本文選題：艾滋病 + THP-1�。� 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2017年碩士論文

【摘要】：艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)的簡稱,是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染機體引發(fā)的一種以免疫細胞功能缺陷、反復機會性感染及惡性腫瘤為主要特點的綜合癥。在HIV感染機體過程中,天然免疫的潛在作用逐漸受到人們的重視,固有免疫細胞作為機體免疫系統(tǒng)中一個重要的組成部分,可對入侵的病原體產(chǎn)生快速應答,也可對體內損傷、衰老或畸變的細胞進行清除,在發(fā)揮非特異性免疫應答的同時還會參與激活適應性免疫應答。其中巨噬細胞(Macrophage,Mφ)和樹突狀細胞(Dendritic cells,DCs)是固有免疫反應中發(fā)揮作用最為顯著的兩種固有免疫細胞,在天然免疫和獲得性免疫間起橋梁作用,本文圍繞這兩種細胞進行了以下研究:第一部分:漿細胞樣樹突狀細胞在SHIV病毒感染猴不同組織內的分布變化。漿細胞樣樹突狀細胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)來源于骨髓,約占外周血單個核細胞的0.2%-0.8%,在免疫應答和免疫耐受中發(fā)揮重要作用。SIV感染猴的外周血、骨髓、脾臟和肝臟等多個組織中pDCs的數(shù)量均會出現(xiàn)顯著的降低,而腸道及相關淋巴結內pDCs的數(shù)量卻出現(xiàn)了不同程度的增高。導致細胞數(shù)量發(fā)生變化的原因可能有以下兩個方面:一方面是病毒感染細胞后誘導其凋亡;另一方面是pDCs表面誘導細胞向腸道歸巢的α4β7表達增高,使得pDCs向腸道轉移。當病毒通過粘膜系統(tǒng)感染機體時,腸道會成為病毒復制的主要場所,此時所釋放的細胞因子或炎性趨化因子誘導外周淋巴器官內的pDCs向腸道轉移并被激活,激活的pDCs如果可以攜帶大量病毒通過輸入淋巴管進入淋巴結,那將會給病毒對靶細胞CD4+T細胞的感染帶來很大的便利,促進病毒對機體免疫系統(tǒng)的破壞。但是目前僅有研究表明pDCs可通過高內皮靜脈(High endothelial venule,HEV)進入LN,那pDCs能否通過輸入淋巴管進入LN呢?本文使用SHIVSF162P3病毒感染的恒河猴做為動物模型,定期檢測血漿病毒載量和CD4+/CD8+T細胞的比值。動物模型構建成功后,對實驗動物執(zhí)行安樂死,獲取所需組織及外周血,通過流式細胞術和免疫組織化學染色兩種方法檢測不同組織中pDCs的變化。流式實驗結果顯示,SHIVSF162P3病毒感染后,恒河猴的外周血和脾臟內pDCs的數(shù)量變化無統(tǒng)計學差異,而腋窩LN和腹股溝LN內pDCs的數(shù)量出現(xiàn)了顯著增加。而且在免疫組織化學染色的結果中,感染恒河猴腋窩LN和腹股溝LN內pDCs的數(shù)量同樣出現(xiàn)了明顯的增加;結腸淋巴結中單位面積內pDCs的數(shù)量有所降低,頜下淋巴結、腎門淋巴結、脾門淋巴結、腸旁淋巴結等組織中pDCs的數(shù)量變化并無統(tǒng)計學差異。利用外周淋巴結的連續(xù)切片進行T細胞、pDCs和HEV的免疫組化染色,結果顯示正常恒河猴淋巴結內的pDCs散在分布于皮質區(qū)內,而SHIVSF162P3感染猴外周淋巴結內的大部分pDCs集中分布于靠近被膜的區(qū)域,但其周圍也有HEV存在。本論文通過流式細胞術和免疫組織化學等方法,比較了正常恒河猴與SHIV感染恒河猴的外周血單個核細胞、脾臟和淋巴結內pDCs數(shù)量的變化及其分布情況,揭示了 pDCs細胞與SHIV病毒感染間的關系,解析了 SHIV病毒感染后淋巴結內pDCs的分布和轉移途徑,有助于我們對艾滋病病毒感染機體過程中pDCs細胞的組織分布、生物學特性和功能的深入了解。第二部分:THP-1單核細胞系向巨噬細胞和樹突狀細胞分化的相關研究。由于原代巨噬細胞和樹突狀細胞在體內存在的數(shù)量較少,而且分離過程較繁瑣,因此目前多利用單核細胞系THP-1誘導分化出的Mφ和DCs代替原代細胞進行相關功能實驗的研究。但是在細胞分化過程中仍有很多問題有待明確,如單獨使用PMA刺激THP-1細胞所分化而來的Mφ細胞的分化特征,以及不同方法刺激THP-1細胞定向分化為M1、M2型巨噬細胞和DCs細胞的差異等。本文主要針對以上兩個科學問題進行了深入研究,首先將一部分細胞用PMA刺激THP-1細胞分化為THP-1-Mφ,再分別使用不同細胞因子將細胞繼續(xù)誘導成THP-1-M1、THP-1-M2和THP-1-DC;另一部分細胞用GM-CSF/M-CSF代替PMA進行刺激,其余細胞因子的使用不變。在顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學改變,并用流式細胞術檢測各細胞主要CD分子表達的差異。實驗結果發(fā)現(xiàn),PMA誘導分化成的THP-1-Mφ細胞變?yōu)橘N壁生長,細胞形態(tài)呈較規(guī)則的圓形或橢圓形;當繼續(xù)分化為M1和M2后細胞仍貼壁生長,但細胞表面出現(xiàn)較明顯的突起。而且THP-1-Mφ表面與抗原提呈功能相關的CD分子的表達均較低,大部分呈陰性;而THP-1-M1和THP-1-M2細胞表面這些CD分子的表達均較高。因此可以認為單獨使用PMA刺激THP-1細胞所分化而來的巨噬細胞抗原提呈能力較弱,基本處于靜息狀態(tài)。PMA和GM-CSF/M-CSF兩種方法誘導分化成的細胞形態(tài)差異較大,PMA方法誘導成的THP-1-M1、THP-1-M2和THP-1-DC細胞均貼壁生長;而GM-CSF/M-CSF方法刺激出的細胞中只有THP-1-DC細胞部分貼壁,M1和M2細胞仍呈懸浮生長。而且兩種方法誘導成的同種細胞對特異性CD分子的表達情況基本相同。THP-1-M1細胞表面CD80和CD86表達量顯著增加;THP-1-M2細胞高表達CD163和CD209;THP-1-DC細胞CD14表達量顯著降低,高表達CD80、CD86和CD11c。因此認為兩種方法均能成功地誘導THP-1細胞向不同細胞亞型分化,但是誘導出來的細胞在形態(tài)上存在一定差異,可根據(jù)實驗需求選擇刺激方法。
[Abstract]:Human immunodeficiency syndrome ( AIDS ) is the abbreviation of acquired immunodeficiency syndrome ( AIDS ) , which is caused by human immunodeficiency virus ( HIV ) infection . The changes of pDCs in peripheral blood and lymph nodes of rhesus monkeys were investigated by flow cytometry and immunohistochemistry . The results showed that the number of pDCs in peripheral blood and lymph nodes of rhesus monkeys increased significantly . The expression of CD80 and CD209 in THP - 1 - M1 cells was significantly lower than that in THP - 1 - M1 cells .
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R512.91

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本文編號：1902225