本文選題：miR-664-3p + Smad4��； 參考：《南京醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)是一種以骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增加以及易發(fā)生骨折為特征的常見的代謝性骨病。激活成骨細胞功能從而促進骨形成是治療骨質(zhì)疏松癥的策略之一。microRNAs(miRNAs)是在基因轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮調(diào)控作用的小分子非編碼RNA,幾乎參與了所有的生理病理過程。研究發(fā)現(xiàn)在骨質(zhì)疏松癥中一些miRNAs確實發(fā)生了異常表達,但它們是否控制成骨分化和骨骼形成以及是否可以成為骨質(zhì)疏松癥的治療靶點,仍值得深入研究。淫羊藿苷(Icariin,ICA)是具有促骨形成功效的淫羊藿的主要黃酮類活性物質(zhì)。在本研究中,我們通過高通量測序技術(shù)篩選了ICA處理組和未處理組之間差異表達的miRNAs,并通過Real-time PCR對部分差異miRNAs進行了驗證。根據(jù)靶基因和成骨分化相關(guān)信號通路的預測,從中挑選了下調(diào)倍數(shù)較大的miR-664-3p進行深入研究。Osterix(Osx)是成骨細胞分化中必不可少的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,Smad4是調(diào)節(jié)成骨細胞分化的重要信號通路BMP2通路的通用信號轉(zhuǎn)導分子。生物信息學分析提示:Smad4和Osx均是miR-664-3p的靶基因。熒光素酶報告基因?qū)嶒灪蚏eal-time PCR及Western blot檢測結(jié)果表明,Smad4和Osx確實是miR-664-3p的直接靶基因,且mi R-664-3p通過抑制靶基因的翻譯而下調(diào)靶基因的表達(Smad4和Osx的mRNA表達不受影響)。此外,通過成骨細胞分化標志物堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨鈣素(Osteocalcin,OC)、骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)和I型膠原(Collagen I,Colla1)的檢測以及ALP活性檢測和礦化結(jié)節(jié)形成等實驗,我們發(fā)現(xiàn)過表達miR-664-3p能抑制成骨細胞分化,而抑制mi R-664-3p的表達則能促進成骨細胞分化。Real-time PCR和ALP染色結(jié)果表明,過表達Smad4或Osx均能逆轉(zhuǎn)miR-664-3p的抑制成骨細胞分化作用。此外,我們檢測了成骨細胞分化過程中miR-664-3p的表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-664-3p的表達在成骨細胞分化過程中持續(xù)下調(diào)。隨后通過卵巢摘除術(shù),我們構(gòu)建了小鼠骨質(zhì)疏松模型,并對骨質(zhì)疏松模型小鼠進行ICA灌胃處理。結(jié)果表明,在骨質(zhì)疏松小鼠中miR-664-3p的表達明顯上調(diào),而ICA處理能減少骨量的丟失并改善骨小梁微結(jié)構(gòu)。生物信息學分析顯示,人源Smad4和Osx基因均為miR-664-3p的靶基因。且通過mimic轉(zhuǎn)染,我們發(fā)現(xiàn)人源miR-664-3p能顯著抑制人源Smad4和Osx的蛋白表達。鑒定與骨質(zhì)疏松癥相關(guān)的血清mi RNAs,并將其作為疾病診斷分子標志物,是開發(fā)新的診斷和治療方法的關(guān)鍵一步。通過檢測26例骨質(zhì)疏松病人和18例匹配對照(年齡、性別等相互匹配)血清中的miR-664-3p,初步發(fā)現(xiàn)骨質(zhì)疏松病人血清中的miR-664-3p表達顯著高于對照。總之,我們的研究結(jié)果首次證明:1.miR-664-3p參與ICA誘導的成骨細胞分化。2.miR-664-3p通過下調(diào)靶基因的表達而抑制成骨細胞分化,進而促進骨質(zhì)疏松發(fā)生;3.通過下調(diào)miR-664-3p進而上調(diào)Smad4和Osx的表達是ICA治療骨質(zhì)疏松的機制之一。4.miR-664-3p可以作為骨質(zhì)疏松癥診斷/輔助診斷的分子標志物,并有可能成為臨床上骨質(zhì)疏松治療和預后的新靶點。
[Abstract]:Osterix ( Osx ) is a key transcription factor which plays a role in the differentiation of osteoblasts . The expression of miR - 664 - p in serum of 26 patients with osteoporosis and 18 matched controls ( age , sex , etc . ) was significantly higher than that of control .
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R580

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本文編號：2111444