、基質細胞凋亡;兩干預組在早期仍可見較明顯的超微結構損害,隨干預時間延長,與染氟組比較,兩干預組雌鼠卵巢顆粒細胞和基質細胞超微結構均基本正常,未見凋亡樣改變。添加蛋白質干預表現為卵巢超微結構脂滴明顯少于多種元素干預組。5.卵巢顆粒細胞Bax蛋白表達量,染氟120d、180d染氟組明顯高于對照組、兩干預組,均有統(tǒng)計學意義(P0.05);多種元素+大豆干預組低于多種元素干預組,且180d兩干預組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。相同組別隨時間延長:卵巢顆粒細胞Bax蛋白表達量,染氟組、兩干預組均逐漸增多,染氟組內比較均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。多種元素干預組60d與180d有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6.染氟組隨時間延長,卵巢顆粒細胞從輕度、中度、到重度呈現漸進性水腫的變化,細胞結構和細胞輪廓變得模糊,閉鎖的卵泡和黃體退化逐漸增多,成熟卵泡偶見。兩干預組卵巢顆粒細胞少見輕度水腫,細胞結構和細胞輪廓趨于正常,正常的各級卵泡多見,閉鎖的卵泡和退化的黃體明顯低于染氟組;雌鼠閉鎖卵泡數量與染氟組相比,60d對照組、多種元素+大豆干預組有統(tǒng)計學意義(P0.05);120、180d對照組、兩干預組均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。7.染氟時間相同的組別(60、120、180d)雌鼠E2含量與對照組相比,60d各組逐漸增加有統(tǒng)計學意義(P0.05),多種元素+大豆干預組高于各組有統(tǒng)計學意義(P0.05)。120d、180d,染氟組均低于各組,與對照組、多種元素+大豆干預組比較,有統(tǒng)計學意義(P0.05),且180d兩干預組間比較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。相同組別隨時間延長,對照組雌鼠E2含量呈波動性變化,120d高于60d和180d,且與60d有統(tǒng)計學意義(P0.05)。染氟組E2的含量逐漸降低,且各組之間均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。多種元素干預組E2的含量逐漸降低,60d、120d與180d比較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。多種元素+大豆干預組E2的含量逐漸降低,60d與180d比較有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1.鈣、鎂、銅、鋅、維生素D可拮抗燃煤型氟中毒對卵巢生殖毒性;可拮抗高氟對血清雌激素E2的毒性作用,使卵巢分泌E2趨于正常水平;可拮抗氟中毒對卵泡生長發(fā)育的影響,使閉鎖卵泡數量降低;可拮抗對雌鼠卵巢組織超微結構的損傷,使卵巢顆粒細胞、基質細胞核、線粒體等超微結構趨于正常水平;可拮抗燃煤型氟中毒對卵巢顆粒細胞Bax促凋亡蛋白表達的影響,下調Bax的表達量,降低卵巢顆粒細胞凋亡。2.在鈣、鎂、銅、鋅、維生素D的基礎上添加蛋白質可部分增強對氟中毒的干預,僅表現卵巢超微結構脂滴明顯減少、凋亡蛋白Bax表達和閉鎖卵泡數量明顯降低,且隨干預時間延長,效果更佳。3.多種元素+大豆干預和多種元素干預作用對雌鼠的卵巢臟器系數,原始卵泡、初級卵泡、次級卵泡及黃體數量,卵泡組織形態(tài),凋亡蛋白Bcl-2沒有明顯影響。
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【學位授予單位】：貴陽醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R599.1

【參考文獻】

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本文編號：2276943