本文選題：明膠水解物 + 大豆蛋白水解物　； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：骨質(zhì)疏松癥是一種多因素所致的慢性疾病,其病因與年齡、雌激素下降、營養(yǎng)失調(diào)、免疫以及遺傳等多方面因素有關(guān),其癥狀主要表現(xiàn)是骨密度降低、骨組織微觀結(jié)構(gòu)的破壞。傳統(tǒng)的骨質(zhì)疏松類藥物如鍶制劑、護骨素等有一定的療效;但是臨床治療中藥物的使用劑量、合理配伍及藥物的副作用仍然困擾著人們。因此研究和開發(fā)無副作用、促骨骼健康的食品原料尤為重要。蛋白質(zhì)和氨基酸是骨內(nèi)有機質(zhì)合成的必不可少的原料,蛋白質(zhì)的長期缺乏可導致骨基質(zhì)合成的降低,最終引發(fā)骨質(zhì)疏松癥。另一方面,高蛋白的攝入同樣不利于骨健康,會導致過多的鈣流失和骨吸收,最終抑制骨的礦化。因此食品蛋白質(zhì)與骨健康之間的關(guān)系需要充分研究和評估。本研究采用鮭魚皮明膠、大豆蛋白和酪蛋白,經(jīng)木瓜蛋白酶水解后,得到三種不同水解程度的明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物,并評估九種水解物對人成骨細胞h FOB1.19的細胞增殖,細胞周期循環(huán)和凋亡的影響。CCK-8實驗結(jié)果表明,明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物對成骨細胞均具有明確的增殖促進作用,細胞活性分別增加到103% 134%、104% 123%和100% 114%,水解物的水解度高,增殖促進作用大。流式細胞術(shù)結(jié)果分析表明,明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物均可不同程度的加速細胞周期循環(huán),S期細胞比例分別由50.5%提高到67.4%、60.5%和56.5%,這一結(jié)果進一步證實了三種蛋白水解物對成骨細胞的增殖促進作用。明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物對依托泊苷和氟化鈉誘導的成骨細胞凋亡也有拮抗作用。凋亡預防試驗中,凋亡細胞比例由31.6%分別下降到13.6%、15.6%和22.6%(依托泊苷組),或者由19.5%分別下降到11.3%、12.4%和17.7%(氟化鈉組)。凋亡逆轉(zhuǎn)試驗中,明膠水解物和大豆蛋白水解物使成骨細胞凋亡比例由13.3%比例分別下降至11.8%和11.7%(依托泊苷組),或者由14.5%下降到12.4%和11.0%(氟化鈉組)。酪蛋白水解物對依托泊苷和氟化鈉誘導的成骨細胞凋亡未檢測出逆轉(zhuǎn)作用�？傮w上看,明膠水解物對成骨細胞的增殖促進和抗凋亡作用好于大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物。采用基因芯片技術(shù)和RT-PCR方法檢測和驗證明膠水解物對成骨細胞中基因的表達改變。分析結(jié)果表明,h FOB1.19細胞經(jīng)明膠水解物作用后,與細胞增殖,細胞周期循環(huán)和細胞凋亡相關(guān)的基因發(fā)生變化,其中,MPHOSPH1和PAK1LP1的表達倍數(shù)被上調(diào),RPS6KA2、JNK1、JNK3和JNKK這四種基因的表達倍數(shù)均被下調(diào)。免疫蛋白印記法檢測JNK家族的蛋白變化,結(jié)果表明,明膠水解物是通過調(diào)控JNK信號通路,從而拮抗成骨細胞的凋亡。綜上所述,三種蛋白質(zhì)水解物尤其是明膠水解物對成骨細胞具有增殖促進作用并且抑制其凋亡,并且,明膠水解物是通過調(diào)控JNK信號通路拮抗成骨細胞凋亡,從而可能產(chǎn)生抗骨質(zhì)疏松的作用。本結(jié)果為活性肽預防療骨質(zhì)疏松癥提供新的理論依據(jù)。
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本文編號：1734287