本文選題：晚期氧化蛋白 + RAGE受體��； 參考：《南方醫(yī)科大學》2015年博士論文

【摘要】：研究背景類風濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種全身性自身免疫病,表現(xiàn)為以雙手和腕關(guān)節(jié)等小關(guān)節(jié)受累為主的慢性、對稱性、持續(xù)性多關(guān)節(jié)炎。RA的病理表現(xiàn)為受累關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、繼而出現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞,最終可導致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。自身免疫性炎癥引起受累關(guān)節(jié)局部炎性因子蓄積,進而啟動受累關(guān)節(jié)的炎癥反應、導致關(guān)節(jié)組織的破壞,是RA發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。關(guān)節(jié)軟骨細胞是關(guān)節(jié)軟骨組織中唯一存在的細胞類型。研究表明RA受累關(guān)節(jié)中,炎癥因子誘導的關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡是關(guān)節(jié)軟骨破壞的始動因素,在RA的發(fā)病過程中起到了非常重要的作用。因此,深入研究RA發(fā)病過程中關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的分子機制,有利于進一步揭示RA的發(fā)病機制、開拓其防治的新途徑,是保護我國有限醫(yī)療資源、關(guān)系到社會經(jīng)濟發(fā)展的重要課題。細胞凋亡的啟動是細胞在感受到相應的信號刺激后,胞內(nèi)一系列控制開關(guān)的開啟或關(guān)閉。不同的外界因素啟動凋亡的方式不同,所引起的信號轉(zhuǎn)導也不相同。既往的研究證實:不同的細胞外凋亡誘發(fā)因子可通過誘導細胞活性氧生成增加、線粒體功能障礙及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激導致軟骨細胞的凋亡。但不同的誘因或不同的細胞系,其調(diào)控途徑并不完全相同。正常機體代謝會不斷產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)(Reactive oxygen species,ROS),主要包括超氧陰離子(O2-)、羥基自由基(-OH)和過氧化氫(H2O2)。機體的抗氧化系統(tǒng)能將多余的ROS轉(zhuǎn)化為對機體無害的物質(zhì),進而對其進行新陳代謝。過量的ROS生成會打破體內(nèi)氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)的平衡,導致氧化應激狀態(tài)的發(fā)生。研究表明氧化應激在RA的發(fā)病以及軟骨細胞的凋亡過程中起到了十分重要的作用。此外,氧化應激易引發(fā)蛋白質(zhì)的氧化損傷,導致體內(nèi)氧化損傷蛋白質(zhì)的蓄積。晚期氧化蛋白產(chǎn)物(Advanced oxidation protein products,AOPPs)是蛋白質(zhì)側(cè)鏈氨基酸遭受氧化損傷后的交聯(lián)物。既往研究表明,許多氧化應激相關(guān)疾病如類風濕性關(guān)節(jié)炎、尿毒癥、糖尿病、炎癥性腸病、肥胖癥等患者體內(nèi)的AOPPs水平明顯高于正常人,并與疾病嚴重程度相關(guān)。因此,AOPPs是氧化應激的重要標志物。AOPPs不僅是氧化應激的標志物,其本身能誘導機體產(chǎn)生ROS進而形成正反饋,使機體氧化應激狀態(tài)持續(xù)存在。既往研究和本課題組證實AOPPs作為一種新型的炎癥介質(zhì),本身可促進細胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)的生成導致氧化應激,在很多慢性炎性疾病的發(fā)展過程中起到了十分重要的作用。此外,AOPPs具有細胞毒性作用,可通過不同的細胞機制誘導多種不同類型細胞的凋亡。RA作為一種慢性炎性疾病,患者體內(nèi)普遍存在AOPPs的蓄積。本課題組的前期研究證實,AOPPs可誘導大鼠關(guān)節(jié)滑膜樣細胞產(chǎn)生炎癥應答,可能參與RA的發(fā)生發(fā)展。但是迄今為止,AOPPs對關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的影響及其機制尚不清楚。因此有理由假設,AOPPs作為一類內(nèi)源性致病介質(zhì),通過氧化還原相關(guān)的途徑促進關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡。本課題旨在闡明AOPPs對關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的作用及其分子機制,為RA的防治提供新的干預靶點。研究方法1、晚期氧化蛋白產(chǎn)物AOPPs的制備大鼠血清白蛋白(Rat serum albumin,RSA),溶于無內(nèi)毒素的PBS中配制成20mg/ml的溶液。將RSA溶液與40mmol/L的次氯酸鈉等體積混合(摩爾比為1:140),室溫放置30分鐘待其充分反應。將制備完成的AOPPs裝入透析袋中,隨后將透析袋放至不含內(nèi)毒素的PBS溶液中4℃透析24h,以去除未反應的次氯酸鈉。抽取透析完成的AOPPs溶液,用0.22μm的微孔濾膜過濾除菌。隨后用Detoxi-Gel內(nèi)毒素去除膠,過濾除去溶液中的內(nèi)毒素。用鱟試劑檢測制備完成的AOPPs溶液內(nèi)的內(nèi)毒素水平,內(nèi)毒素水平在0.025EU/ml以下的AOPPs溶液可用于后續(xù)實驗。將成功制備完成的AOPPs根據(jù)實驗需求分裝,放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?避免溶液反復凍融。用Elasia試劑盒檢測溶液中AOPPs的水平。2、大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)將4只3周齡的SD大鼠頸椎脫臼法處死后,在嚴格無菌的條件下,取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)及股骨頭處關(guān)節(jié)軟骨組織。隨后放入盛有含雙抗無菌PBS溶液的容器中,仔細清除附著的韌帶及骨組織,并用含雙抗的無菌PBS溶液反復沖洗三次以上。將沖洗干凈的關(guān)節(jié)軟骨組織轉(zhuǎn)移入5ml離心管中,加入1ml濃度為0.25%的胰蛋白酶溶液。使用經(jīng)高壓蒸汽消毒過的眼科剪將軟骨組織剪成細小碎塊,再加入3ml濃度為0.25%的胰蛋白酶溶液至離心管中。將離心管放入恒溫搖箱中,37℃下?lián)u晃消化20分鐘。隨后以2000的轉(zhuǎn)速離心后棄去上清液,再加入4ml濃度為0.2%的Ⅱ型膠原酶溶液,放入恒溫搖箱中,37℃下?lián)u晃消化1h。2000轉(zhuǎn)離心棄去上清液,加入細胞完全培養(yǎng)基,用一次性巴氏吸管反復吹吸軟骨組織塊懸液。將含有完全培養(yǎng)基的關(guān)節(jié)軟骨組織塊懸液,均勻地涂抹在培養(yǎng)瓶內(nèi),使得軟骨組織塊均勻分布于培養(yǎng)瓶內(nèi)。直立培養(yǎng)瓶,向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入3～4ml完全培養(yǎng)基,翻轉(zhuǎn)放置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。24小時后將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)過來,使完全培養(yǎng)基完全浸沒軟骨組織塊,繼續(xù)放在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。3天后顯微鏡下觀察軟骨組織塊生長情況,并更換完全培養(yǎng)基。以后每隔2天換液一次,待組織塊中原代關(guān)節(jié)軟骨細胞爬出。一般3天左右即有細胞爬出,1周左右時可傳代培養(yǎng)。根據(jù)實驗需要,將原代關(guān)節(jié)軟骨細胞按1:3的比例,接種至細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中(此為第一代細胞)進行后續(xù)實驗。本實驗采用免疫組化和阿利新藍染色法對第一代關(guān)節(jié)軟骨細胞進行鑒定,發(fā)現(xiàn)此方法培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細胞具有很高的純度并且表型維持良好。因此我們?nèi)〉谝淮募毎?用于后續(xù)一系列實驗。3、AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡將關(guān)節(jié)軟骨細胞接種于六孔板中,待細胞生長至90%左右融合時加入AOPPs刺激。實驗前更換不含血清的DMEM,饑餓細胞12小時。用25、50、100、2000μg/ml濃度的AOPPs,200μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基作為對照,刺激細胞24小時。用AnnexinV-FITC/PI雙熒光標記流式細胞術(shù)及Cell Death Detection ELISA plus試劑盒,檢測AOPPs對關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的的作用。AnnexinV-FITC/PI原理:早期凋亡的細胞可被AnnexinV-FITC標記顯示綠色熒光,流式細胞儀凋亡圖中顯示在Q2象限。晚期凋亡的細胞可被Annexin V-FITC及PI兩種熒光同時標記顯示紅綠兩種熒光,流式細胞儀凋亡圖中顯示在Q4象限。Cell Death Detection ELISA plus試劑盒原理:試劑盒中含特異性抗體,可與細胞凋亡時釋放至細胞質(zhì)中的組蛋白相關(guān)的DNA碎裂片段結(jié)合。經(jīng)顯色反應后用酶標儀檢測,用OD值反映其濃度。將2×104個軟骨細胞接種于35mm激光共聚焦培養(yǎng)皿中。隨后用200μg/ml的AOPPs、200μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基作為對照,刺激細胞24小時。AnnexinV-FITC/PI雙熒光標記細胞后,共聚焦顯微鏡下觀察不同組間細胞凋亡情況。4、AOPPs激活關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)NADPH氧化酶系統(tǒng)及相關(guān)受體途徑將關(guān)節(jié)軟骨細胞接種于6cm培養(yǎng)皿中,待細胞生長至90%左右融合時加入AOPPs刺激。實驗前更換不含血清的DMEM,饑餓細胞12小時。用100μg/ml濃度的AOPPs分別刺激細胞6、12、24及48小時,100μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞48小時作為對照。用Western blot法檢測不同處理組間NADPH氧化酶亞基p22phox、p47phox、Nox2及Nox4的表達情況。用l00μg/ml濃度的AOPPs分別刺激細胞5、15、30及60分鐘,100μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞60分鐘作為對照。用p22phox及p47phox抗體免疫沉淀各處理組蛋白。檢測p47phox磷酸化及p22phox與p47phox、Nox2及Nox4的結(jié)合。RAGE受體阻斷劑及CD36受體阻斷劑預處理細胞2小時,重復上述實驗。觀察不同受體阻斷劑對AOPPs誘導NADPH各亞基表達,47phox磷酸化及p22phox與其它亞基的結(jié)合情況。5、AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)ROS生成、來源及相關(guān)的受體轉(zhuǎn)導途徑將關(guān)節(jié)軟骨細胞接種于96孔板中,待細胞生長至90%左右融合時加入AOPPs刺激。實驗前更換不含血清的DMEM,饑餓細胞12小時。用25、50、100、200μg/ml濃度的AOPPs,200μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基作為對照,刺激細胞120分鐘。用熒光探針二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA),檢測不同處理組間細胞內(nèi)ROS的水平觀察濃度效應。濃度為200μg/ml的AOPPs分別刺激關(guān)節(jié)軟骨細胞5、10、20、30、40、50、60、90及120分鐘,后檢測細胞內(nèi)ROS水平觀察時間效應。用不同的受體阻斷劑及不同ROS誘導生成酶系統(tǒng)的阻斷劑預處理細胞,再加入200μg/ml的AOPPs刺激細胞60分鐘。觀察哪些阻斷劑可以阻斷AOPPs誘導的細胞內(nèi)ROS水平升高,以判斷細胞內(nèi)ROS的來源及受體信號轉(zhuǎn)導途徑。將2×104個軟骨細胞接種于35mm激光共聚焦培養(yǎng)皿中。隨后用2000μg/ml的AOPPs、2000μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基作為對照,刺激細胞60分鐘。DCFH-DA孵育細胞后,共聚焦顯微鏡下觀察不同組間細胞內(nèi)ROS生成情況。6、AOPPs激活關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)相關(guān)凋亡信號調(diào)節(jié)分子及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導途徑將關(guān)節(jié)軟骨細胞接種于6cm培養(yǎng)皿中,待細胞生長至90%左右融合時加入AOPPs刺激。實驗前更換不含血清的DMEM,饑餓細胞12小時。用100μg/ml濃度的AOPPs分別刺激細胞6、12、24及48小時,100μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞48小時作為對照。用Western blot法檢測不同處理組間凋亡信號蛋白的表達情況。將2×104個軟骨細胞接種于35mm激光共聚焦培養(yǎng)皿中。隨后用100μg/ml的AOPPs、100μg/ml未經(jīng)修飾的RSA以及單純完全培養(yǎng)基作為對照,刺激細胞24小時。JC-1熒光探針孵育細胞后,共聚焦顯微鏡下觀察細胞線粒體膜電位變化情況。用不同的受體阻斷劑、ROS誘導生成酶系統(tǒng)的阻斷劑及ROS清除劑預處理細胞。再加入l0Oμg/ml的AOPPs刺激細胞48小時。用Western blot法檢測不同處理組間凋亡信號蛋白的表達情況,判斷活性氧及關(guān)節(jié)軟骨細胞表面受體在凋亡信號激活中的作用。7、阻斷不同層面信號轉(zhuǎn)導途徑,對AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的影響。用RAGE及CD36受體阻斷劑、NADPH氧化酶抑制劑(DPI和apocynin)、ROS清除劑(catalase和SOD)、Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)預處理關(guān)節(jié)軟骨細胞。再加AOPPs刺激,用AnnexinV-FITC/PI雙熒光標記流式細胞術(shù)及細胞凋亡ELISA試劑盒,檢測不同層面信號阻斷劑對AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的的影響。8、統(tǒng)計學分析:實驗所攝圖片為鏡下隨機獲得,CCK8實驗重復5次,其余所有實驗均重復3次。每個實驗指標取這些數(shù)據(jù)的平均值,以均數(shù)±標準差表示所有統(tǒng)計結(jié)果應用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0完成。多個樣本均數(shù)的比較采用One-Way ANOVA方法,在做兩兩比較時先計算方差齊性,當方差齊時兩兩比較采用LSD法,方差不齊時兩兩比較采用DunnettsT3法;多個樣本非參數(shù)比較采取多個獨立樣本非參數(shù)檢驗(K Independent Samples Test),當p0.05時為具有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果:1、AOPPs能誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡流式細胞術(shù)示:單純完全培養(yǎng)基、2000μg/ml未經(jīng)修飾的RSA及25、50、100、200μg/ml濃度AOPPs組,關(guān)節(jié)軟骨細胞的凋亡率分別為5.4%、4.6%、7.5%、8.2%、9.1%及15.4%。與對照組相比隨著AOPPs濃度的增加,關(guān)節(jié)軟骨細胞的凋亡率逐漸升高。激光共聚焦顯微鏡下觀察可見:與對照組相比,鏡下綠色熒光標記陽性(代表早期凋亡)與紅綠色雙熒光標記陽性(代表晚期凋亡)的細胞明顯增加。預先加入NADPH氧化酶抑制劑apocynin,可減少AOPPs組凋亡細胞的數(shù)量。ELISA結(jié)果顯示:單純完全培養(yǎng)基、200μg/ml未經(jīng)修飾的RSA及25、50、100、2000μg/ml濃度AOPPs組,關(guān)節(jié)軟骨細胞質(zhì)中組蛋白相關(guān)的DNA碎裂片段值分別為0.51、0.49、0.65、0.74、0.72及0.71。與對照組相比AOPPs處理組細胞質(zhì)中組蛋白相關(guān)的DNA碎裂片段明顯增多,50μg/ml濃度AOPPs處理組數(shù)值最高。單純完全培養(yǎng)基、50μg/ml未經(jīng)修飾的RSA及50μg/ml濃度AOPPs刺激12、24、48小時組的組蛋白相關(guān)的DNA碎裂片段值分別為0.52、0.49、0.75、0.84及0.94,隨刺激時間增加,含量逐漸升高。2、AOPPs通過RAGE而非CD36受體途徑,激活關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)NADPH氧化酶系統(tǒng)與對照組相比,AOPPs刺激后p47phox磷酸化水平、p22phox與p47phox、Nox2及Nox4復合物含量在5分鐘時即開始增高。說明AOPPs能快速激活關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)NADPH氧化酶系統(tǒng)。此外與對照組相比,AOPPs刺激后Western blot結(jié)果顯示:NADPH氧化酶各亞基包括p22phox、p47phox、Nox2及Nox4蛋白表達上調(diào),為NADPH氧化酶的持續(xù)激活提供了條件。封閉RAGE和CD36重復上述實驗結(jié)果顯示:RAGE受體信號阻斷劑(可溶性封閉型RAGE抗體及不含細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導結(jié)構(gòu)的可溶性RAGE多肽)能抑制AOPPs對細胞內(nèi)NADPH氧化酶系統(tǒng)的激活及NADPH氧化酶各亞基蛋白表達的上調(diào),而CD36受體信號阻斷劑(可溶性封閉型CD36抗體)不具備此效應。說明AOPPs對關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)NADPH氧化酶系統(tǒng)的激活,主要由RAGE而非CD36受體介導。3、AOPPs通過RAGE受體途徑,誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)NADPH氧化酶依賴的ROS生成與對照組相比AOPPs刺激后,細胞內(nèi)ROS水平在5分鐘時即開始增高,并且隨著時間的推移其含量不斷增高,呈現(xiàn)濃度和時間依賴效應。共聚焦顯微鏡下觀察,進一步證明AOPPs可誘導細胞內(nèi)ROS水平增高。此外用NADPH氧化酶抑制劑apocynin預處理細胞,可極大的降低AOPPs誘導的細胞內(nèi)ROS生成。為進一步闡明細胞內(nèi)ROS的來源,用不同ROS誘導生成酶系統(tǒng)的阻斷劑預處理細胞。結(jié)果顯示ROS清除劑(SOD和catalase)、NADPH氧化酶抑制劑(apocynin和DPI)可極大的降低AOPPs誘導的細胞內(nèi)ROS生成;而線粒體呼吸鏈抑制劑(retenone和TIFA)及一氧化氮合酶抑制劑L-NAME不具備此效應。最后為證實AOPPs誘導細胞內(nèi)ROS生成的受體信號來源,AOPPs刺激前用可溶性封閉型RAGE抗體、可溶性RAGE多肽及可溶性封閉型CD36抗體預處理細胞。結(jié)果顯示:阻斷RAGE受體能較大程度的阻斷AOPPs誘導的ROS生成,而阻斷CD36受體不具備此效應。說明AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)ROS生成的信號,由RAGE受體轉(zhuǎn)導。4、AOPPs刺激觸發(fā)關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)源性凋亡通路的激活內(nèi)源性凋亡通路主要由線粒體功能障礙及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導。在AOPPs的刺激下Western blot結(jié)果顯示:線粒體凋亡通路中的促凋亡分子Bax、Cytochrome C表達上調(diào),而抗凋亡分子Bcl-2表達下調(diào);內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路中的促凋亡分子Chop及Cleaved caspase-12表達上調(diào);它們下游共同的促凋亡分子Cleaved caspase-9及Cleaved caspase-3水平上調(diào),而具備受損DNA修復功能的抗凋亡分子PARP水平下調(diào)。激光共聚焦顯微鏡下觀察:AOPPs刺激可導致細胞線粒體膜電位水平的下降。預先孵育NADPH氧化酶抑制劑apocynin,可較大程度的逆轉(zhuǎn)AOPPs所致的線粒體膜電位水平下降。上述實驗證明AOPPs可激活,由線粒體功能障礙及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的內(nèi)源性凋亡通路。5、AOPPs對關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)源性凋亡通路的激活由RAGE受體及NADPH來源的ROS介導為闡明AOPPs觸發(fā)的內(nèi)源性凋亡通路的受體信號轉(zhuǎn)導途徑。在AOPPs刺激前用可溶性封閉型RAGE抗體、可溶性RAGE多肽及可溶性封閉型CD36抗體預處理細胞。Western blot結(jié)果顯示:封閉RAGE受體可逆轉(zhuǎn)AOPPs誘導的內(nèi)源性凋亡通路中促凋亡分子Bax、Cytochrome C、Chop、Cleaved caspase-12、Cleaved caspase-9及Cleaved caspase-3水平的上調(diào);同時可逆轉(zhuǎn)AOPPs誘導的內(nèi)源性凋亡通路中抗凋亡分子Bcl-2和PARP的下調(diào);而封閉CD36受體不具備此效應。說明AOPPs觸發(fā)的內(nèi)源性凋亡通路激活,受RAGE受體調(diào)控。為闡明NADPH來源的ROS,是否為AOPPs觸發(fā)的內(nèi)源性凋亡通路的上游信號分子。在AOPPs刺激前,預先加入ROS清除劑(SOD和catalase)及NADPH氧化酶抑制劑(apocynin 和 DPI)。Western blot 結(jié)果顯示:預先加入 SOD、catalase、apocynin和DPI,可較大程度的抑制AOPPs對內(nèi)源性凋亡通路的激活。說明NADPH來源的ROS,為AOPPs激活的內(nèi)源性凋亡通路中的上游信號分子。6、RAGE受體封閉、抑制NADPH氧化酶、清除細胞內(nèi)ROS及抑制Caspase可逆轉(zhuǎn)AOPPs誘導的關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡為驗證阻斷不同層面的信號轉(zhuǎn)導,對AOPPs誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡作用的影響。在AOPPs刺激前用可溶性封閉型RAGE抗體、可溶性RAGE多肽、可溶性封閉型CD36抗體、NADPH氧化酶抑制劑apocynin、ROS清除劑SOD和Caspase抑制劑Z-VAD-FMK預處理細胞。AnnexinV-FITC/PI雙熒光標記流式細胞術(shù)及Cell Death Detection ELISA結(jié)果顯示:封閉RAGE受體、抑制NADPH氧化酶、清除細胞內(nèi)ROS及抑制Caspase,可逆轉(zhuǎn)AOPPs誘導的軟骨細胞凋亡及胞質(zhì)中組蛋白相關(guān)的DNA碎裂片段的升高;而封閉CD36受體不具備此效應。結(jié)論本實驗在體外證明了:AOPPs可激活關(guān)節(jié)軟骨細胞內(nèi)源性凋亡通路,進而誘導細胞凋亡;NADPH來源的ROS是該效應重要的上游信號分子;該效應一系列信號通路的激活由RAGE受體轉(zhuǎn)導。這些實驗現(xiàn)象提示:在RA患者體內(nèi)蓄積的新型致炎因子AOPPs�？赏ㄟ^RAGE受體,激活NADPH氧化酶,觸發(fā)細胞內(nèi)ROS生成,通過氧化還原敏感的內(nèi)源性凋亡信號通路誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡,進而參與了 RA的發(fā)生發(fā)展。針對AOPPs病理生物學效應的阻斷方式,可能為防治RA提供新的治療思路。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R593.22

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8 袁經(jīng)陽;;膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎病變與細胞凋亡及相關(guān)基因表達關(guān)系[J];中醫(yī)臨床研究;2011年02期

9 邢濤;董林;魏國俊;雷寧波;王志勇;徐玉德;;骨刺消巴布劑對兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的影響[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2012年11期

10 宋長志;鄭閩前;周曉曄;紀標;楊升全;董啟榕;;創(chuàng)傷后早期關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸對關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的影響[J];實用骨科雜志;2013年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李建華;黃建榮;盧佳怡;樊雪萍;許繼德;;胰島素樣生長因子-I對白介素-1誘導軟骨細胞凋亡的抑制作用[A];中國生理學會第21屆全國代表大會暨學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

2 周小莉;李榮亨;;軟骨細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導[A];全國中西醫(yī)結(jié)合強直性脊柱炎專題研討會論文匯編[C];2007年

3 沈霖;楊艷萍;;維甲酸誘導的軟骨細胞凋亡動態(tài)觀察[A];中華醫(yī)學會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學術(shù)會議暨中華醫(yī)學會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 林木南;李西海;林葉青;劉獻祥;曾金雄;劉建華;郭健紅;梁永剛;涂向東;劉慶紅;;動態(tài)溫熱疏密波對軟骨細胞凋亡調(diào)控基因表達的影響[A];2012·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會第三次會議論文集[C];2012年

5 沈霖;沈耀;楊述華;;丹參注射液對維甲酸誘導的軟骨細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學術(shù)會議暨中華醫(yī)學會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

6 沈霖;沈耀;楊述華;;丹參注射液對維甲酸誘導的軟骨細胞凋亡的影響[A];2012·中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會第三次會議論文集[C];2012年

7 劉建;樊冰;周海蓉;姜萍;周翠英;;四妙丸干預實驗性兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡與增殖的實驗研究[A];第十一屆全國中醫(yī)風濕病學術(shù)研討會專輯[C];2006年

8 趙慶華;田紀偉;賈連順;;重組腺病毒介導SOX-9基因?qū)︻i椎關(guān)節(jié)突軟骨細胞凋亡的影響[A];泛長江流域骨科新進展暨第九屆全國骨科護理研討會論文匯編[C];2007年

9 周正新;;生脈片對IL-1介導體外培養(yǎng)軟骨細胞凋亡的影響[A];中醫(yī)藥理論與應用研究——安徽中醫(yī)藥繼承與創(chuàng)新博士科技論壇論文集[C];2008年

10 潘浩;胡慶豐;章煜銘;李雄峰;邊紅光;;補腎壯筋湯對兔早期實驗性骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡及PCNA表達的影響[A];全國中西醫(yī)結(jié)合學會骨傷科專業(yè)委員會第十二次學術(shù)年會浙江省中西醫(yī)結(jié)合學會骨傷科專業(yè)委員會第十次學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 袁鳳來;質(zhì)子感知受體OGR1介導胞內(nèi)Ca~(2+)水平調(diào)控椎間盤終板軟骨細胞凋亡及機制[D];復旦大學;2014年

2 趙寶祥;基于IL-1β/MAPKs通路探討威靈仙總皂苷對骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學;2016年

3 吳騫;晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡及相關(guān)機制的研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

4 夏天;胰島素樣生長因子-Ⅰ抑制體外培養(yǎng)的兔軟骨細胞凋亡及對細胞內(nèi)游離鈣影響的實驗研究[D];華中科技大學;2006年

5 劉軍;雌激素與骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制關(guān)系的研究[D];吉林大學;2009年

6 葉春婷;Caspase 3 siRNA抑制軟骨細胞凋亡及治療骨關(guān)節(jié)炎研究[D];暨南大學;2009年

7 金連峰;單味中藥骨碎補對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡作用的實驗研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2009年

8 胡建華;骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

9 張梅;馬錢子對骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細胞凋亡與增殖的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2003年

10 張洪;細胞凋亡與骨關(guān)節(jié)炎[D];中南大學;2008年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 廖邦強;GGCX對兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的影響及其對IL-1β、TNF表達的影響[D];南昌大學醫(yī)學院;2015年

2 任莎莎;低強度脈沖超聲波經(jīng)PI3K/Akt力化學傳導通路對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡的作用研究[D];南京醫(yī)科大學;2015年

3 李美玲;人PERK和ATF4基因siRNA腺病毒的構(gòu)建及對軟骨細胞凋亡的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 馮誠;姜黃素對硝普鈉誘導的兔軟骨細胞凋亡的作用與機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

5 陳啟鑫;黃原膠抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡及其作用機制的研究[D];錦州醫(yī)科大學;2016年

6 李健;17-β雌二醇抑制IL-1β誘導的軟骨細胞凋亡的作用機制研究[D];南昌大學;2016年

7 詹碧水;壓應力對體外培養(yǎng)軟骨細胞凋亡和增殖的影響[D];蘇州大學;2008年

8 王傳家;一氧化氮誘導兔關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的實驗研究[D];汕頭大學;2001年

9 榮超;酸敏感離子通道在酸誘導的大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡中的作用及其線粒體途徑機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

10 王毅鵬;5-氮雜脫氧胞苷誘導兔軟骨細胞凋亡的實驗性研究[D];中南大學;2008年

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本文編號：1903198